杜麗東, 吳國(guó)泰, 景 琪, 劉五州, 李應(yīng)東, 任 遠(yuǎn)*

（1.甘肅中醫(yī)學(xué)院, 甘肅 蘭州 730000； 2.甘肅省中藥藥理與毒理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 甘肅 蘭州 730000）

[藥 理]

當(dāng)歸腹痛寧滴丸治療腸易激綜合征的藥效學(xué)研究

杜麗東1,2, 吳國(guó)泰1,2, 景 琪1, 劉五州1, 李應(yīng)東1, 任 遠(yuǎn)1,2*

（1.甘肅中醫(yī)學(xué)院, 甘肅 蘭州 730000； 2.甘肅省中藥藥理與毒理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 甘肅 蘭州 730000）

目的 觀察當(dāng)歸腹痛寧滴丸 （當(dāng)歸油） 對(duì)腸易激綜合征模型大鼠的治療作用， 探討作用機(jī)制。 方法 采用8種刺激誘導(dǎo)大鼠建立腸易激綜合征模型， 隨機(jī)分為正常組、 模型組、 陽(yáng)性組 （匹維溴銨）、 當(dāng)歸腹痛寧滴丸高、 中、 低劑量組， 每組 10 只， 連續(xù)給藥 31 d， 定期測(cè)定各組大鼠的體質(zhì)量、 攝食量、 排便情況、 自主運(yùn)動(dòng)量， 末次給藥后測(cè)定胃排空率和腸推進(jìn)率， 放射免疫法測(cè)定血清以及結(jié)腸勻漿 5-HT、 血漿和結(jié)腸勻漿 P物質(zhì) （SP）、 血管活性腸肽（VIP） 水平。 結(jié)果 給予當(dāng)歸腹痛寧滴丸后， 大鼠攝食量和排便量增加， 固體粒狀糞便增多， 隨后體質(zhì)量和攝食明顯增加，運(yùn)動(dòng)量接近正常，依次為當(dāng)歸腹痛寧滴丸高、中劑量組。大鼠胃排空率增加和腸推進(jìn)率減小亦如此。當(dāng)歸腹痛寧滴丸使大鼠血清 5-HT水平下降， 血漿 VIP水平升高， 和結(jié)腸勻漿 5-HT水平下降， 以高劑量組為明顯。 結(jié)論 當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)腸易激綜合征具有一定的治療作用， 其作用機(jī)制與抑制腦腸軸 5-HT和 VIP過(guò)度分泌和向正常水平恢復(fù)有關(guān)。

當(dāng)歸腹痛寧滴丸; 腸易激綜合征; 胃腸功能;5-羥色胺;P物質(zhì); 血管活性腸肽

腸易激綜合征 （IBS） 是現(xiàn)代社會(huì)環(huán)境下消化系統(tǒng)的多發(fā)病和常見疾病，表現(xiàn)為腹部不適或腹痛，胃腸動(dòng)力異常，大便性狀改變以及神經(jīng)精神改變?yōu)樘卣鞯陌Y候群，因其缺乏形態(tài)學(xué)、生化等特異改變， 病因多樣且發(fā)病機(jī)制尚不明確［1］。 研究表明［2，3］， 腸 易激綜合 征 病 人中存在 5-羥色胺 （5-HT）、 P物質(zhì) （SP）、 血管活性腸肽 （VIP） 等胃腸激素水平異常;多數(shù)患者伴有抑郁、焦慮、緊張等情緒變化，長(zhǎng)期的精神神經(jīng)異常因素可通過(guò)腦-腸軸引起胃腸運(yùn)動(dòng)、分泌功能障礙，進(jìn)而引起腸易激綜合征加劇。

當(dāng)歸腹痛寧滴丸 （國(guó)藥準(zhǔn)字 Z62020027） 是蘭州和盛堂制藥有限公司生產(chǎn)的腸溶滴丸，主要成分為當(dāng)歸油，具有解痙止痛的作用，適用于感染性腹瀉引起的急性腹痛，婦女痛經(jīng)及產(chǎn)后宮縮痛等。前期研究顯示當(dāng)歸油具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、改善胃腸 動(dòng) 力 等 作 用［4-6］。本 研 究 采 用 復(fù) 合 因 素 誘導(dǎo)大鼠建立腸易激綜合征模型，觀察當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)模型大鼠的治療作用，并探討其對(duì)血液和腸組織中 5-HT水平、 胃腸激素 （ SP、 VIP） 水平的影響，為當(dāng)歸腹痛寧滴丸用于治療腸易激綜合征提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物 SD大鼠， SPF級(jí)， 雌雄各半， 體質(zhì)量160 ～180 g， 由甘肅中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格 證 號(hào) SCXK （ 甘） 2011-0004。 喂 標(biāo) 準(zhǔn) 飼 料（由甘肅中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供）， 飼養(yǎng)溫度:（20 ±2）℃， 相對(duì)濕度 60% ～70%， 適應(yīng) 7 d 后開始實(shí)驗(yàn)。

