莊 睿 王 霞 張 鋒 寶 音 章 樂 吳 芳 吳江東 張春軍 張 輝 李文娟 梁 晨 樊 超張萬江

（石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室/石河子大學(xué)《新疆地方與民族高發(fā)病》教育部重點實驗室，石河子 832002）

不同毒力結(jié)核桿菌對感染小鼠肺泡巨噬細(xì)胞鐵蛋白及鐵轉(zhuǎn)運蛋白表達(dá)的影響①

莊 睿 王 霞 張 鋒 寶 音 章 樂 吳 芳 吳江東 張春軍 張 輝 李文娟 梁 晨 樊 超張萬江

（石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室/石河子大學(xué)《新疆地方與民族高發(fā)病》教育部重點實驗室，石河子 832002）

目的:探討不同毒力的結(jié)核桿菌分別感染小鼠肺泡巨噬細(xì)胞后鐵蛋白（Fn）和鐵轉(zhuǎn)運蛋白（FPN）表達(dá)量及其時相性變化。方法:利用制備的結(jié)核桿菌國際標(biāo)準(zhǔn)強毒株H37Rv株（以下簡稱H37Rv株）和卡介苗菌株（以下簡稱BCG）菌懸液，分別經(jīng)小鼠尾靜脈注射，建立各組小鼠感染模型。各組小鼠感染模型建立成功后，分別于第1、3、5、7、9、11、13、15天，進(jìn)行肺泡灌洗，收集小鼠肺泡灌洗液，獲取各組小鼠肺泡巨噬細(xì)胞。應(yīng)用ELISA方法檢測各組感染組小鼠肺泡巨噬細(xì)胞中Fn和FPN的表達(dá)含量;應(yīng)用Western blot技術(shù)檢測上述時間點各組感染的小鼠肺泡巨噬細(xì)胞內(nèi)Fn的表達(dá)量。結(jié)果:用ELISA方法和Western blot技術(shù)檢測各組小鼠肺泡巨噬細(xì)胞內(nèi)Fn表達(dá)，結(jié)果顯示:于模型建成后第7、9、11天，H37Rv株組與BCG組的小鼠肺泡巨噬細(xì)胞內(nèi)Fn表達(dá)量明顯減低，并且于第7天時表達(dá)量最低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。利用ELISA方法檢測各組小鼠肺泡巨噬細(xì)胞內(nèi)FNP的表達(dá)，結(jié)果顯示:不同毒力的結(jié)核桿菌菌株感染小鼠肺泡巨噬細(xì)胞后，各感染組內(nèi)小鼠肺泡巨噬細(xì)胞FPN隨處理時間延長表達(dá)逐漸降低;于感染第5天開始下降明顯，第7、9天最低。H37Rv株組和BCG組表達(dá)接近，于第5、7、9天明顯低于正常對照組FPN的表達(dá)量，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論:結(jié)核桿菌感染導(dǎo)致巨噬細(xì)胞內(nèi)Fn與FPN的表達(dá)均降低，并且感染巨噬細(xì)胞Fn和FPN的表達(dá)與結(jié)核桿菌的毒力強弱關(guān)系無相關(guān)性。

結(jié)核桿菌;巨噬細(xì)胞;鐵蛋白;鐵轉(zhuǎn)運蛋白

①本文為國家自然科學(xué)基金資助項目（No.81260261，81160192，81260241，81160001）和新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)醫(yī)藥專項資金資助項目（No.2012BA022）。

②新疆阿克蘇地區(qū)第二人民醫(yī)院檢驗科，阿克蘇843000。

③新疆醫(yī)科大學(xué)第五附屬醫(yī)院燒傷整形科，烏魯木齊830011。

④新疆烏魯木齊市第一人民醫(yī)院內(nèi)一科，烏魯木齊830000。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 昆明種小鼠，6～8周齡，體重（18±2）克，雌雄各半，共120只，購自石河子大學(xué)實驗動物中心。

1.1.2 菌株 結(jié)核桿菌國際標(biāo)準(zhǔn)強毒株H37Rv菌株和卡介苗菌株購自中國藥品生物制品檢定所。

1.1.3 主要材料及來源 DMEM培養(yǎng)基（美國Hyclone公司），胎牛血清（FBS，美國Hyclone公司），臺盼蘭（美國Sigma公司），小鼠鐵轉(zhuǎn)運蛋白ELISA試劑盒（上海藍(lán)基生物科技有限公司），小鼠鐵蛋白ELISA試劑盒（上海藍(lán)基生物科技有限公司），兔抗小鼠Fn單克隆抗體（Epitmics公司），HRP山羊抗兔二抗（北京康為生物有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 實驗分組 將實驗小鼠隨機(jī)分為H37Rv菌株組、BCG菌株組和空白對照組，每組各40只小鼠，共120只小鼠，按感染模型復(fù)制成功后第1、3、5、7、9、11、13、15 天設(shè)置 8 個時間點，每個時間點各設(shè)5只小鼠。

