馬恩平 溫波 夏泉

摘要：血栓是心腦血管疾病一個共同的病理改變，心腦血管疾病是威脅人類健康的四大危害之一。氧化應激和抗氧化機制的平衡失調(diào)導致體內(nèi)氧自由基（OFR）過剩與心腦血管疾病的發(fā)生有密切關系。納豆復方產(chǎn)品抗氧化作用的強弱，對修護血管內(nèi)壁、印制血小板凝聚、改善血液流變有著直接的關系，對血栓的預防有較強的作用，所以利用抗氧化能力強弱的評價，對納豆粉、山楂果粉、葡萄水提取及石榴汁粉復方后的比例進行篩選，以間接評價納豆咀嚼片各組分之間的協(xié)同作用，間接評價對血栓形成的預防作用及對心腦血管的保護作用。

關鍵詞：納豆 心腦血管 血栓 抗氧化

中圖分類號：R285 文獻標識碼：A 文章編號：1672-5336（2013）16-0049-05

1 國內(nèi)外納豆應用情況

納豆是一種營養(yǎng)豐富的食品，是目前為數(shù)不多的具有多種保健功能的食品。納豆的加工與技術發(fā)展還是比較落后，消費者對納豆的保健功能了解較少，區(qū)域上，北方較發(fā)達地區(qū)有一定的認識；人群上，有一定經(jīng)濟基礎的人群，并且這部分人大多都患有心血管等慢性疾病，而且這些地區(qū)也是心腦血管高發(fā)地區(qū)。

商務部在2009年4月制訂并發(fā)不了納豆行業(yè)標準，并于2009年12月01日正式實施。此標準的發(fā)布與制定標志著納豆食品的發(fā)展進入了一個嶄新的階段，規(guī)劃了行業(yè)的發(fā)展，解決了產(chǎn)品質(zhì)量良莠不齊的現(xiàn)狀，促進了納豆企業(yè)的技術研究與發(fā)展。納豆在日本的發(fā)展也是經(jīng)歷了相似的階段，對它的認識也有一個過程，所以在中國納豆必定有良好的發(fā)展前景，為心腦血管患者帶來福音。

目前，全球生產(chǎn)納豆激酶原料的國家主要有日本、臺灣。臺灣生產(chǎn)納豆激酶的技術來源于日本，有很多是日本小公司的代加工企業(yè)，在規(guī)模、技術、管理和產(chǎn)品質(zhì)量方面落后于日本。因為其價格優(yōu)勢，占據(jù)了一些納豆激酶膠囊產(chǎn)品的市場。豆激酶原料市場主要在日本，東南亞各國企業(yè)主要從日本進口納豆激酶原料。

國內(nèi)生產(chǎn)納豆提取物粉末生產(chǎn)廠家很少品質(zhì)量低于日本產(chǎn)品，納豆激酶的穩(wěn)定性和納豆菌的定植率很低，但價格便宜。由于納豆激酶規(guī)格差別較大，市場上常見5000fu/g，12000fu/g，2000fu/g三種規(guī)格的產(chǎn)品。

國外生產(chǎn)納豆多肽的主要是韓國。納豆多肽膠囊的保健功能主要與其中的納豆激酶、小分子多肽、L-精氨酸、血管緊張素轉化酶抑制劑、納豆異黃酮、卵磷脂、超氧化物歧化酶SOD、皂青素、維生素K2等多種功能因子有關。

2 血栓與心血管疾病

隨著人們生活水平的提高，人體攝入較多高熱量、高脂肪的食物，形成了健康的隱患。近年來慢性病成逐年增長的態(tài)勢，血栓是血流在心血管系統(tǒng)血管內(nèi)面剝落處或修補處的表面所形成的小塊。血栓由纖維蛋白沉積，網(wǎng)羅白細胞、紅細胞及血小板組成的。心血管疾病，又稱為循環(huán)系統(tǒng)疾病，循環(huán)系統(tǒng)指人體內(nèi)運送血液的器官和組織，主要包括心臟、血管（動脈、靜脈、微血管），可以細分為急性和慢性，一般都是與動脈硬化有關。血栓與心腦血管疾病有著密切的關系。

2.1 心血管病流行趨勢

總體上看，心血管病包括高血壓、心臟病、腦卒中、冠心病的發(fā)病和死亡率呈持續(xù)上升階段。估計全國心血管病2.3億人，其中高血壓2億人，腦卒中至少700萬人，心肌梗死200萬人，心力衰竭420萬人，肺心病500萬人，風心病250萬人，先心病200萬人。每5個成年人中有1人患心血管?。ㄖ袊难懿蟾妫?010）。

