盧 云

(成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，成都 610072)

慢性肺源性心臟病(簡(jiǎn)稱肺心病)在我國是常見病、多發(fā)病，平均患病率為0.4%～0.47%。據(jù)估計(jì)，目前我國肺心病患病人數(shù)為550萬，由于肺心病是原發(fā)于重癥胸肺、肺血管基礎(chǔ)疾病的晚期并發(fā)病，后期累及心、肺，并發(fā)癥多而復(fù)雜、危重，住院病死率達(dá)15%左右。肺心病中81.8%的患者由慢性阻塞性肺疾病發(fā)展而來，隨著近年來慢阻肺發(fā)病率的增加，肺心病發(fā)病率也呈上升趨勢(shì)，嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量[1]。自1993年以來我們?cè)陉惤B宏教授、張曉云教授帶領(lǐng)下開展了中西醫(yī)結(jié)合治療肺心病急性期的研究，于2006年開始采用循證醫(yī)學(xué)原則，按照《臨床藥品臨床試驗(yàn)管理規(guī)范(GCP)》要求，進(jìn)行前瞻性、多中心、隨機(jī)對(duì)照臨床研究，并研究了一個(gè)適合中國國情的中西醫(yī)結(jié)合治療肺心病的綜合治療方案，此方案可以降低病死率和致殘率，改善心肺功能，減少平均住院天數(shù)和復(fù)發(fā)次數(shù)，降低住院費(fèi)用，提高生活質(zhì)量。在此基礎(chǔ)上我們還開展了慢性肺源性心臟病急性發(fā)作期中醫(yī)綜合序貫治療方案研究和慢性肺源性心臟病急性發(fā)作期中藥篩選優(yōu)化研究，證實(shí)三拗湯、栝樓薤白半夏湯(去白酒)、桔梗湯三方合方治療慢性肺源性心臟病急性發(fā)作期安全有效，說明中西醫(yī)結(jié)合治療肺心病急性發(fā)作期具有明顯的優(yōu)勢(shì)。麻桔喘咳口服液是我們?cè)谇捌诠ぷ骰A(chǔ)上開發(fā)的中藥制劑，目的在于為肺心病急性發(fā)作期患者提供一種新的簡(jiǎn)便高效的中成藥合劑，本文報(bào)告了該藥對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性肺心病的治療作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD清潔級(jí)大鼠，體質(zhì)量180～220 g，雌雄各半，由四川省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物專委會(huì)養(yǎng)殖場(chǎng)提供(許可證號(hào)SCXK(川)2008-14)。動(dòng)物飼養(yǎng)于成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥理實(shí)驗(yàn)室(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)SYXK(川)2008-028)。飼養(yǎng)觀察室溫度22～24 ℃，相對(duì)濕度65%～75%。全價(jià)鼠顆粒料由四川省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物專委會(huì)養(yǎng)殖場(chǎng)提供。

1.2 藥品與試劑

1.2.1 實(shí)驗(yàn)藥品 麻桔喘咳口服液由成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科提供(麻桔喘咳口服液為院內(nèi)制劑，批號(hào)20110908)，含量為3.5 g生藥/ml，臨床用量為1 g/kg。根據(jù)急性毒性試驗(yàn)結(jié)果及臨床用量，臨用前將麻桔喘咳口服液用蒸餾水分別配成1.2、0.6與0.3 g生藥/ml的藥液，以10 ml/kg灌胃供大鼠試驗(yàn)用，即高、中、低劑量組分別為臨床用藥劑量的12倍、6倍、3倍(根據(jù)動(dòng)物體表面積計(jì)算，相當(dāng)于人等效劑量的2倍、1倍、0.5倍)。肺力咳膠囊0.3 g/粒，貴州健興藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(批號(hào)20110304、20120308，批準(zhǔn)文號(hào)國藥準(zhǔn)字Z20025420)，臨用前用蒸餾水將其配成0.108 g生藥/ml混懸液供大鼠試驗(yàn)用，用蒸餾水配成0.075 g生藥/ml混懸液供小鼠試驗(yàn)用。卡托普利片25 mg/片，汕頭金石制藥總廠生產(chǎn)(批號(hào)120109，批準(zhǔn)文號(hào)國藥準(zhǔn)字H44024904)，臨用前用蒸餾水配成1 mg/ml混懸液供大鼠試驗(yàn)用。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑 野百合堿由sigma公司生產(chǎn)，進(jìn)口分裝；無水乙醇，分析純，成都金山化學(xué)試劑有限公司，500 ml/瓶(批號(hào)20110606)；烏來糖，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，500 g/瓶(批號(hào)T20050610)；0.9%氯化鈉注射液，四川美大康佳藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，500 ml/瓶(批號(hào)100722103，批準(zhǔn)文號(hào)國藥準(zhǔn)字H51022439)；內(nèi)皮素檢測(cè)試劑盒，北京北方生物技術(shù)研究所(批號(hào)20120306)；NO檢測(cè)試劑盒，南京建成生物工程研究所(批號(hào)20120405)。