1.2.2 小鼠感染模型建立 在生物安全柜內(nèi)，以滅菌接種環(huán)取改良羅氏固體培養(yǎng)基上生長2～3周狀態(tài)良好的結(jié)核桿菌菌落，置滅菌磨菌器中，加少量0.05%Tween-20的生理鹽水充分研磨，使其成均勻渾濁的菌懸液。利用麥?zhǔn)媳葷岱ㄕ{(diào)細(xì)菌濃度約1.0×107個/ml。將不同菌懸液經(jīng)小鼠尾靜脈分別注射到對應(yīng)分組的每只小鼠體內(nèi)，注射量約為0.3 ml。將感染小鼠置生物安全三級實驗室內(nèi)，IVC籠具中飼養(yǎng)。

1.2.3 小鼠肺泡巨噬細(xì)胞的收集 在上述不同時間點，將小鼠脫頸處死，摘眼球取血，暴露支氣管，用消毒好的剪刀在氣管上做一切口，用連有注射器的無菌軟皮管從切口處插入氣管，絲線固定，用4℃預(yù)冷PBS液行氣管肺泡灌洗，每次1 m l，共10次，離心管收集支氣管肺泡灌洗液，4℃ 1 500 r/min離心10 min，棄上清，加入含10% 胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。置37℃、5%CO2孵箱中培養(yǎng)4 h，貼壁細(xì)胞即為小鼠肺泡巨噬細(xì)胞。

1.2.4 各組小鼠肺泡巨噬細(xì)胞蛋白提取 將提取的小鼠肺泡巨噬細(xì)胞置于培養(yǎng)瓶中，培育4 h后，將培養(yǎng)瓶內(nèi)營養(yǎng)液吸干凈，每瓶加100μl的SDS蛋白裂解液，冰水浸泡裂解30 min，然后用小刮子將其刮出，水中煮沸15 min，4℃離心16 min，取上清。

1.2.5 利用ELISA方法檢測各組小鼠肺泡巨噬細(xì)胞FPN的表達(dá) 按照ELISA方法檢測轉(zhuǎn)鐵蛋白受體試劑盒操作說明進(jìn)行操作。按50、40、30、20、10、0 ng/ml分別配制標(biāo)準(zhǔn)工作液，加入酶標(biāo)測定板中，100μl/孔。其他孔中加入相同體積的待測上清樣品，酶標(biāo)板加蓋，37℃反應(yīng)40 min，洗滌5次，每孔加50μl生物素抗小鼠鐵蛋白工作液，37℃反應(yīng)20 min，洗滌3次，加酶標(biāo)抗體工作液100μl/孔，37℃反應(yīng)10 min，洗滌5次，加 TMB顯色液，90μl/孔，37℃避光反應(yīng)20 min，最后加TMB終止液100μl/孔，在酶標(biāo)儀450 nm波長下讀取各孔吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，按標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各樣本的鐵蛋白含量。

1.2.6 利用ELISA檢測各組小鼠肺泡巨噬細(xì)胞Fn的表達(dá) 操作步驟和方法同F(xiàn)PN的測定，不同的是標(biāo)準(zhǔn)工作液按 100、50、25、10、5、0 ng/ml進(jìn)行配置。