2.2 心血管病的危險因素

心血管疾病的危險因素是高血壓、血脂異常、糖尿病、吸煙、超重/肥胖、身體活動不足、膳食營養(yǎng)、代謝綜合征；據(jù)《中國心血管病報告2006》報道，高血壓、吸煙、血脂異常的人群危險度百分比比較高，分別為34.5%、31.9%、11.4%，也就是說，控制好以上三個危險因素即可達到80%的預防效果。

2.3 抗氧化與心腦血管疾病的關系

心腦血管疾病是現(xiàn)今人類健康的第二大殺手，其病因較復雜。近年研究發(fā)現(xiàn)，氧化應激和抗氧化機制的平衡失調(diào)導致體內(nèi)氧自由基（OFR）過剩與心腦血管疾病的發(fā)生有密切關系。因此，可應用抗氧化劑進行防治?；钛鲱愄烊豢寡趸瘎┓乐涡哪X血管疾病的作用機制包括：清除自由基、抑制脂質(zhì)過氧化反應、緩解氨基多糖（透明質(zhì)酸）的解聚作用、擴張血管、抑制血小板聚集、降脂、保護組織免受過氧化損傷等方面（簡潔，梁鋼，2004）。因此使用比較不同配比的抗氧化性能（尤其是清除自由基的能力）的不同來評價對血栓形成的預防作用及對心腦血管的保護的依據(jù)作用。

3 功能原料介紹

3.1 納豆

納豆源于中國，初始于中國的豆豉，是大豆經(jīng)納豆菌發(fā)酵而成，古書記載：“納豆自中國秦漢以來開始制作。”唐代高僧鑒真東渡日本時，帶去了豆豉和豆豉制作技術，最初在納所（寺廟中的廚房）制作，故稱為納豆。有書記載，納豆最初是日本皇室、僧侶、貴族的營養(yǎng)美容品，明治維新以后才流入民間。作為日本的“國寶”，納豆是日本國民膳食結構的重要成分，被認為是日本人長壽的“秘方”，每年7月10日為“納豆節(jié)”。它制作簡單，風味獨特，價格低廉，深受日本人民的喜愛。90%以上的日本家庭都能自制納豆，韓國、美國用“納豆食療法”來預防心腦血管病也有30年歷史。在第二次世界大戰(zhàn)中，由于日本軍隊到處侵略，營養(yǎng)品和藥品匱乏，納豆被定為軍需品，專為軍隊補充營養(yǎng)和防治瘧疾等傳染病所用，當時有“軍艦納豆”之稱。目前，全世界尤其是整個東南亞的人們對納豆的作用高度認可，食用者眾多，納豆制成的保健產(chǎn)品、生物制劑被人們廣泛接受?！渡眢w科學》：作為植物性食品，粗蛋白、粗脂肪最豐富。納豆是高蛋白滋養(yǎng)食品，納豆中含有的醇素，食用后可排除體內(nèi)部分膽固醇，分解體內(nèi)酸化性脂質(zhì)，使異常血壓恢復正常。

納豆是一種類似于我國豆豉發(fā)酵食品。從外觀上看，納豆是大豆熟食發(fā)酵品，色澤灰黃、口感酥軟，用筷子挑起時有很多長長的拉絲樣黏液物質(zhì)（主要成分為類似果聚糖的混合物：果糖和7一多聚谷氨酸），這正是納豆不同于其他豆類食品的特征（鐘青萍等，2003）。

納豆具有很高的營養(yǎng)價值，其蛋白質(zhì)、纖維、鈣、鐵、維生素B2、維生素PP、維生素E的含量均高于煮熟的大豆，特別是維生素B2的量是蒸煮大豆的6倍，纖維、鈣、鐵等多種成分的含量超過雞蛋，但其不含維生素A、維生素C和膽固醇（鐘青萍等，2003）。其主要營養(yǎng)成分如表1所示。其主要營養(yǎng)成分如表1所示。

納豆中含有蛋白酶、多種維生素、γ-谷氨?；D肽酶、γ-多聚谷氨酸等多種物質(zhì)，同時也含有較高的活性物質(zhì)，如納豆激酶、異黃酮、超氧化物歧化酶（SOD）、皂甙素、生育酚、吡啶二羧酸等。納豆具有溶血栓、抗腫瘤、降血壓、抗氧化性、防止骨質(zhì)疏松、促凝血等作用（齊海萍等，2003）。

