任一帆，賈國存，鄒旭鳳，趙 瑞，呂艷琦

(鄭州市兒童醫(yī)院血液科 河南鄭州 450003)

噬血細胞綜合征(HPS)，又稱噬血細胞性淋巴組織細胞增多癥(HLH)，由 Farquhar等［1］于1952年首次報道，可見多臟器受損，病情進展迅猛，延誤診治病死率高的臨床特點。該病是由多種致病因素引起的淋巴細胞和組織細胞過度增殖、活化，產生大量炎癥因子，從而引起的一種可危及生命的過度炎癥反應［2］。本研究對收治的HLH患兒血清細胞因子IL-18、IL-10、IL-12、TNF-α、NF-Kβ 及新碟呤進行檢測，觀察其變化，并探討其在HLH發(fā)病機制中的作用和臨床意義，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以2011年1月至2012年5月在鄭州市兒童醫(yī)院血液腫瘤科收治的16例HLH患兒為研究對象，其中男9例，女7例，年齡3.2個月～5.6歲。病例診斷均符合HLH-2004診斷標準［3］，確診前無糖皮質激素應用史。10例健康對照組為鄭州市兒童醫(yī)院同期門診體檢健康兒童，男6例，女4例;年齡5個月～8歲，無心、肝、腎臟疾病及遺傳代謝性疾病，健康對照組家長均知情同意。各組資料具有可比性。

1.2 試劑和儀器 ELISA試劑盒購自美國RB公司，酶標儀購自上海熱電儀器有限公司，高精度加樣器及槍頭購自德國BRAVD公司，恒溫水箱購自北京市醫(yī)療設備廠，離心機購自安徽中科中佳科學儀器有限公司。

1.3 細胞因子測定 抽取患兒及健康對照組兒童空腹靜脈血2 ml，3 000 r/min離心10 min后分離血清，按一次用量分裝，凍存于－20°冰箱備用。檢測之前室溫下溶解標本，并提前20 min取出試劑盒，平衡至室溫。嚴格按照ELISA試劑盒說明書步驟檢測IL-18、IL-10、IL-12、TNF-α、NF-Kβ 及新碟呤水平。

1.4 統(tǒng)計學處理 應用SPSS17.0軟件，數(shù)據(jù)±s表示，HLH組與健康兒童組之間采用t檢驗比較，檢驗水準α=0.05。HLH組各細胞因子間相關性分析采用Spearman rank相關性分析。

2 結果

HLH組IL-18、IL-10、IL-12、NF-Kβ、TNF-α及新碟呤水平均升高，與健康對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。其中IL-10、新碟呤水平明顯升高，與健康對照組比較差異均有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。TNF-α升高不明顯，與健康組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，這與報道相符［3］。見表1。

表1 HLH患兒與健康對照組兒童細胞因子水平比較(±s)

表1 HLH患兒與健康對照組兒童細胞因子水平比較(±s)

新碟呤HLH組 10 420.9±31.0 223.2±123.0 298.2±237.9 17.0±組別 n IL-18 IL-10 IL-12 NF-Kβ TNF-α 4.5 3.1±1.2 57.8±28.3健康組 16 168.7±14.9 2.3±0.6 74.1±15.9 5.8±1.6 2.8±1.1 7.7±3.2 t 23.89 4.90 2.95 7.46 0.804 5.53 P＜0.05＜0.01＜0.05＜0.05 ＞0.05＜0.01

IL-10與NF-Kβ 及新碟呤均呈正相關(r=0.747P＜0.05，r=0.567P＜0.05)，IL-18與IL-12、TNF-α也呈明顯正相關(r=0.542P＜0.05，r=0.686P＜0.05)。見表2。

表2 HLH患兒細胞因子水平相關性分析

3 討論

本研究的16例HLH患兒均符合HLH-2004診斷標準，該標準認為只要符合HLH的分子診斷和8條臨床診斷中的5條，即能確診HLH。但是由于技術水平限制，目前國內尚不能完成所有與HLH相關的染色體基因缺陷的檢測。而且，臨床觀察發(fā)現(xiàn)，很多HLH患兒病程初期很難同時滿足5條診斷標準，隨著病程進展，各種癥狀逐一出現(xiàn)，最終確診為HLH。但是HLH病情進展十分迅速，延誤診斷和治療可導致患兒病情無法控制而死亡，因此，HLH的早期診斷十分必要，而HLH-2004方案仍需進一步完善。

