張繼紅　余繁榮　張蓉

[摘要] 目的 研究缺氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）與金屬蛋白酶-2（MMP-2）在子宮腺肌?。ˋM）中的表達(dá)情況，探討其在AM發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法 應(yīng)用免疫組化（SABC）檢測(cè)90例AM標(biāo)本，36例卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫及30例正常子宮內(nèi)膜中的HIF-1α及MMP-2的表達(dá)。 結(jié)果 HIF-1α在AM的異位內(nèi)膜及在位內(nèi)膜組織中的表達(dá)75.0%和42.9%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。HIF-1α與MMP-2在AM組織中表達(dá)與正常子宮內(nèi)膜比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），HIF-1α與MMP-2在卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫及正常子宮內(nèi)膜中表達(dá)（P﹤0.05），HIF-1α及MMP-2在AM組織與卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫陽性表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。HIF-1α及MMP-2在AM的表達(dá)呈正相關(guān)（r = 0.341，P = 0.001）。 結(jié)論 HIF-1α及MMP-2可能促進(jìn)子宮內(nèi)膜在子宮肌層的種植生長起協(xié)同作用。

[關(guān)鍵詞] 子宮腺肌病；免疫組織化學(xué)；HIF-1α；MMP-2

[中圖分類號(hào)] R473.71 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2013）06-0063-03

子宮腺肌?。╝denomyosis，AM）是指子宮內(nèi)膜的腺體和間質(zhì)侵入子宮肌層，病灶在肌層內(nèi)呈良性浸潤及彌漫性生長，并伴隨周圍肌層細(xì)胞的代償性肥大和增生。AM為婦科常見的疾病之一，近年來有逐漸升高的趨勢(shì)，好發(fā)于30～45歲，主要表現(xiàn)為繼發(fā)性進(jìn)行性加重的痛經(jīng)、月經(jīng)增多、不孕不育及子宮增大，不同程度影響著育齡婦女的身心健康和生活質(zhì)量。其病因和發(fā)病機(jī)制仍不清楚。Romanek K[1]研究表明多次妊娠、習(xí)慣性流產(chǎn)和多次宮內(nèi)操作史均為本病的危險(xiǎn)因素，子宮基底層的損傷明顯增加AM的發(fā)病率。有實(shí)驗(yàn)表明在子宮內(nèi)膜向肌層浸潤轉(zhuǎn)移的過程中血管的形成與基底膜屏障的破壞是重要環(huán)節(jié)。缺氧誘導(dǎo)因子（hypoxia-inducible factor，HIF-1α）及金屬蛋白酶-2（matrix metallo proteinase-2，MMP-2）在促進(jìn)血管的形成、細(xì)胞突破子宮內(nèi)膜-肌層界面（endmetrial-myometrial interface，EMI）及侵襲轉(zhuǎn)移中起重要作用。本研究旨在通過檢測(cè)HIF-1α及 MMP-2在子宮腺肌病異位及在位內(nèi)膜組織中的表達(dá)，探討子宮腺肌病的發(fā)病機(jī)制及其二者的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

取2010年9月～2012年6月我院病理科存檔的石蠟標(biāo)本：手術(shù)切除經(jīng)病理證實(shí)為子宮腺肌病且不合并子宮內(nèi)膜其他病變的標(biāo)本90例，其中異位內(nèi)膜48例，在位內(nèi)膜42例。卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫組織36例，因子宮肌瘤行手術(shù)切除的標(biāo)本為正常子宮內(nèi)膜標(biāo)本30例，患者年齡為26～50歲，平均（40.6±3.2）歲。所有患者術(shù)前3個(gè)月內(nèi)均無性激素類藥物治療，無內(nèi)分泌、免疫、代謝性疾病及其他藥物治療史。

