陳永尚

宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一,2010年世界衛(wèi)生組織報(bào)告：引起全球女性癌癥死亡的惡性腫瘤中,宮頸癌的死亡率跌出前五名,說明隨著對(duì)宮頸癌早期篩查越來越多的重視,越來越多的宮頸癌在早期被發(fā)現(xiàn),總的死亡率有所下降,然而宮頸癌的發(fā)病率卻依舊呈上升以及低齡化的趨勢(shì)［1］。Wnt信號(hào)通路的異常激活在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用,該信號(hào)通路的抑制性蛋白質(zhì)分泌型Frizzled相關(guān)蛋白2(sFRP-2)通過直接結(jié)合Wnt從而改變Wnt與Wnt受體復(fù)合物結(jié)合的能力。本研究采用免疫組織化學(xué)SABC法檢測(cè)了sFRP-2蛋白在宮頸癌及癌前病變組織中的表達(dá),進(jìn)而探討sFRP-2蛋白在宮頸病變發(fā)生、發(fā)展中的作用?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 選擇本院病理科2011年10月~2013年1月婦產(chǎn)科行手術(shù)切除的子宮頸鱗癌組織蠟塊51例、宮頸上皮內(nèi)瘤變蠟塊63例(其中Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)28例,Ⅲ級(jí)35例),隨機(jī)選取30例正常子宮頸組織蠟塊作為對(duì)照,正常子宮頸組織均為同期因子宮肌瘤行子宮全切術(shù)獲得。所有患者均為女性,年齡23~65歲,平均年齡(41.17±12.08)歲,所有患者術(shù)前均未實(shí)施放、化療措施,術(shù)后經(jīng)病理明確診斷。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)組織中sFRP-2蛋白表達(dá) 兔抗人sFRP-2多克隆抗體購(gòu)于上海領(lǐng)成生物科技有限公司,二抗鼠抗兔即用型SABC試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。切片脫蠟,水化,PBS洗兩次各5 min,抗原修復(fù),PBS洗5 min。滴加封閉液,甩去多余液體,滴加一抗(sFRP-2:1:200)4℃過夜,37℃復(fù)溫,PBS洗三次各2 min,滴加二抗,PBS洗三次各2 min,滴加試劑SABC,PBS洗4次各5 min,DAB顯色,蘇木素復(fù)染,鹽酸酒精脫水、封片,陰性對(duì)照利用PBS代替一抗。用染色強(qiáng)度聯(lián)合陽性細(xì)胞百分比進(jìn)行評(píng)分：著色程度：無著色：0分,淡黃色：1分,棕黃色：2分；陽性細(xì)胞百分比分級(jí)如下：陽性細(xì)胞數(shù)≤2%記為0分,2%~20%記為1分,21%~50%記為2分,≥50%：記為3分。最后得分為陽性細(xì)胞數(shù)以及著色程度相加值≥2分為陽性。

1.2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的處理。率的比較用χ2檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 免疫組化結(jié)果 sFRP-2蛋白主要定位于細(xì)胞質(zhì),細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性標(biāo)志。見圖1。sFRP-2的表達(dá)在宮頸上皮內(nèi)瘤變組織和宮頸鱗癌組織中明顯低于正常宮頸組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅲ級(jí)組低于低度病變組(Ⅰ級(jí)和Ⅱ級(jí)),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),宮頸鱗癌組sFRP-2的表達(dá)低于低度病變組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；宮頸鱗癌組sFRP-2的表達(dá)低于高度病變組(P<0.05),具體見表1。

圖1 sFRP-2在宮頸鱗癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變組織及正常宮頸組織中的免疫組化染色(A：正常宮頸組織中sFRP-2陽性染色；B：宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中sFRP-2陽性染色；C：宮頸鱗癌組織中sFRP-2陰性染色, SABC法,400X, 標(biāo)尺 ：100 μm)

2.2 sFRP-2與宮頸鱗癌臨床病理因素的關(guān)系 sFRP-2在≥40歲和＜40歲的陽性表達(dá)率分別為41.2%、35.3%；在臨床分期Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期陽性表達(dá)率分別為42.3%、40%、20%；在宮頸浸潤(rùn)深度<1/3、1/3~1/2和>1/2肌層的陽性表達(dá)率分別為36.4%、44.4%和40.0%；在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組的陽性表達(dá)率分別為36.4%、57.1%,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在組織學(xué)分級(jí)中高分化和低分化的陽性表達(dá)率分別為26.7%、57.2%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表1 sFRP-2在各組織中的表達(dá)情況［n(%)］