1.2.7 利用Western blot技術(shù)動態(tài)檢測各組小鼠肺泡巨噬細(xì)胞Fn的表達(dá) 取上述提取的各組小鼠肺泡巨噬細(xì)胞提取的蛋白，將核酸蛋白測定儀模式調(diào)至A280，測定總蛋白的濃度，以最小濃度所在的蛋白組為標(biāo)準(zhǔn)，用裂解液稀釋，使得各組蛋白濃度一致。將蛋白質(zhì)上樣緩沖液5μl與蛋白液20μl混勻，煮沸10 min，冰上冷卻5 min。上樣液體在4℃13 000 r/min離心5 min，取上清上樣，80 V恒壓電泳30 min，待溴酚藍(lán)遷移至分離膠后改為110 V恒壓電泳90 min。將PVDF膜裁剪好后，在甲醇中浸泡5 min，放入轉(zhuǎn)膜緩沖液中，將Walkman濾紙泡入轉(zhuǎn)膜液約15 min。按照Walkman濾紙、聚丙酰胺凝膠、PVDF膜、Walkman濾紙的順序從上到下。23 V恒壓半干轉(zhuǎn)膜20 min，再將PVDF膜置入含50 g/L脫脂奶粉的TBS-T中，封閉2 h。將PVDF膜放入兔源性抗Fn抗體TBS-T溶液中（1∶1 000）4℃孵育過夜。次日，TBS-T洗滌PVDF膜，5 min/次洗膜1次、10 min/次洗膜3次，共4次。PVDF膜放入辣根酶標(biāo)記山羊抗兔IgG的二抗中（1∶15 000），室溫孵育1 h。TBS-T洗膜3次，10 min/次，用ECL發(fā)光試劑進(jìn)行發(fā)光顯色，在化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)中拍照，用Quantity One軟件進(jìn)行分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS16.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計處理，所得數(shù)據(jù)均以x－±s表示，組間比較采用方差分析。

2 結(jié)果

2.1 利用ELISA方法檢測各組小鼠肺泡巨噬細(xì)胞FPN的表達(dá) 結(jié)核桿菌感染小鼠肺泡巨噬細(xì)胞后，F(xiàn)PN的表達(dá)隨著時間延長逐漸減弱，第5天時表達(dá)量開始明顯下降，于第7、9天表達(dá)量最低。在H37RV株組內(nèi)各時間點比較，于第5、7、9天降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，見表1和圖1）。在BCG組內(nèi)各時間點比較，于5、7、9天FPN表達(dá)量同樣減弱，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，見表1和圖1）。H37Rv株組與BCG組之間差異較小，無統(tǒng)計學(xué)意義。H37Rv株組于第5、7、9天與對照組比較，差異顯著，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，見表1和圖1）。BCG組于第5、7、9天與對照組比較，差異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，見表1和圖1）。

2.2 利用ELISA方法檢測各組小鼠肺泡巨噬細(xì)胞內(nèi)Fn的表達(dá) 結(jié)核桿菌感染小鼠肺泡巨噬細(xì)胞后，F(xiàn)n的表達(dá)隨著時間延長逐漸減弱，第7天時表達(dá)量最少。在H37Rv株組內(nèi)各時間點比較，于第7、9、11天降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，見表2和圖2）。BCG組于7、9、11 d Fn表達(dá)量同樣減弱，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，見表2和圖2）。H37Rv株組與BCG組之間差異較小，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。H37Rv株組于第7、9、11天與對照組比較，差異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，見表2和圖2）。BCG組于第7、9天與對照組比較，差異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，見表2和圖2）。

表1 各組各時間點感染小鼠巨噬細(xì)胞FPN表達(dá)水平比較（±s）Tab.1 Expression of FPN in infected mouse alveolar macrophages culturemedium（±s）

表1 各組各時間點感染小鼠巨噬細(xì)胞FPN表達(dá)水平比較（±s）Tab.1 Expression of FPN in infected mouse alveolar macrophages culturemedium（±s）

Note:1）P ＜0.05 vs control group;2）P ＜0.05 vs the same group.

Time（Day） n BCG H37Rv Control 1 5 7.10 ±0.45 6.86 ±0.06 7.43 ±0.13 3 5 5.75 ±0.51 4.11 ±0.06 7.58 ±0.19 5 5 3.33 ±0.441）2）3.01 ±0.061）2）7.49 ±0.14 7 5 2.80 ±0.351）2）2.14 ±0.051）2）7.79 ±0.18 9 5 2.81 ±0.311）2）2.16 ±0.051）2）7.15 ±0.12 11 5 5.22 ±0.89 4.54 ±0.04 7.38 ±0.30 13 5 6.07 ±0.41 5.91 ±0.03 7.64 ±0.13 15 5 6.81 ±0.55 6.63 ±0.07 7.11 ±0.09

圖1 ELISA技術(shù)檢測各組感染后小鼠肺泡巨噬細(xì)胞FPN的表達(dá)Fig.1 ELISA analysis of FPN expression in culturemedium of infected mouse alveolar macrophages

