譚維賢

[摘要] 目的 探討血清葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶（GPI）在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）診斷中的臨床價(jià)值。 方法 采用ELISA法檢測(cè)GPI和抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP）；間接免疫熒光法檢測(cè)抗角蛋白抗體（AKA）；速率免疫散射比濁法檢測(cè)類風(fēng)濕因子（RF）。共檢測(cè)65例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA組）、85例其他風(fēng)濕病患者（非RA組）和60例健康正常成人（正常對(duì)照組）。 結(jié)果 4項(xiàng)血清學(xué)指標(biāo)比較，GPI和抗CCP在診斷RA中有著較高的靈敏度和特異性；RF的靈敏度雖然最高，但特異性卻最差。 結(jié)論 GPI對(duì)RA早期診斷有著重要的意義，且與抗CCP、AKA、RF無明確的相關(guān)性，GPI與RF聯(lián)合檢測(cè)更有利于RA的早期診斷。

[關(guān)鍵詞] 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶；類風(fēng)濕因子；抗環(huán)瓜氨酸肽抗體；抗角蛋白抗體

[中圖分類號(hào)] R593.22 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2013）06-0108-02

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是由于自身免疫發(fā)生的一種關(guān)節(jié)疾病，其發(fā)病機(jī)制尚不清楚，隨病情發(fā)展可出現(xiàn)骨及骨骼肌的萎縮，最后導(dǎo)致關(guān)節(jié)強(qiáng)直。由于其致畸致殘率較高，因此，對(duì)于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的防治重點(diǎn)在于早期診斷和早期治療，而對(duì)于已患病者而言，及時(shí)做到病情控制或改善預(yù)后則更重要。傳統(tǒng)的血清學(xué)指標(biāo)被廣泛應(yīng)用于RA的診斷中，其中類風(fēng)濕因子（RF）的檢測(cè)具有較高的敏感性，但由于其特異性差，因此很難將其作為早期診斷提供可靠依據(jù)。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，血清葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶（GPI）、抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP）和抗角蛋白抗體（AKA）等血清學(xué)指標(biāo)與RA等自身免疫性疾病的關(guān)系密切，特別是在RA的早期診斷和預(yù)后判斷中具有重要價(jià)值[1]。為此，本研究檢測(cè)了65例RA、85例其他非RA風(fēng)濕病患者和60例健康正常成人的GPI、抗CCP、AKA和RF等4項(xiàng)血清學(xué)標(biāo)志物，以探討它們?cè)陬愶L(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷中的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

RA組：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者65例，均為2009年1月～2010年8月期間我院皮膚科門診或住院患者，男33例，女32例，年齡18～70歲，平均（45±12）歲。所有研究患者均符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)1987年修訂的診斷分類標(biāo)準(zhǔn)。非RA組：非RA的其他風(fēng)濕病患者85例，符合國(guó)內(nèi)和國(guó)際相應(yīng)的診斷標(biāo)準(zhǔn)，均為同期我院皮膚科門診或住院患者，男39例，女46例，年齡17～72歲，平均（45±11）歲。其中系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）患者23例，強(qiáng)直性脊柱炎（As）患者32例，原發(fā)干燥綜合征（ss）患者l6例，混合性結(jié)締組織?。∕CTD）患者l4例。正常對(duì)照組：選擇無自身免疫性疾病臨床體征及影像學(xué)表現(xiàn)、各種自身免疫性疾病血清學(xué)指標(biāo)檢測(cè)陰性，且無肝、腎、心血管及糖尿病等疾病的健康體檢者60例作為健康對(duì)照，其中男29例，女31例，年齡24～67歲，平均（43±10）歲。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 GPI檢測(cè) 采用上海北加生化試劑有限公司生產(chǎn)的雙抗體夾心法（ELISA）GPl檢測(cè)試劑盒。嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作；其中包括6個(gè)GPI標(biāo)準(zhǔn)品（0、0.16、0.33、1.0、2.0、20 μg/mL）和陰、陽性對(duì)照；待檢血清1∶10稀釋，GPl值I>0.2 ug/mL為陽性。

1.2.2 抗CCP檢測(cè) 采用德國(guó)歐蒙醫(yī)學(xué)試驗(yàn)診斷有限公司提供的體外定量檢測(cè)CCP（IgG型）抗體ELISA試劑盒。嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作；待檢血清1∶100稀釋，結(jié)果>5 U/mL為陽性。如果抗體超過曲線范圍，將血清適度稀釋后重新進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.3 AKA檢測(cè) AKA間接免疫熒光法（IIF）檢測(cè)試劑購(gòu)自德國(guó)歐蒙醫(yī)學(xué)試驗(yàn)診斷有限公司，待檢血清1∶10稀釋，熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。食管組織角質(zhì)層出現(xiàn)線性、板層狀的典型熒光染色者判斷為陽性。

1.2.4 RF檢測(cè) 采用美國(guó)貝克曼公司的IMMAGE特定蛋白分析儀及其配套速率散射比濁法試劑進(jìn)行檢測(cè)。RF>30 U/mL為陽性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，應(yīng)用χ2檢驗(yàn)分析各指標(biāo)陽性率之間的差別。計(jì)算GPI、抗CCP、AKA和RF的敏感性、特異性，率的比較采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 四項(xiàng)血清學(xué)指標(biāo)的陽性檢出率（表1）。