1.2 試劑

鼠抗人單克隆抗體缺氧誘導(dǎo)因子1α（HIF-1α）（產(chǎn)品編號(hào)：MAB-0635）購自北京中杉金橋公司；鼠抗人單克隆抗體基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP-2）（產(chǎn)品編號(hào)：MAB-0244）；免疫組化試劑盒，DAB顯色劑均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.3 方法

采用免疫組化染色（SABC）：標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，5 μm 厚連續(xù)切片，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

光學(xué)顯微鏡下染色強(qiáng)度按下列標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分：著色弱但明顯強(qiáng)于陰性對(duì)照者1分，染色清晰者2分，染色強(qiáng)者3分；陽性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的10%～50%者2分，51%～80%者3分，>80%者4分。上述兩項(xiàng)評(píng)分相加，不管其染色強(qiáng)度，只要陽性細(xì)胞數(shù)<10%者即為（-）；3分為弱陽性（+）；4～5分為陽性（++）；6～7分為強(qiáng)陽性（+++）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包進(jìn)行分析，HIF-1α及MMP-2在子宮腺肌病中的表達(dá)研究采用χ2檢驗(yàn)，二者的相關(guān)性應(yīng)用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HIF-1α在子宮腺肌病、子宮內(nèi)膜異位囊腫及正常子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)

在子宮腺肌病組織HIF-1α蛋白陽性表達(dá)為棕黃色或棕褐色顆粒，主要表達(dá)于子宮內(nèi)膜細(xì)胞及腺上皮細(xì)胞的胞質(zhì)和胞核， 以胞漿為主。HIF-1α在子宮腺肌病及卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫組織中的陽性表分別為60.0%和66.7%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.485，P = 0.486）；其在正常子宮內(nèi)膜組織中的陽性率26.7%，與子宮腺肌病及卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫的陽性表達(dá)比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；HIF-1α在子宮腺肌病的異位內(nèi)膜及在位內(nèi)膜組織中的表達(dá)的陽性表達(dá)率分別為 75.0%和42.9%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01），見表1。

2.2 MMP-2在子宮腺肌病、子宮內(nèi)膜異位囊腫及正常子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)

MMP-2主要定位于子宮內(nèi)膜細(xì)胞的胞漿內(nèi)及腺上皮細(xì)胞，呈棕黃色。MMP-2在子宮腺肌病組織中的陽性表達(dá)64.4%，明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織的陽性表達(dá)33.3%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；而在子宮內(nèi)膜異位囊腫的陽性表達(dá)58.3%，子宮腺肌病與卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫組織比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.411，P = 0.522）；正常子宮內(nèi)膜組織與卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫的陽性表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；MMP-2在子宮腺肌病的異位內(nèi)膜及在位內(nèi)膜組織中的陽性表達(dá)率分別為79.2%和47.6%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01），見表2。

2.3 HIF-1α 及MMP-2在子宮腺肌病組織中表達(dá)的相關(guān)性

HIF-1α 及MMP-2在子宮腺肌病的表達(dá)呈正相關(guān)（r =0.341，P = 0.001），見表3。

3討論

3.1 HIF-1α與子宮腺肌病的關(guān)系

HIF-1α是缺氧環(huán)境下大量表達(dá)的一種轉(zhuǎn)錄因子，在常氧下極不穩(wěn)定，可被泛素-蛋白酶迅速降解，而缺氧狀態(tài)則抑制其降解，HIF-1α與下游靶基因啟動(dòng)子區(qū)域的缺氧反應(yīng)元件（hypoxia responsive element，HRE）結(jié)合，調(diào)控其轉(zhuǎn)錄[2]。目前已確定的HIF-1α靶基因大部分參與了轉(zhuǎn)移級(jí)聯(lián)反應(yīng)過程， 包括上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)型（epithelial-mesenchymal transition，EMT）、細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜降解、腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力增加、新生血管形成等[3]。H■pfl[4]在實(shí)驗(yàn)中證實(shí)HIF-1α可誘導(dǎo)促血管生成因子如VEGF的表達(dá)，促進(jìn)新生血管形成，為腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移創(chuàng)造條件。血管的生成是子宮內(nèi)膜侵入肌層生長發(fā)育的必備條件，不僅為異位內(nèi)膜生長提供營養(yǎng)，還有可能是內(nèi)膜細(xì)胞從正常在位組織轉(zhuǎn)移至子宮平滑肌的重要途徑[5]。