2.3 利用Western blot技術(shù)動態(tài)檢測各組小鼠肺泡巨噬細(xì)胞Fn的表達(dá) 利用Western blot技術(shù)，于第1、3、5、7、9、11、13、15 天動態(tài)檢測各組小鼠肺泡巨噬細(xì)胞Fn蛋白的表達(dá)，在蛋白分子量約20 kD處各有一條特異性蛋白帶（見圖3）。在7、9、11 d時，BCG組與H37Rv株組小鼠肺泡巨噬細(xì)胞Fn蛋白的表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。H37Rv組與BCG組相比較，無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)核桿菌感染宿主巨噬細(xì)胞，可誘導(dǎo)小鼠肺泡巨噬細(xì)胞Fn蛋白的表達(dá)降低，但表達(dá)的高低與毒力的強弱無關(guān)（見表3和圖4）。

表2 各組各時間點感染小鼠巨噬細(xì)胞Fn表達(dá)水平比較（±s）Tab.2 Expression of Fn in infected mouse alveolar macrophages culturemedium（±s）

表2 各組各時間點感染小鼠巨噬細(xì)胞Fn表達(dá)水平比較（±s）Tab.2 Expression of Fn in infected mouse alveolar macrophages culturemedium（±s）

Note:1）P ＜0.05 vs control group;2）P ＜0.05 vs the same group.

Time（Day） n BCG H37Rv Control 1 5 4.93 ±0.09 4.88 ±0.09 4.79 ±0.13 3 5 4.97 ±0.06 5.01 ±0.12 4.71 ±0.19 5 5 4.55 ±0.15 4.99 ±0.16 4.89 ±0.14 7 5 3.92 ±0.151）2）3.46 ±0.161）2） 4.73 ±0.18 9 5 4.05 ±0.131）2）4.08 ±0.121）2） 4.89 ±0.12 11 5 3.99 ±0.091）2）4.26 ±0.151）2） 5.09 ±0.30 13 5 5.10 ±0.11 5.11 ±0.09 4.95 ±0.13 15 5 5.05 ±0.11 5.09 ±0.08 4.77 ±0.09

圖2 ELISA技術(shù)檢測各組感染后小鼠肺泡巨噬細(xì)胞Fn的表達(dá)Fig.2 ELISA analysis of Fn expression in culturemedium of infected mouse alveolar macrophages

圖3 W estern blot技術(shù)檢測各組小鼠肺泡巨噬細(xì)胞Fn表達(dá)Fig.3 Analysis of expression of Fn in mouse alveolar macrophages by W estern blot

表3 各組各時間點感染小鼠肺泡巨噬細(xì)胞Fn表達(dá)水平比較（± s）Tab.3 Expression of Fn in infected mouse alveolar macrophages（±s）

表3 各組各時間點感染小鼠肺泡巨噬細(xì)胞Fn表達(dá)水平比較（± s）Tab.3 Expression of Fn in infected mouse alveolar macrophages（±s）

Note:1）P ＜0.05 vs control group;2）P ＜0.05 vs the same group.

Time（Day） n BCG H37Rv Control 1 5 2.02 ±0.17 2.21 ±0.05 2.32 ±0.04 3 5 2.18 ±0.13 2.34 ±0.12 2.47 ±0.07 5 5 1.94 ±0.05 2.30 ±0.03 2.35 ±0.01 7 5 1.31 ±0.121）2）1.04 ±0.141）2）2.05 ±0.12 9 5 1.24 ±0.091）2）1.15 ±0.061）2）2.27 ±0.07 11 5 1.04 ±0.161）2）1.28 ±0.111）2）2.23 ±0.03 13 5 2.09 ±0.11 2.35 ±0.13 1.97 ±0.11 15 5 2.42 ±0.03 2.06 ±0.07 2.24 ±0.08

3 討論

圖4 小鼠肺泡巨噬細(xì)胞Fn在不同時間段的蛋白表達(dá)水平Fig.4 Expression of Fn inmouse alveolarmacrophages in different phases

宿主巨噬細(xì)胞與結(jié)核桿菌之間相互作用的結(jié)果，決定了結(jié)核桿菌感染的后果以及結(jié)核病的發(fā)生與否。本實驗研究設(shè)想這一調(diào)控機(jī)制可能與調(diào)控宿主巨噬細(xì)胞的鐵代謝作用相關(guān)。當(dāng)結(jié)核桿菌感染宿主巨噬細(xì)胞以后，一方面要從感染的宿主巨噬細(xì)胞內(nèi)攝取一定量的鐵，以保證自身在宿主巨噬細(xì)胞內(nèi)的生存、繁殖和分化的需要，同時另一方面還要調(diào)控感染宿主巨噬細(xì)胞的鐵代謝，以避免感染宿主巨噬細(xì)胞內(nèi)鐵含量增加或降低，避免宿主巨噬細(xì)胞發(fā)生應(yīng)激和凋亡。感染宿主巨噬細(xì)胞發(fā)生應(yīng)激和凋亡，能夠殺死寄生于其內(nèi)的結(jié)核桿菌，阻止結(jié)核桿菌在體內(nèi)的播散，并能激活鄰近未感染的巨噬細(xì)胞，增強機(jī)體對結(jié)核桿菌的殺傷能力［1］。

