許崇輝 溫巧玲 劉慧智 潘 芳 程樹軍 李妙珍

(廣東出入境檢驗檢疫局 廣東廣州 510623)

1 前言

戊二醛是具有刺激性的化學試劑，作為一種高效的消毒劑和滅菌劑已被國內(nèi)醫(yī)院廣泛使用，同時也作為佐劑用于皮革業(yè)。其在生產(chǎn)使用過程中的安全性一直是有些爭議。有些研究者認為[1，2]，戊二醛對眼睛、皮膚和粘膜有強烈的刺激作用，并有全身性和局部性的致敏反應。另一些研究認為[3,4]，戊二醛是刺激性小、腐蝕性弱、低毒、安全的消毒劑和滅菌劑。

戊二醛生產(chǎn)和使用過程中，局部接觸方式是其對人體造成損傷的一個重要的方式。為了全面了解戊二醛的毒性，本研究在對某品牌25%戊二醛溶液進行了急性經(jīng)皮、急性吸入和急性經(jīng)口等急性毒性實驗和遺傳毒性研究的基礎上[5，6]，對其進行局部毒性的研究。分別用實驗兔和豚鼠對戊二醛溶液進行了皮膚刺激性實驗、眼刺激性實驗、皮膚過敏性試驗和皮膚光毒性的動物實驗，為生產(chǎn)場所安全和生產(chǎn)使用者的個人防護提供參考依據(jù)；并對不同實驗條件下，實驗結(jié)果的差異作一些理論性的探討解析。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 受試物

2.1.2 實驗動物和飼料

由廣東省醫(yī)學實驗動物中心（實驗動物生產(chǎn)許可證編號：SCXK（粵）2008-0002）提供。新西蘭兔實驗動物合格證號：NO 0063286，體重2.1-2.6 kg。Hartley豚鼠，普通級，體重248.2-351.6g，皮膚致敏試驗和皮膚光毒性試驗合格證號分別為：NO.0068246和NO.4407207100。試驗前在動物房適應5d。

2.1.3 實驗環(huán)境

SPF級動物房和普通級動物房，實驗動物使用許可證編號：SYXK（粵）2008-0086。實驗期間，室溫22℃±1℃，相對濕度58%-68%。

2.1.4 實驗主要儀器試劑

HOPE-MED 8130A型皮膚光毒儀(天津開發(fā)區(qū)合普貿(mào)易公司產(chǎn)品）；裂隙燈（蘇州康捷醫(yī)療股份有限公司產(chǎn)品）；8-甲氧基補骨脂（8-MOP）（武漢遠程藥業(yè)有限公司,純度99%）、2，4-二硝基氯代苯（東京化成工業(yè)株式會社，分析純），熒光素鈉（南京化學試劑有限公司，醫(yī)藥級）；

2.2 方法

2.2.1 急性皮膚刺激性/腐蝕性試驗[7]

試驗樣品用蒸餾水稀釋為濃度為4%和0.4%，每個濃度選4只健康成年新西蘭兔，雌性各半，體重2.1-2.6 kg。試驗前24h，將實驗動物背部脊柱兩側(cè)毛剪掉，取受試物0.5 mL直接涂布在一側(cè)去毛區(qū)域2.5 cm×2.5cm大小的皮膚上，斑貼覆蓋，用無刺激性膠布和繃帶加以固定。另一側(cè)去毛區(qū)域皮膚用斑貼覆蓋作為對照。貼敷4h后用溫水清除殘留受試物。于清除受試物后的24、48和72h分別觀察受試部位皮膚反應癥狀,記錄每一觀察時點的皮膚反應分值。

2.2.2 急性眼刺激性/腐蝕性試驗[8]：

專家共識推薦:建議視情況采用不同的切除方式，除TaG1/LG(低級別)腫瘤外，所有標本中都要求有逼尿肌組織。

濃度為4%和0.4%，每個濃度選4只健康成年新西蘭兔，雌性各半，實驗時，取受試物0.1mL滴入家兔左側(cè)結(jié)膜囊內(nèi)，使上、下眼瞼被動閉合1s。家兔右側(cè)眼睛不處理作為對照。在滴入受試物后的1、24、48、72h以及第4天和第7天對家兔眼睛進行檢查（包括在24h用1%熒光素鈉溶液對兔眼角膜的檢查）。按方法相關內(nèi)容進行眼損害評分并記錄。

2.2.3 皮膚致敏試驗[9]