3.2 葡萄皮水提取物

葡萄別名蒲桃、草龍珠，它不僅味美可口，而且營養(yǎng)價值很高。中醫(yī)認為，葡萄性平、味甘酸、無毒，可以補氣血，舒筋絡，利小便。主治氣血虛弱、肺虛咳嗽、心悸盜汗、煩渴、風濕痹痛、淋病、水腫、痘疹不透。

成熟的葡萄中含糖量高達10%-30%，以葡萄糖為主，可被人體直接吸收。葡萄還含有礦物質(zhì)鈣、鉀、磷、鐵以及多種維生素，人體必需氨基酸?，F(xiàn)代醫(yī)學證明，葡萄中具有抗惡性貧血作用的維生素B12，常飲紅葡萄酒，有益于治療惡性貧血。葡萄還可以抗毒殺菌、利尿消腫、安胎，可治療妊娠惡阻、嘔吐、浮腫等病癥。另外，葡萄中的葡萄糖、有機酸、氨基酸、維生素的含量都很豐富，可補益和興奮大腦神經(jīng)，對治療神經(jīng)衰弱有一定效果。

從葡萄籽中提取出來的多酚物質(zhì)混合物具有多種營養(yǎng)作用，它的主要成分為高效抗氧化劑原花青素以及具有顯著抗癌作用的白藜蘆醇等。另外，葡萄籽提取物中還含有維生素A、維生素D、維生素E和礦物質(zhì)鉀、鈣、鎂等，以及亞油酸和多種氨基酸，具有極佳的保健功能。

葡萄籽提取物原花青素（OPC）是目前國際上公認的清除人體自由基最有效的天然抗氧化劑之一。OPC在人體內(nèi)的活性很強，可以快速被人體所吸收，這是其他抗氧化劑無法比擬的。大量科學研究表明OPC具有減輕過氧化對人體的損害、保護大腦、保護眼睛、減輕過敏反應、美容養(yǎng)顏等保健功效。因為OPC對皮膚膠原蛋白和彈性纖維有著特殊的親和力，可以保護它們不受傷害，減少或延緩皮膚皺紋的出現(xiàn)，長期使用，使皮膚光滑、富有彈性，具有美容養(yǎng)顏的作用。

葡萄中的白藜蘆醇是一種天然抗氧化劑，有保護心血管系統(tǒng)的功效，它比阿司匹林能更好地阻止血栓形成，并能降低人體血清膽固醇水平，降低血小板的凝聚力，對預防心臟血管病癥有一定作用。

歷史記載：

《神農(nóng)本草經(jīng)》：味甘，平。主筋骨濕痹；益氣倍力；強志；令人肥健，耐饑；忍風寒。久食輕身；不老延年。可作酒。

《別錄》：逐水，利小便。

《本草圖經(jīng)》：治時氣發(fā)瘡疹不出者，研酒飲之。

《滇南本草》：大補氣血，舒筋活絡。泡酒服之，治陰陽脫癥，又治盜汗虛證。汁，治咳嗽。

《隨息居飲食譜》：補氣，滋腎液，益肝陰，強筋骨，止渴，安胎。

3.3 山楂

山楂樹是我國特有的藥果兼用樹種，山楂又名山里果、山里紅、紅果，為薔薇科植物山里紅或山楂的干燥成熟果實，質(zhì)硬，果肉薄，味微酸澀。

中醫(yī)認為，山楂性平，味甘酸，入脾、胃、肝經(jīng)，可消積食、散淤血、驅絳蟲，對肉積、癥瘕、痰飲、痞滿、吞酸、瀉痢、腸風、疝氣、產(chǎn)后兒枕痛、惡露不盡，小兒飲食停滯，產(chǎn)后瘀滯腹痛等病癥有良好效果。作為“益壽果”，老年人常食山楂不僅能健胃消食，還能延年益壽，保持骨骼、血液中鈣的恒定，預防動脈粥樣硬化。