對于結(jié)核桿菌來說鐵是必需的，并且是有潛在毒性的營養(yǎng)物質(zhì)。由于在有氧條件下游離鐵并沒有在機(jī)體內(nèi)發(fā)現(xiàn)。所以結(jié)核桿菌需要一套特殊的鐵攝取系統(tǒng)，來完成自身的復(fù)制。結(jié)核桿菌的鐵攝取系統(tǒng)嚴(yán)格地控制鐵代謝和胞內(nèi)鐵的水平，以防止鐵介導(dǎo)的毒性，導(dǎo)致結(jié)核桿菌死亡。結(jié)核桿菌合成兩個鐵貯存蛋白，鐵蛋白（BfrB）和細(xì)菌鐵蛋白（BfrA）。

蛋白的變化的反應(yīng)是不明確的。有研究通過基因敲除方法，對結(jié)核桿菌BfrA和BfrB蛋白進(jìn)行了功能測定。研究結(jié)果表明:結(jié)核桿菌的鐵蛋白并沒有維持鐵穩(wěn)態(tài)的作用，并且結(jié)核桿菌很容易受到因缺乏鐵而導(dǎo)致的鐵介導(dǎo)的毒性，無法在小鼠體內(nèi)形成慢性感染［2］。

鐵代謝的紊亂已被證明可以顯著地影響宿主對感染的免疫反應(yīng)。在研究中，利用小鼠J774巨噬細(xì)胞過表達(dá)鐵轉(zhuǎn)運蛋白來研究鐵代謝對感染免疫中一氧化氮（NO）釋放的影響。在感染早期，過表達(dá)的鐵轉(zhuǎn)運蛋白顯著抑制胞內(nèi)的結(jié)核桿菌的生長。當(dāng)巨噬細(xì)胞受到脂多糖（LPS）或結(jié)核桿菌的攻擊時，NO的合成增加，但巨噬細(xì)胞表達(dá)鐵轉(zhuǎn)運蛋白則明顯降低。當(dāng)過表達(dá)鐵轉(zhuǎn)運蛋白的J744細(xì)胞受到脂多糖（LPS）或結(jié)核桿菌的攻擊時，iNOS蛋白的表達(dá)上調(diào)顯著降低。從而限制了這些巨噬細(xì)胞的殺菌活性。促炎性細(xì)胞因子γ干擾素可以扭轉(zhuǎn)鐵轉(zhuǎn)運蛋白的過度表達(dá)對NO抑制作用。這些研究結(jié)果提示了一種新的鐵轉(zhuǎn)運蛋白的作用在減弱巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。

有實驗證據(jù)表明，鐵營養(yǎng)狀況影響巨噬細(xì)胞的先天免疫反應(yīng)，包括產(chǎn)生一氧化氮（NO）和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）。在結(jié)核桿菌感染后引起小鼠巨噬細(xì)胞iNOS的表達(dá)上調(diào)和NO生產(chǎn)增加［3-5］。Donovan等［6］通過使用螯合劑和外加鐵來操縱細(xì)胞的鐵的含量，表明宿主細(xì)胞鐵狀態(tài)和iNOS的表達(dá)之間呈反比關(guān)系。在他們的模型中，細(xì)胞內(nèi)鐵的含量增加iNOS活性下降，而鐵耗盡后又導(dǎo)致iNOS活性增強［6］。鐵對這種iNOS活性逆效應(yīng)被認(rèn)為是iNOSmRNA表達(dá)水平改變的結(jié)果［6］。