本實(shí)驗(yàn)表明，在HIF-1α在子宮腺肌病組織中的陽性表達(dá)率（60.0%）明顯高于正常內(nèi)膜組（26.7%），差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。HIF-1α在子宮腺肌病的異位內(nèi)膜及在位內(nèi)膜組織中陽性表達(dá)率分別為75.0%和42.9%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與任月芳[6]研究結(jié)果相符。表明子宮腺肌病病灶在浸潤過程中HIF-1α大量表達(dá)，進(jìn)一步促進(jìn)子宮內(nèi)膜VEGF大量分泌，VEGF水平的升高可促進(jìn)異位內(nèi)膜及其周圍肌層血管的形成，加速異位內(nèi)膜的種植和增殖，提示HIF-1α的高表達(dá)可能與AM的發(fā)病密切相關(guān)。

3.2 MMP-2與子宮腺肌病的關(guān)系

基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）是MMPs家族的重要成員之一，定位于人類染色體16q21，是一種依賴鋅離子而降解細(xì)胞外基質(zhì)的蛋白水解酶類之一，其主要功能是降解細(xì)胞外基質(zhì)的各種膠原纖維，研究表明MMPs/TIMPs與組織侵襲有關(guān)，其失衡可引起細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的降解和重建，與EMT及AM的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[7]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示子宮腺肌病異位內(nèi)膜組中MMP-2的陽性表達(dá)率79.2%，顯著高于在位內(nèi)膜（47.6%）及正常子宮內(nèi)膜組（33.3%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與Matsuda等[8]的研究一致，其通過子宮腺肌病及正常子宮內(nèi)膜中MMP-2的表達(dá)情況及酶活性的研究，也證實(shí)了子宮腺肌病中MMP-2活性及MMP-2 mRNA的水平較對(duì)照組有升高的趨勢(shì)。Moreira等[9]研究發(fā)現(xiàn)MMP-2在AM重度組的子宮內(nèi)膜、內(nèi)膜-肌層邊界、肌層和肌層血管的表達(dá)明顯高于輕度組。王浩等[10]進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)得出AM組EMI處的內(nèi)膜腺體中MMP-2的高表達(dá)和TIMP-2的低表達(dá)，使子宮內(nèi)膜的侵蝕能力增強(qiáng)，說明MMP-2的過度表達(dá)使得子宮腺肌病異位病灶組織能降解其周圍基底膜及細(xì)胞外基質(zhì)成分， 破壞間質(zhì)細(xì)胞之間連接，使細(xì)胞侵襲能力增強(qiáng)，從而使阻止子宮內(nèi)膜侵入的“天然屏障”遭到破壞，突破基底膜，侵入肌層，為子宮腺肌病的形成提供了條件。

3.3 HIF-1α及 MMP-2之間關(guān)系

本研究顯示在子宮腺肌病組織中HIF-1α及 MMP-2的表達(dá)成正相關(guān)（r = 0.341，P = 0.001）。研究表明缺氧環(huán)境中，HIF-1α誘導(dǎo)激活蛋白水解物（包括尿激酶型纖維蛋白酶原激活物，組織蛋白酶D和MMP-2[6]，在病灶處HIF-1α激活VEGF基因的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)新生血管的形成，MMP-2降解EMI成分，二者協(xié)同作用使子宮內(nèi)膜細(xì)胞向肌層侵襲、轉(zhuǎn)移從而使子宮內(nèi)膜異位到肌層，因此對(duì)HIF-1α及MMP-2的研究為子宮腺肌病的診治提供了新的思路。

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（收稿日期：2013-01-04）