將40只豚鼠隨機分為受試物組、陽性對照組和陰性對照組。受試物組20只豚鼠，陽性對照組、陰性對照組各10只豚鼠，每組雌雄各半。根據(jù)皮膚刺激實驗結(jié)果設置戊二醛致敏試驗的濃度為0.04%和0.2%；陽性對照物采用0.5%、1.0%2，4-二硝基氯代苯二甲基亞砜溶液。（1）誘導接觸：將受試物0.4m L涂在豚鼠去毛區(qū)皮膚2 cm×2 cm的區(qū)域上，斑貼覆蓋，再用無刺激性膠布封閉固定6h。陽性對照組涂0.15mL 1% 2，4-二硝基氯代苯二甲基亞砜溶液，陰性對照組去毛區(qū)皮膚涂以0.4 mL蒸餾水作為對照。第7d和第14d以同樣方法重復一次。（2）激發(fā)接觸：在末次誘導后第14d，即實驗第28d，將0.5 mL的受試物涂于受試物組和陰性對照組豚鼠背部右側(cè)2 cm×2 cm去毛區(qū)（接觸前24h剃毛），然后用斑貼覆蓋，再封閉固定6h。陽性對照組用0.15mL 0.5% 2，4-二硝基氯代苯二甲基亞砜溶液作相同的激發(fā)接觸。于激發(fā)接觸后24h和48h觀察受試部位皮膚反應。

2.2.4 皮膚光毒性試驗[10]：

設樣品組和陽性對照組，每組6只豚鼠，雌雄各半。樣品組根據(jù)急性皮膚刺激性實驗的結(jié)果，以2%濃度的戊二醛溶液作為受試物。陽性對照物為0.05% 8-甲氧基補骨脂（8-MOP）乙醇溶液。光毒儀在365nm波長UVA強度均值為4.7 mW/cm2。UVA照射時間為36min。按《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007版）皮膚光毒性試驗實驗操作。分別于照射結(jié)束后1、24、48和72h觀察皮膚反應，判定每只動物皮膚反應評分。

3 結(jié)果

3.1 急性皮膚刺激性/腐蝕性試驗

實驗結(jié)果觀察顯示，濃度為4%的實驗動物在用溫水清除殘留受試物1h后的觀察時點就可見紅斑，在48h后達到高峰，受試部位皮膚刺激反應從第3d開始恢復，在恢復過程中起黃色薄片狀物，會逐漸脫落，在第7d后實驗部位的皮膚基本恢復正常，在恢復過程中起黃色薄片狀物，會逐漸脫落。48h觀察到最高皮膚反應積分均值均2.50,屬中度皮膚刺激性反應；濃度為0.4%的實驗動物在紅斑癥狀出現(xiàn)的時間、高峰值和持續(xù)時間都比4%濃度組動物反應輕微，72h觀察到最高皮膚反應積分均值均為1.00，屬輕度皮膚刺激性反應。二個濃度的動物均未觀察到水腫癥狀。

3.2 急性眼刺激性/腐蝕性試驗：

實驗結(jié)果觀察顯示，滴入受試物后立即引起動物強烈不適，1h后可見眼結(jié)膜、虹膜充血、水腫，24h檢查時，見4%濃度組動物角膜全部渾濁，虹膜無法辨認，結(jié)膜充血、水腫嚴重，眼臉外翻，閉合；0.4%濃度組動物1/4角膜渾濁，結(jié)膜充血、水腫較重，部分眼臉外翻。在隨后的檢查發(fā)現(xiàn)，4%濃度組動物在第72h獲得最高加權總積分均值84分，在第4天和第7天時已損壞到不能檢查記分，眼結(jié)構(gòu)完全破壞，直至實驗結(jié)束未能恢復，屬極重度刺激性反應；0.4%濃度組動物最高加權總積分均值11分在24h觀察到，隨后逐漸恢復，在實驗第7天基本恢復正常，實驗第14天完全恢復。

3.3 皮膚致敏試驗

激發(fā)接觸后24h和48h的觀察檢查可見，受試物組20只豚鼠均未見紅斑、水腫，即受試物組致敏率為0%；陽性對照組10只豚鼠可見紅斑，7只豚鼠可見水腫，積分≥2的豚鼠有7只，即陽性對照組致敏率為70%。

3.4 皮膚光毒性試驗

受試物組6只動物涂受試物后經(jīng)UVA照射去毛區(qū)皮膚反應分值之和≥2的動物數(shù)為0，而陽性對照組6只動物涂0.05% 8-MOP后經(jīng)UVA照射的去毛區(qū)1出現(xiàn)皮膚反應分值之和≥2的動物數(shù)為6。