HLH分為原發(fā)性或遺傳性HLH和繼發(fā)性HLH兩類，其中原發(fā)性HLH又分為家族性HLH和免疫缺陷病兩類。原發(fā)性HLH患者多有噬血家族史或被證明有明確的基因突變，多于1歲之前發(fā)病，偶見青少年和成年患者［4］。繼發(fā)性HLH分為感染相關性 HLH(IAHS)，腫瘤相關性HLH(MAHS)、自身免疫相關性HLH(MAS)、藥物相關性 HLH、移植后 HLH 等［2］。該病具體發(fā)病機制不明，但多數(shù)認為免疫系統(tǒng)參與了該病的發(fā)病過程。該觀點認為，基因缺陷、感染及腫瘤等病因引起機體免疫系統(tǒng)紊亂，使T細胞持續(xù)增殖，產生大量的IFN-，導致巨噬細胞大量活化，活化的巨噬細胞又分泌大量的細胞因子，如:IL-12、IL-10、IL-18、TNF-α及其他白介素類，其中IL-12能誘導分泌Th1細胞因子的細胞發(fā)展并促進這些細胞和NK細胞產生IFN-，形成惡性循環(huán)［5］，這就是所謂的“細胞因子風暴”學說。

在本研究中，HLH患兒確診時 IL-18、IL-10、IL-12、NF-Kβ及新碟呤水平與健康對照組相比均升高，尤其IL-10、新碟呤水平明顯升高，再一次證實了細胞因子確實參與了HLH的病理生理作用。與健康組相比，HLH患兒確診時血清TNF-α升高不明顯。TNF-α是造血干細胞增殖的抑制性因子，能使骨髓粒系、紅系及巨核細胞進行性減少，HLH患兒確診時血清TNF-α升高不明顯，但是卻有明顯的外周血兩系以上減少，考慮與骨髓中的噬血細胞對血細胞的破壞有關。

NF-Kβ幾乎存在于機體的各種細胞中，它是具有基因轉錄調節(jié)作用的核因子，是急性炎癥反應的中樞環(huán)節(jié)，在調節(jié)免疫應答、炎癥反應和細胞增殖分化以及凋亡方面均起關鍵作用，能在氧化期上調有關炎癥因子基因的轉錄。本研究證實，IL-10與NF-Kβ呈明顯正相關，可能與NF-Kβ上調了IL-10的基因轉錄有關。IL-10主要有單核/巨噬細胞、T細胞、B細胞分泌，能促進B細胞增殖、分化及抗體產生。新碟呤主要由活化的巨噬細胞及樹突狀細胞產生，是參與機體炎癥反應的一個重要因子，本研究提示，IL-10與新碟呤呈明顯正相關，但具體作用機制仍待進一步研究。

IL-18是IL家族中的重要成員之一，主要由Th1細胞產生。IL-18在caspase-1的催化下成為有活性的細胞因子，可被單核吞噬細胞連續(xù)表達。IL-18與IL-12共同維持Th1的免疫活性，可促進T淋巴細胞和NK細胞產生IFN-和TNF-α以及在淋巴細胞中誘發(fā)Fas配基的表達，本研究顯示IL-18與IL-12、TNF-α呈明顯正相關，與上述理論吻合，提示以上病理機制可能參與了HLH病理生理過程。

［1］Farquhar J W，Claireaux A E.Familial haemophagocytic reticulosis［J］.Arch Dis Child，1952，27(136):519-525.

［2］Janka G E.Familial and acquired hemophagocytie lymphohistiocytosis［J］.Eur J Pediatr，2007，166:95-109.

［3］Henter J I，Home A C，Arico M，et al.HLH-2004:Diagnostic and therapeutic guideli-nes for hemophagocytic lymphohistiocytesis［J］.Pediatr Blood Cancer，2007，48:124-131.

［4］Xiaojun X，Yongmin T，Hua S.Diagnostic Accuracy of a Specific Cytokine Pattern in Hemophagocytic Lymphohistiocytosis in Children［J］.Pediatr，2012，160(6):984-990.

［5］Nagafuji K，Nonami A，Kumano T，et al.Perforin genemutations in adult-onset hemophagocytic lymphohistiocytosis［J］.Haematologica，2007，92(7):978-981.

［6］Tang Y，Xu X，Song H，et al.Early diagnostic and prognostic significance of a specific Th1/Th2 cytokine pattern in children with haemophagocytic syndrome［J］.Br Haematol，2008，143(1):84-91.