1.3 儀器

十萬分之一電子分析天平，德國Sartorius；電子天平T-1000型，美國G&G；BASIC半自動(dòng)生化儀，法國SECOMAM；高壓滅菌鍋(YX-280D)，合肥華泰醫(yī)療設(shè)備有限公司。

1.4 方法

SD大鼠56只，體質(zhì)量180～220 g，雌雄各半。按體質(zhì)量和性別隨機(jī)分為7組，每組8只，分別為麻桔喘咳口服液高劑量組(12 g生藥/kg)、中劑量組(6 g生藥/kg)、低劑量組(3 g生藥/kg)，以下簡(jiǎn)稱高劑量組、中劑量組、低劑量組和肺力咳組(1.08 g/kg)、卡托普利組(10 mg/kg)、模型組和正常對(duì)照組。除正常對(duì)照組外，各組大鼠以1%野百合堿溶液(無水乙醇∶生理鹽水=2∶3)腹腔一次性注射造模5 ml/kg，劑量為50 mg/kg。造模后1周開始灌胃給藥，每日1次，給藥容量為10 ml/kg，正常對(duì)照組及模型組灌胃等容量的蒸餾水，連續(xù)給藥14 d。末次灌胃給藥1 h后，眼眶后靜脈叢取血。分離血清，分光光度法檢測(cè)一氧化氮NO含量；分離血漿，放免法檢測(cè)內(nèi)皮素ET-1含量。處死大鼠，取心臟解剖分離右心室(RV)和左心室(LV)+室間隔(S)分別稱重，計(jì)算各組右心肥厚指數(shù)。右心肥厚指數(shù)=右心室/(左心室+室間隔)，即RV/(LV+S)。以t檢驗(yàn)對(duì)各組NO、ET-1、RV/(LV+S)進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

取肺投入10%甲醛溶液中固定、石蠟包埋，切片4 μm，HE染色，光鏡下觀察。

1.5.1 肺動(dòng)脈面積、肺動(dòng)脈血管壁面積觀察檢測(cè) 先用低倍(100×)觀察HE染色切片肺組織內(nèi)肺動(dòng)脈，尋找5個(gè)肺動(dòng)脈橫斷面大小接近的肺動(dòng)脈作為測(cè)量目標(biāo)，然后在中倍(200×)鏡下用圖像分析系統(tǒng)(Mias2000)測(cè)量5個(gè)肺動(dòng)脈橫斷面血管的面積及相應(yīng)肺動(dòng)脈管壁面積，計(jì)算5個(gè)肺動(dòng)脈橫斷面面積之和、5個(gè)肺動(dòng)脈橫斷面管壁面積之和，表示肺動(dòng)脈面積、肺動(dòng)脈管壁面積。

1.5.2 肺動(dòng)脈管腔面積檢測(cè) 上述5個(gè)肺動(dòng)脈橫斷面面積之和減去相應(yīng)5個(gè)肺動(dòng)脈橫斷面管壁面積之和等于5個(gè)肺動(dòng)脈橫斷面管腔面積之和，表示肺動(dòng)脈管腔面積。

1.5.3 肺動(dòng)脈血管壁面積絕對(duì)值、血管腔面積絕對(duì)值計(jì)算 為排除因選擇肺動(dòng)脈大小不一致所致肺動(dòng)脈管壁和管腔大小不一致導(dǎo)致的統(tǒng)計(jì)差異，統(tǒng)計(jì)時(shí)采用肺動(dòng)脈管壁和肺動(dòng)脈管腔的絕對(duì)值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。肺動(dòng)脈管壁面積絕對(duì)值=肺動(dòng)脈管壁面積/肺動(dòng)脈面積，肺動(dòng)脈管腔面積絕對(duì)值=肺動(dòng)脈管腔面積/肺動(dòng)脈面積。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)量資料用One-Way ANOVA-t檢驗(yàn)，組間比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

表1顯示，與對(duì)照組比較，模型組大鼠血液中ET-1含量升高，NO含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明模型組大鼠形成肺心病模型的ET-1/NO失衡，血管收縮因子ET-1增加，血管舒張因子NO減少。與模型組比較，麻桔喘咳口服液能降低血漿ET-1水平，其中麻桔喘咳口服液中劑量組(6 g生藥/kg) 與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；同時(shí)麻桔喘咳口服液能升高血清NO水平，中劑量組 (6 g生藥/kg)、小劑量組(3 g生藥/kg)與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。上述結(jié)果表明，麻桔喘咳口服液能通過降低ET-1水平、增加NO水平，從而改善肺心病模型的ET-1/NO失衡。與模型組比較，陽性藥卡托普利(10 mg/kg)同樣能明顯降低ET-1水平，增加NO水平(P<0.05)。