2.2 四項(xiàng)血清學(xué)標(biāo)志各自單獨(dú)對(duì)診斷RA的特異性比較

GPI（96.7%）、抗CCP（94.1%）和AKA（95.3%）對(duì)診斷RA具有很高的特異性；RF（76.0%）的特異性相對(duì)較低。

2.3 四項(xiàng)血清學(xué)標(biāo)志聯(lián)合檢測(cè)對(duì)診斷RA的靈敏度和特異性比較

GPl、抗CCP和AKA分別與RF聯(lián)合檢測(cè)均可明顯提高RF對(duì)RA的診斷特異性；GPl與RF聯(lián)合檢測(cè)對(duì)RA的診斷特異性可達(dá)l00%，靈敏度也明顯高于其他組合。見表2。

3討論

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）是一種致畸很高的自身免疫性疾病[2]。RF是美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)推薦用于RA分類診斷的唯一血清學(xué)指標(biāo)，目前常用于RA的輔助診斷，其本質(zhì)是抗變性IgG分子Fc片斷的自身抗體。由于RA的檢測(cè)技術(shù)簡(jiǎn)便、而快速、且靈敏度高，因此在RA的診斷中得到了廣泛的應(yīng)用。但是RF檢測(cè)結(jié)果的特異性不高，主要是由于SLE等多種自身免疫性疾病以及一些感染性疾病患者的血清中均可出現(xiàn)RF的增高的情況，而在某些正常的老年人中亦有一定的陽性率，因此極大地限制了PF在RA診斷中的臨床應(yīng)用。本研究的結(jié)果也證實(shí)了這一點(diǎn)，4項(xiàng)血清學(xué)指標(biāo)各自單獨(dú)診斷RA的比較中RF的敏感度最高，但特異性最差。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，AKA、抗CCP及GPl等血清標(biāo)志物在RA的早期診斷中具有較好的敏感度和很高的特異性[3]。

AKA是1979年YOUNG等[4]發(fā)現(xiàn)并命名的，是一組不溶性的纖維蛋白，為細(xì)胞骨架的一種構(gòu)成成分，IgG型的AKA抗體對(duì)RA具有較高的特異性。AKA在RA患者血清和關(guān)節(jié)液中均可檢出，甚至在RA早期和臨床表現(xiàn)出現(xiàn)前即可呈陽性，且與RA病情的嚴(yán)重程度及活動(dòng)性相關(guān)；而AKA檢測(cè)呈陽性往往提示RA預(yù)后不良。因此，AKA對(duì)RA的早期診斷和預(yù)后判斷都有意義，但由于AKA的檢測(cè)易受操作者的主觀因素影響，且抗原底物的個(gè)體差異性及其底物的獲取和保存不易，操作不易標(biāo)準(zhǔn)化等實(shí)際困難[5]，限制了AKA在RA輔助診斷中的推廣應(yīng)用。

2000年荷蘭學(xué)者Schellekens等合成了CCP[6]，并利用ELISA方法在RA患者體內(nèi)檢測(cè)到了抗CCP。在RA早期即可出現(xiàn)抗CCP，并已證實(shí)對(duì)骨侵蝕的發(fā)生有很高的預(yù)測(cè)價(jià)值[7]，通過檢測(cè)抗CCP可盡早對(duì)陽性患者進(jìn)行干預(yù)、阻斷疾病的進(jìn)展，有效減少骨侵蝕和關(guān)節(jié)破壞。本研究中RA組患者抗CCP的檢出率高達(dá)52.3%，僅次于RF和GPI，但其特異性明顯高于RF，對(duì)RA的早期診斷有重要作用。

GPI是一種多功能蛋白質(zhì)分子，廣泛存在于人體各種組織細(xì)胞中，其主要功能是催化6-磷酸葡萄糖和6-磷酸果糖之間的轉(zhuǎn)化，是糖酵解、糖異生的主要酶類。同時(shí)GPI也具有細(xì)胞生長(zhǎng)因子活性，可誘導(dǎo)髓樣干細(xì)胞向單核細(xì)胞及B細(xì)胞向漿細(xì)胞的分化。推測(cè)GPI的細(xì)胞生長(zhǎng)因子活性可能對(duì)RA患者的血管增生、滑膜增殖和骨破壞起一重要作用，同時(shí)增加了RA的易感性[8]。GPI雖然是一種全身細(xì)胞普遍存在的具有自身抗原性的蛋白質(zhì)，但在RA中的陽性率要遠(yuǎn)高于其他自身免疫性疾病[9]。MATSU-MOT0等[10]用免疫組化的方法研究了GPI的定位分布，發(fā)現(xiàn)在各種組織的細(xì)胞內(nèi)，GPI均勻分布，但在關(guān)節(jié)腔內(nèi)，特別在軟骨表面，有一層薄而清晰的GPI沉著線。本研究中，單獨(dú)檢測(cè)GPI對(duì)診斷RA的靈敏度和特異性分別為67.7%和96.7%；聯(lián)合RF檢測(cè)后，盡管靈敏度有所下降，但特異性達(dá)到l00%。另有研究表明[11，12]，GPl濃度與RA患者關(guān)節(jié)腫脹和骨侵蝕性程度相關(guān)，而與RF、AKA及抗CCP無明顯相關(guān)性，提示GPI有可能成為獨(dú)立于RF、AKA和抗CCP之外的新的標(biāo)記物，從而增強(qiáng)RA診斷的靈敏度和特異性，很有希望廣泛應(yīng)用于RA的診斷及活動(dòng)性的判斷，在一定程度上可以彌補(bǔ)RF的不足。用于檢測(cè)GPI的ELISA方法簡(jiǎn)單、不需要特殊設(shè)備，非常適用于普通醫(yī)療機(jī)構(gòu)的臨床實(shí)驗(yàn)室推廣使用，具有廣泛的臨床應(yīng)用和研究前景。

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（收稿日期：2012-11-16）