山楂含有苷類、有機酸、黃酮、萜類、維生素C、核黃素、胡蘿卜素、蛋白質(zhì)、脂肪、解脂酶等成分，經(jīng)現(xiàn)代藥理研究證明，這些成分中，總黃酮類可促使心血管擴張，具有降血壓的作用；黃酮類中的表兒茶素、多酚類縮合黃烷聚合物及有機酸中的總三萜酸等不飽和酸是降血脂的活性成分；維生素C、維生素B2、胡蘿卜素及多種有機酸，口服能增加胃中消化酶的分泌，并增強酶的活性，促進消化，其中所含的解脂酶能直接幫助消化脂肪類食物，且可加強胃脂肪酶、蛋白酶的活性。因此，山楂具有增加心肌收縮力、增加心輸出量、減慢心律、降壓、降血脂、健脾消食等多種作用。此外，山楂還具有促進子宮收縮、抑菌等多方面作用，不僅可用于治療心血管系統(tǒng)疾病、消化系統(tǒng)疾病及婦科疾病，可廣泛用于預防、保健、健身及美容行業(yè)，是常見的藥食兩用原料。

山楂具有強心作用，山楂具有增加心肌收縮力、增加心輸出量、減慢心律的作用。山楂黃酮，山楂浸膏，山楂水提物，均可對蟾蜍在體、離體、正常及疲勞的心臟有一定程度的強心作用，心臟收縮幅度提高20%～30%，且持續(xù)作用較長（孫翠玉，2001）。

山楂具有降壓作用，山楂中的總黃酮類可促使心血管擴張，產(chǎn)生降血壓的作用。余家桓等研究表明，當山楂水提物腹腔注射2.0mg/kg時，只有一定的降壓效應，降壓率為9%（李剛等，2009）。

山楂具有降血脂作用，山楂黃酮類中的表兒茶素、多酚類縮合黃烷聚合物及有機酸中的總三萜酸等不飽和酸是降血脂的活性成分（李剛等，2009）。

口服山楂對胃腸功能紊亂有明顯調(diào)整作用，達到健脾消食作用。李時珍在《本草綱目》中曰：“煮老雞硬肉，入山楂數(shù)顆即亂……”和“化飲食，消肉積……”。近代研究證明，山楂含維生素C、維生素B2、胡蘿卜素及多種有機酸，口服能增加胃中消化酶的分泌，并能增強酶的活性，促進消化，其中所含的解脂酶能直接幫助消化脂肪類食物，且能加強胃脂肪酶、蛋白酶的活性。近年來有報道，山楂醇提液對受刺激的大鼠胃平滑肌活動有雙向調(diào)節(jié)作用，收縮狀態(tài)時可使之舒展，舒展狀態(tài)時則可以使之收縮，并使活動加強（孫翠玉，2001；高紅旗等，2003）。

3.4 石榴

石榴，別名安石榴、海榴，是石榴科植物的果實。大多數(shù)人都有著吃鮮石榴的習慣，這種美味可口的果實不僅具有食用價值，更經(jīng)歷代醫(yī)者證明，具有較高的藥用價值，在食療方面能夠發(fā)揮生津化食、抗胃酸過多、軟化血管、止瀉、解毒、降溫等作用。

石榴果實中含有維生素C、維生素B族、有機酸、糖類、蛋白質(zhì)、脂肪，及鈣、磷、鉀等礦物質(zhì)等多種人體所需的營養(yǎng)成分， 其中維生素C的含量比蘋果高1-2倍。成熟后的紅石榴中富含礦物質(zhì)，具有兩大抗氧化成分——紅石榴多酚和花青素，其中，石榴汁中多酚含量高達1545.2pg/ml。石榴多酚、花青素、維生素C等抗氧化物質(zhì)具有較強的抗氧化能力、還原能力、清除DPPH自由基能力、清除輕自由基能力、清除超氧陰離子能力和抑制亞油酸過氧化的能力。此外，石榴汁中含有多種氨基酸和微量元素，能夠助消化、抗胃潰瘍、軟化血管、降血脂和血糖，降膽固醇，還可以可防止冠心病、高血壓?？梢哉f，石榴是一種健胃提神、增強食欲、益壽延年的上等佳果，它還具有解酒奇效，飲酒過量者可以飲用石榴汁來解酒毒。近年來，以石榴提取物為主要成分的化妝品日益風靡，其實，早在古代，石榴作為貢品入宮后，皇后、妃繽就取其汁液來調(diào)和脂粉、美容護膚。

3.5 科學實驗

以色列工程技術學院的研究人員發(fā)現(xiàn)，石榴中含有延緩衰老預防動脈粥樣硬化和減緩癌變進程的高水平抗氧化劑，石榴酒、石榴汁對人體均大有裨益。這項發(fā)現(xiàn)首次為石榴及其產(chǎn)品的抗氧化和抗炎癥功效提出了科學依據(jù)。