表2 sFRP-2與宮頸鱗癌臨床病理因素的關(guān)系［n(%)］

3 討論

通過對(duì)既往文獻(xiàn)的回顧,目前已知經(jīng)典的Wnt信號(hào)通路在結(jié)腸癌、口腔癌、皮膚癌中均有研究,尤其是對(duì)于結(jié)腸癌、胃癌的研究報(bào)道較多,例如韓向春等［2］報(bào)道Wnt-1在胃癌中高表達(dá)。但是關(guān)于經(jīng)典Wnt信號(hào)通路在婦科腫瘤尤其是宮頸病變中的報(bào)道并不多見。研究表明［2,3］一系列腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與該信號(hào)通路的激活有密切關(guān)系。Wnt信號(hào)通路拮抗因子根據(jù)作用方式的不同分為兩大類 ,而 sFRP(secreted Frizzled related protein)這一種類型,能夠通過直接結(jié)合Wnt蛋白,使得Wnt蛋白與Wnt受體復(fù)合物結(jié)合的能力發(fā)生改變,該類型包括分泌性卷曲蛋白家族(即sFRP 家族 )、WIF-1(Wnt inhibitory factor-1)和Cerberus。趙蘇云等［3］發(fā)表于2009年的文章提到在子宮肌瘤細(xì)胞中存在Wnt信號(hào)通路,而正常子宮肌層中卻并不存在,說明Wnt信號(hào)通路與宮頸良性腫瘤：子宮肌瘤的發(fā)生密切相關(guān),與Dimitrova 等［4］的實(shí)驗(yàn)結(jié)果類似。本研究發(fā)現(xiàn),sFRP-2的表達(dá)在宮頸上皮內(nèi)瘤變組織和宮頸鱗癌組織中明顯低于正常宮頸組織；宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅲ級(jí)組低于低度病變組(Ⅰ級(jí)和Ⅱ級(jí))；宮頸鱗癌組sFRP-2的表達(dá)低于低度病變組；宮頸鱗癌組sFRP-2的表達(dá)低于高度病變組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。并且在宮頸鱗癌組中,sFRP-2的表達(dá)與患者的年齡、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移、臨床分期均無相關(guān)性(P>0.05),而在不同組織分化程度間表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,這個(gè)結(jié)果與王美紅等［5］研究sFRP-1在宮頸癌及正常宮頸組織中的表達(dá)結(jié)果相同,而在蘇珊［6］的研究中發(fā)現(xiàn)宮頸HSIL組與LSIL組中sFRP-1的表達(dá)沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,可能是因?yàn)楸緦?shí)驗(yàn)中樣本量較大,或者是不同的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法造成的。大量研究表明［7-9］,sFRP啟動(dòng)子的甲基化引起的sFRPs的表達(dá)沉默是Wnt通路異常導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的一種可能機(jī)制。而一旦啟動(dòng)子去甲基化那么sFRPsmRNA在腫瘤細(xì)胞中再次高表達(dá),可以減弱Wnt信號(hào)通路的作用,進(jìn)而導(dǎo)致瘤細(xì)胞的凋亡。

總之,作為目前腫瘤研究的熱點(diǎn),Wnt信號(hào)通路的各種抑制因子在子宮良惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用并不明確,相關(guān)報(bào)道亦不多見。本文檢測(cè)了sFRP-2蛋白在宮頸癌及癌前病變組織中的表達(dá),進(jìn)而探討sFRP-2蛋白在宮頸病變發(fā)生、發(fā)展中的作用,有利于明確其相關(guān)的機(jī)制,為將來宮頸癌的靶向治療提供了新的切入點(diǎn)。但是由于受樣本量的限制,本實(shí)驗(yàn)沒有探討sFRP-2蛋白在宮頸腺癌組織中的表達(dá),以及這種表達(dá)在分子水平上的研究,未來可以作進(jìn)一步深入的探討。

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