表1顯示，與對(duì)照組比較，模型組大鼠右心肥厚指數(shù)增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。與模型組比較，麻桔喘咳口服液給藥組右心肥厚指數(shù)有下降趨勢(shì)，但與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。陽性藥卡托普利(10 mg/kg)能明顯降低右心肥厚指數(shù) (P<0.05)，說明卡托普利能減輕野百合堿所致肺心病大鼠右心肥厚。

表1 麻桔喘咳口服液對(duì)肺心病大鼠ET-1、NO、右心肥厚指數(shù)的影響

注：與對(duì)照組比較:#P<0.05，##P<0.01；與模型組比較:*P<0.05，**P<0.01

表2顯示，病理組織學(xué)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，麻桔喘咳口服液能不同程度地使肺動(dòng)脈血管壁面積縮小，即使肺動(dòng)脈血管壁變薄，同時(shí)使血管腔面積增大；麻桔喘咳口服液低劑量組可顯著降低肺動(dòng)脈血管壁厚度、增加血管腔面積；麻桔喘咳口服液大、中劑量組有降低肺動(dòng)脈血管壁厚度和增加血管腔面積的趨勢(shì)。

表2 麻桔喘咳口服液對(duì)肺心病大鼠肺動(dòng)脈血管壁面積絕對(duì)值及血管腔面積絕對(duì)值的影響

注：與模型組比較：*P<0.05，與模型組比較：**P<0.01

病理照片如下：

4 討論

慢性肺源性心臟病屬于中醫(yī)“喘證、痰飲、肺脹”范疇。我們前期研究發(fā)現(xiàn)，肺心病急性發(fā)作期的基本病機(jī)為痰濕蘊(yùn)肺、肺氣閉郁，以宣肺平喘、化痰止咳為治法。我們體會(huì)到中醫(yī)藥在救治肺心病中所起的作用：(1)稀釋痰液，促進(jìn)痰液引流，改善通氣，提高抗感染的效果；(2)增進(jìn)病人食欲，改善營(yíng)養(yǎng)，防止呼吸肌疲勞，減少呼吸機(jī)待機(jī)時(shí)間；(3)降低肺動(dòng)脈高壓，改善右心功能；(4)每劑中藥含K+為90～110 mmol/L,可補(bǔ)充K+，防止低鉀性堿中毒；(5)溫腎陽中藥能提高人體免疫力，減輕對(duì)糖皮質(zhì)激素的依賴，縮短使用激素的時(shí)程。

麻桔喘咳口服液具有宣肺平喘、豁痰開胸的功效，臨床用于痰濁內(nèi)阻所致肺脹、哮喘、咳嗽等療效顯著。因此在主要藥效學(xué)試驗(yàn)中，采用野百合堿誘發(fā)大鼠肺心病模型評(píng)價(jià)麻桔喘咳口服液的治療作用。通過測(cè)定血管收縮因子內(nèi)皮素(ET-1)和血管舒張因子一氧化氮(NO)的含量變化，探討麻桔喘咳口服液改善肺血管舒縮功能的作用；通過測(cè)定右心肥厚指數(shù)，探討麻桔喘咳口服液改善肺動(dòng)脈高壓、減輕右心肥厚的效果；通過肺病理組織學(xué)，探討麻桔喘咳口服液減輕肺血管增生重構(gòu)的效果。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，麻桔喘咳口服液高劑量組(12 g生藥/kg)、中劑量組(6 g生藥/kg)、低劑量組(3 g生藥/kg)能明顯改善野百合堿致肺心病模型大鼠血中血管收縮因子內(nèi)皮素/血管舒張因子一氧化氮的失衡(P<0.05或P<0.01)，有減輕右心肥厚指數(shù)RV/(LV+S)的趨勢(shì)。病理組織學(xué)結(jié)果顯示，麻桔喘咳口服液能不同程度地降低肺動(dòng)脈血管壁厚度，增加血管腔面積，說明麻桔喘咳口服液能減輕肺動(dòng)脈的血管增生。

綜上所述，主要藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明，麻桔喘咳口服液能通過緩解ET-1/NO失衡、減輕右心肥厚和肺血管增生重構(gòu)治療肺心病。在目前治療肺心病藥物較為匱乏的情況下，麻桔喘咳口服液的臨床應(yīng)用前景廣闊。

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