4 納豆咀嚼片配方設計與抗氧化評價

4.1 設計思路

血栓形成的原因，簡單地說是隨著人年齡的增長，體內(nèi)纖溶系統(tǒng)功能逐漸降低，血液中凝血與抗凝血功能失去平衡而出現(xiàn)凝血，即血栓。影響血栓形成的因素：血管壁的改變、血流速的改變、血小板的改變、促凝物質(zhì)的影響及其他原因。血液凝固涉及到一系列復雜的生物化學過程（魯艷莉，寧喜斌，2006）：

動脈管壁內(nèi)損傷——血小板黏附（血小板表面活性增加）——ADP（二磷酸腺苷）、5-HT（5-羥色胺，又名血清素）釋放（TXA2-血栓素A2和Ca2+促進作用）——血小板聚集（啟動凝血因子）——血液凝固（FSF纖維蛋白穩(wěn)定因子）——纖維蛋白形成（纖溶酶）——血栓形成。主要成分初步設計，臺灣納豆激酶協(xié)會：一般建議每日食用納豆激酶補充品約2000IU作為預防保健，每天葡萄提取物中白藜蘆醇的含量相當于一瓶紅葡萄酒中白藜蘆醇的含量。所以主要成分含量范圍設計，納豆激酶每日2000IU（100mg），白藜蘆醇每日2.5mg。

4.2 抗氧化實驗材料

DPPH自由基（Sigma公司產(chǎn)品），無水乙醇；納豆粉1（納豆激酶活性40000IU/g），納豆粉2（納豆激酶活性20000IU/g）；葡萄水提物，山楂粉，石榴汁粉。

4.3 抗氧化實驗方法

DPPH法于1958年被提出，廣泛用于定量測定生物試樣和食品的抗氧化能力。此法是根據(jù)DPPH自由基有單電子，在517nm處有一強吸收，其醇溶液呈紫色的特性。當有自由基清除劑存在時，由于與其單電子配對而使其吸收逐漸消失，其褪色程度與其接受的電子數(shù)量成定量關系，因而可用分光光度計進行快速的定量分析。

DPPH（二苯代苦味酰自由基）分析法被廣泛用于清除自由基物質(zhì)性質(zhì)的研究。DPPH在有機溶劑中是一種穩(wěn)定的自由基，其孤對電子在517nm附近有強吸收（顯深紫色）。當有機清除劑存在時，孤對電子被配對，吸收消失或減弱，通過測定吸收減弱的程度，可評價自由基清除劑的活性。DPPH法是用以評價天然抗氧化劑抗氧化活性的一種快速（反應時間僅需20min）、簡便、靈敏可行的方法。

4.4 試劑配制及樣品處理

DPPH溶液配制準確稱取DPPH樣品15.7728mg，用無水乙醇溶解并移入200ml容量瓶中定容，配成濃度為2×10-4mol/ml的DPPH溶液。樣品溶液配制準確移取各種樣品1g于小燒杯中，加乙醇稀釋成100倍溶液，混勻，配成濃度為50mg/ml的溶液。用乙醇為溶劑稀釋該溶液，將各樣品配成濃度為0、0.01、0.02、0.03、0.05、0.075、0.1、0.125、0.15、0.20的濃度系列，待用。

4.5 清除DPPH自由基能力測定

式中：A0（2mlDPPH溶液+2ml無水乙醇）——未加提取液的DPPH·溶液的吸光度，以無水乙醇作空白；Ai（2mlDPPH溶液+2ml樣品溶液）——加入提取液后的DPPH溶液的吸光度，以無水乙醇作空白；Aj（2ml無水乙醇+2ml樣品溶液）——提取液與提取劑混合后的吸光度，以無水乙醇作空白；樣品溶液用力搖勻，將Ai所表示的樣品在室溫下靜置30min后，加入1cm比色皿中進行吸光度的測定，測出A0、Ai、Aj的吸光度值，按公式進行清除率的計算。

4.6 抗氧化實驗結果及討論

這說明實驗中的每種樣品都可以有效的降低羥基自由基、烷基自由基或者過氧化自由基濃度，從而達到抗氧化的作用，結果見圖1。

半清除率IC50（inhibitionconcentration），又稱半抑制濃度，指清除目標物一半時的抗氧化劑的濃度），樣品的半清除率情況見表2。

產(chǎn)品選用的濃度是0.05g/ml，維生素C的IC50為12.2μg/mL，與復方的納豆咀嚼片相比在一個數(shù)量級，說明復方的納豆咀嚼片有較好的抗氧化性能。

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