4 討論

戊二醛是一種具有揮發(fā)性和刺激性的化學試劑，在其生產(chǎn)使用過程中，局部性的皮膚和眼接觸是人體最常見的暴露接觸方式。從本研究的結(jié)果可見，戊二醛對皮膚、眼造成的損傷是不同的，在相同的4%濃度下，對皮膚僅引起“中等程度刺激反應”的損害，而對眼則造成相差2個級別的“極重度刺激性反應”。這種損傷差異，與戊二醛的作用機理和皮膚、眼的組織結(jié)構(gòu)不同有關。戊二醛主要機理是通過它的兩個活潑的醛基基團，在與機體接觸時，醛基基團與組織細胞的蛋白質(zhì)等有機分子結(jié)合，破壞組織細胞分子結(jié)構(gòu)，使其失去生物學活性而造成機體損傷。由于皮膚組織結(jié)構(gòu)比眼嚴密厚實，戊二醛要進入皮下血管，需先與皮膚表面的皮屑、毛發(fā)和結(jié)構(gòu)密實的表皮層等，在此過程中，“消耗”了大量戊二醛活性醛基基團，沒有或只有少量的戊二醛到達皮下血管。而眼組織結(jié)構(gòu)相對疏松，戊二醛可直接作用于眼角膜、結(jié)膜。特別是眼角膜，是主要由蛋白質(zhì)組成的一薄膜。角膜蛋白質(zhì)分子與戊二醛活性醛基基團結(jié)合，變性壞死，角膜結(jié)構(gòu)損傷，在1%熒光素鈉溶液下，呈現(xiàn)為不透明的“渾濁”樣，嚴重影響眼的視力。

在刺激實驗中，二個濃度（4%和0.4%）的皮膚刺激試驗和0.4%濃度的眼刺激試驗的損傷都是可逆性的，在實驗結(jié)束時，試驗動物的皮膚或眼都恢復正常。但，4%濃度的眼刺激試驗的損傷都是不可逆的，是一種不能自身修復的永久性損傷。這幾個濃度值，為今后在制定戊二醛安全防護值和治療處理戊二醛安全事故提供了實驗性資料。

皮膚過敏是一種免疫反應性結(jié)果，其過程包括致敏原受試物進入組織血管，激活機體的免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生抗體的誘導接觸階段，及致敏原再次進入機體，與機體內(nèi)的抗體發(fā)生抗原抗體反應而表現(xiàn)出皮膚紅斑水腫的激發(fā)階段。在本研究中，戊二醛皮膚致敏試驗是陰性，可能是由于戊二醛不容易通過皮膚進入組織血管，并未激活機體的免疫系統(tǒng)，因此，實驗結(jié)果是陰性。至于有些文章認為戊二醛有致敏性，可能是由于戊二醛直接注射到皮下“豚鼠最大值試驗（GPMT)”的結(jié)果，這種實驗方法的特點是受試物給予量大，直接到皮下組織。本研究中使用的實驗方法是未破損皮膚的“局部封閉涂皮試驗（BT)”，這種方法與戊二醛生產(chǎn)使用過程中的實際情況更接近。

在皮膚光毒性試驗，8-MOP陽性對照組動物全部出現(xiàn)光毒癥狀，戊二醛組無一動物未出現(xiàn)光毒癥狀。戊二醛皮膚光毒性試驗陰性，說明戊二醛對紫外光沒有吸收，沒有光毒性。

［1］Ballantyne B, Myers R C.The acute toxicity and primary irritancy of glutaraldehyde solutions [J].Vet Hum Toxicol, 201, 43(4):193-202.

［2］Ballantyne B.Influence of alkalinization of glutaraldehyde biocidal solutions on acute toxicity, primary irritation, and skin sensitization[J].Vet Hum Toxicol, 1997, 39(6):340-346.

［3］ 薛廣波，李云先，顧春英，等.現(xiàn)代消毒學[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2002，311-325.

［4］ 李臨生，張京東，張昌輝.戊二醛消毒劑的特點與應用[J].日用化學工業(yè), 2004, 34(6):385-389.

［5］ 許崇輝，劉慧智，溫巧玲，等.戊二醛急性毒性研究[J].檢驗檢疫學刊，2012，22（4）：22-24.

［6］ 許崇輝，潘芳，溫巧玲，等.戊二醛遺傳毒性研究[J].檢驗檢疫學刊，2013，23（1）：7-10.

［7］GB/T 21604-2008 化學品急性皮膚刺激性/腐蝕性試驗方法[S]

［8］GB/T 21609-2008 化學品 急性眼刺激性/腐蝕性試驗方法[S]

［9］GB/T 21608-2008 化學品皮膚致敏試驗方法[S]

［10］化妝品衛(wèi)生規(guī)范（2007版）毒理學試驗方法 皮膚光毒性試驗[S].