巨噬細(xì)胞的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)通過吞噬和降解受損或衰老的紅細(xì)胞來獲得鐵［7］。鐵被吸收后可以被存儲在鐵蛋白中。巨噬細(xì)胞通過鐵轉(zhuǎn)運蛋白將鐵轉(zhuǎn)運出胞內(nèi)進(jìn)入血漿［8，9］。到目前為止，鐵轉(zhuǎn)運蛋白是唯一已經(jīng)被確立的鐵的轉(zhuǎn)出通道［10-12］。本實驗對結(jié)核分枝桿菌感染后的小鼠肺泡巨噬細(xì)胞的鐵蛋白和鐵轉(zhuǎn)運蛋白進(jìn)行測定，研究鐵代謝在結(jié)核分枝桿菌感染過程中的作用。

本實驗利用ELISA方法和Western blot技術(shù)檢測各組小鼠肺泡巨噬細(xì)胞Fn表達(dá)，結(jié)果顯示:于模型建成后第7、9、11天，H37Rv組與BCG組的小鼠肺泡巨噬細(xì)胞Fn表達(dá)量明顯減低，并且于第7天時表達(dá)量最低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。利用ELISA方法檢測各組小鼠肺泡巨噬細(xì)胞FNP表達(dá)，結(jié)果顯示:不同毒力菌株感染小鼠肺泡巨噬細(xì)胞后，各感染組內(nèi)巨噬細(xì)胞 FPN隨處理時間延長表達(dá)逐漸降低;于感染第5天開始下降明顯，第7、9天最低。H37Rv株組和BCG組表達(dá)相似，于第5、7、9天明顯低于正常對照組FPN的表達(dá)量，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

通過研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)核桿菌感染小鼠肺泡巨噬細(xì)胞以后，巨噬細(xì)胞內(nèi)鐵代謝發(fā)生一系列改變。鐵蛋白與鐵轉(zhuǎn)運蛋白都呈下降趨勢，這與結(jié)核桿菌急性感染宿主以后需要爭奪小鼠肺泡巨噬細(xì)胞內(nèi)的鐵元素有關(guān)。小鼠肺泡巨噬細(xì)胞內(nèi)鐵元素含量的改變，使機(jī)體發(fā)生一系列的感染免疫反應(yīng)，來對抗結(jié)核桿菌的感染。通過本實驗的研究也為我們提供了治療結(jié)核病的新思路與方法。

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［收稿2013-10-11 修回2013-12-27］

（編輯 張曉舟）

Effect on expression of macrophages ferroportin and ferritin in mouse alveolar macrophages by m ycobacterium tuberculosis

ZHUANGRui，WANGXia，ZHANGFeng，BAOYin，ZHANGLe，WUFang，WUJiang-Dong，ZHANGChun-Jun，ZHANGHui，LIWen-Juan，LIANGChen，F(xiàn)ANChao，ZHANGWan-Jiang.DepartmentofPathophysiology，Medical School，ShiheziUniversity/LaboratoryofXinjiangEndemicandEthnicDiseases，ShiheziUniversity，Shihezi832002，China

Objective:To discuss the change of ferritin（Fn）and ferroportin expression quantity and time-related feature in the alveolarmacrophages ofmice，infected with different virulence ofMycobacterium Tuberculosis infected.Methods:The prepared bacteria of H37Rv or BCG were injected intravenously into themice tails.On the day 1，3，5，7，9，11，13 and 15，the lavage fluidswere collected and the alveolar macrophages were obtained from each group of mice.The expression of FPN and Fn were detected with ELISA and/orWestern blotanalysis.Results:The expression of Fn in the group ofeither H37Rv or BCG infectedmicewas decreased on the day 7，9 and 11，and was lowest on the day 7，which showed significantly statistical difference compared to that on the other days（P ＜0.05）.The expression of FNP in the infected mousemacrophage was decreased gradually，which was obvious on the day 5.The expression levels reached to the lowest on the day 7 and 9.The expression wasmuch lower than that in the negative control group（P ＜0.05）.Conclusion:The expression of Fn and FPN inmacrophages isolated from lungs ofmice infected with Mycobacterium tuberculosis H37Rv or BCG become decreased，and there is no difference between these two infected mouse groups.

book=592,ebook=328

Mycobacterium tuberculosis;Macrophage;Ferritin;Ferroportin

R378

A

1000-484X（2014）05-0591-05

10.3969/j.issn.1000-484X.2014.05.004

莊 睿（1986年－），男，主要從事感染性疾病的病理生理學(xué)研究，E-mail:z176103165@163.com。

及指導(dǎo)教師:張萬江（1967年－），男，教授，醫(yī)學(xué)博士，博士生導(dǎo)師，主要從事感染性疾病的發(fā)病機(jī)制與防治研究，E-mail:zwj1117@sina.com。