何海紅　何雅娟

(中國計(jì)量科學(xué)研究院，北京 100029)

0　引言

液相色譜儀用熒光檢測器屬于選擇性檢測器，其靈敏度在液相色譜儀所有常用檢測器中是最高的，主要用來測量能夠產(chǎn)生熒光的樣品，如水中的多環(huán)芳烴，也可以用來檢測本身不產(chǎn)生熒光但經(jīng)過衍生化后可產(chǎn)生熒光的物質(zhì)，如某些酚類或氨基酸類物質(zhì)。

對(duì)于熒光檢測器的檢定，按JJG 705—2002液相色譜儀檢定規(guī)程的要求，需采用硫酸奎寧樣品。但是，在實(shí)際檢定中，經(jīng)常出現(xiàn)高濃度硫酸奎寧樣品峰形分叉或變形的情況，使檢定過程很困難。鑒于此，在新修訂的JJG 705—2014液相色譜儀檢定規(guī)程(于2014年8月14日實(shí)施)中，對(duì)熒光檢測器的檢定，樣品改用萘-甲醇溶液，避免了以上的情況發(fā)生，使得檢定可以順利進(jìn)行。

本文以Agilent1100型熒光檢測器的檢定例，介紹如何按照新檢定規(guī)程要求，對(duì)熒光檢測器進(jìn)行檢定，以供廣大檢定員參考，方便大家的日常檢定工作。

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1　主要儀器與試劑

配置熒光檢測器的Agilent 1100液相色譜系統(tǒng)。

甲醇：色譜純，merk公司。

萘-甲醇：標(biāo)物編號(hào)GBW(E)130167，1.00×10-4g/mL，U=4％，k=2；標(biāo)物編號(hào)GBW(E)130168，1.00×10-7g/mL，U=4％，k=2。

移液器：Eppendorf，1mL。

容量瓶：10mL，A級(jí)別。

1.2　色譜條件

色譜柱：AgilentZORBAX Eclipse XDB C-18(150mm×4.6mm,3.5μm)；流動(dòng)相：甲醇；流速：1.0mL/min；激發(fā)波長Ex=290nm，發(fā)射波長Em=330nm。

2　熒光檢測器檢定

2.1　檢定過程

1)打開儀器電源，安裝色譜柱與放好流動(dòng)相，然后，打開檢測器氙燈燈與泵進(jìn)行預(yù)熱，按照1.2的條件對(duì)儀器進(jìn)行設(shè)定，等30min后儀器達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)；

2)用標(biāo)物編號(hào)GBW(E)130167萘-甲醇溶液稀釋10倍，得到1.00×10-5g/mL的萘-甲醇溶液，然后，用此溶液進(jìn)行定性定量重復(fù)性檢定，連續(xù)進(jìn)樣7次，每次進(jìn)樣10μL，取后面6次作為定性定量重復(fù)性數(shù)據(jù)，記錄每個(gè)數(shù)據(jù)中萘-甲醇的保留時(shí)間和峰面積，分別計(jì)算保留時(shí)間和峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差；

3)用標(biāo)物編號(hào)GBW(E)130168，1.00×10-7g/mL萘-甲醇溶液進(jìn)行最小檢測濃度檢定，連續(xù)進(jìn)樣3次，每次進(jìn)樣20μL，記錄每個(gè)數(shù)據(jù)中萘-甲醇的峰高，取3個(gè)峰高值的平均值作為最終峰高值。

4)按照1.2色譜條件，不進(jìn)樣，采集30min空白基線，記錄色譜圖。

2.2　檢定數(shù)據(jù)

1)萘-甲醇溶液在Agilent 1100熒光檢測器上的定性定量重復(fù)性色譜圖見圖1，定性定量重復(fù)性測定數(shù)據(jù)見表1。

圖1　萘-甲醇溶液定性定量重復(fù)性色譜圖

表1　萘-甲醇溶液定性定量重復(fù)性數(shù)據(jù)

注：LU是1100熒光檢測器縱坐標(biāo)單位

2)萘-甲醇溶液在Agilent 1100熒光檢測器上的最小檢測濃度數(shù)據(jù)色譜圖見圖2，最小檢測濃度峰高數(shù)據(jù)見表2，最小檢測濃度最終結(jié)果見表3。計(jì)算公式見式(1):

圖2　萘-甲醇溶液最小檢測濃度色譜圖

表2　萘-甲醇溶液最小檢測濃度峰高數(shù)據(jù)

表3　萘-甲醇溶液最小檢測濃度數(shù)據(jù)

(1)

式中，cL為最小檢測濃度，g/mL；Nd為基線噪聲峰高；c為標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，g/mL；V為進(jìn)樣體積，μL；H為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)峰高。

3)Agilent1100熒光檢測器上的噪音數(shù)據(jù)色譜圖見圖3，漂移數(shù)據(jù)色譜圖見圖4，噪音、漂移數(shù)據(jù)見表4。

圖3　1100熒光檢測器噪音色譜圖

圖4　1100熒光檢測器漂移色譜圖

表4　1100熒光檢測器噪音、漂移數(shù)據(jù)

4)Agilent 1100熒光檢測器檢定結(jié)果匯總見表5。

表5　1100熒光檢測器檢定結(jié)果匯總

3　結(jié)語

從以上的數(shù)據(jù)可以看出，在日常液相色譜儀的檢定工作中，按照J(rèn)JG 705—2014 液相色譜儀檢定規(guī)程的要求進(jìn)行設(shè)定，可以順利的進(jìn)行液相色譜儀用熒光檢測器的檢定工作。這次規(guī)程修訂將流動(dòng)相改成100％甲醇，同時(shí)提高了串聯(lián)檢測器的檢定效率。規(guī)程的完善需要廣大檢定員共同的努力，在實(shí)際工作中會(huì)碰到各種問題，希望大家能多交流多討論，讓我們的檢定規(guī)程更加科學(xué)和完善。

[1]JJG 705—2014 液相色譜儀檢定規(guī)程.北京：中國質(zhì)檢出版社，2014

[2]JJG 705—2002 液相色譜儀檢定規(guī)程.北京：中國計(jì)量出版社，2002

[3]汪正范.色譜定性與定量.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000

[4]張慶和.高效液相色譜實(shí)用手冊(cè).北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2008

[5]于世林.高效液相色譜方法及應(yīng)用.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000