1.2 藥品與試劑 當(dāng)歸腹痛寧滴丸 （含當(dāng)歸油的腸溶滴丸， 丸芯質(zhì)量 20 mg， 口服， 頓服 10 ～15?；蛉辗? 次， 每次 10 ～15 粒） 由蘭州和盛堂制藥有限公司生產(chǎn)， 批號(hào) 121002; 匹維溴銨片由法國(guó)蘇威制藥公司生產(chǎn)， 批號(hào) 620016;5-HT、SP、VIP放射免疫試劑盒及 DAB顯色劑均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司;其他試劑均為分析純。

1.3 儀器 冰柜 （北京福意電器有限公司）; 烘箱 （上海島韓實(shí)業(yè)有限公司）; 振蕩器 （哈爾濱市東明醫(yī)療儀器廠）; 噪聲測(cè)定儀 （北京天安聯(lián)合科技有限公司）; 電子天平 （德國(guó)賽多利斯）;GC-911-C-放射免疫計(jì)數(shù)器 （ 中國(guó)科技大學(xué)實(shí)業(yè)總公司）; 敞箱 （80 cm×80 cm×40 cm） 為自制。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 造模、 分組與給藥 參考文獻(xiàn)并改進(jìn)［7-8］， 60只 SD大鼠隨機(jī)分為正常組 （10 只） 和模型組（50 只）。 正常組大鼠分性別每籠 5 只常規(guī)飼養(yǎng)，不給任何刺激。模型組大鼠每籠1只孤養(yǎng)，并加以不可預(yù)見性刺激，刺激因子包括禁水禁食、晝夜顛倒、冷刺激、熱刺激、致痛、制動(dòng)、高速震蕩和噪聲共8種， 刺激因子在 40 d 內(nèi)隨機(jī)安排， 每天 1種，每種刺激出現(xiàn)5次，每種刺激不連續(xù)出現(xiàn)，造模40 d。 應(yīng)激刺激操作方法， 禁水禁食:24 h 內(nèi)斷水?dāng)嗉Z; 晝夜顛倒: 于早 7 ∶00 時(shí)將動(dòng)物放入暗室中， 不開燈使動(dòng)物處于黑暗狀態(tài); 至晚19 ∶00時(shí)將暗室中照明燈打開，使動(dòng)物處于光照狀態(tài)，直至次日早7時(shí)取出;冷刺激:將大鼠置于4℃冰柜中15 min 后取出; 熱刺激: 將大鼠置于 45 ℃的烘箱中 15 min 后取出; 致痛: 用止血鉗夾住大鼠距尾尖 1 cm處 （用力不宜過(guò)大， 動(dòng)物發(fā)出哀叫聲即可） 持續(xù) 2 min; 制動(dòng): 將大鼠置于固定器中 5 h;高速震蕩:將大鼠放入振蕩器中，高速水平震蕩（110 r/min） 15 min 后取出; 噪聲: 將大鼠置于玻璃鐘罩內(nèi)， 給 150 db 鬧鈴刺激 10 min。

將模型動(dòng)物隨機(jī)分為模型組、陽(yáng)性組 （灌胃匹維溴銨 15.0 mg/kg體質(zhì)量，相當(dāng)于臨床成人日用量的 7倍）、 當(dāng)歸腹痛寧滴丸高、 中、 低劑量（分別灌胃當(dāng)歸腹痛寧滴丸 120、 60、 30 mg/kg，相當(dāng)于臨床成人日用量的 14 倍、7 倍和 3.5 倍），每組 10 只， 按性別每籠 5 只常規(guī)飼養(yǎng)， 按 10 mL/kg體質(zhì)量容量灌胃， 正常組與模型組大鼠灌胃等容量蒸餾水， 連續(xù)31 d。

2.2 檢測(cè)指標(biāo)與方法

2.2.1 體質(zhì)量、攝食量 分別在給藥前和給藥第9、 第 19、 第 29 天上午 9 ∶00 時(shí)加飼料 100 g， 次日9 ∶00 時(shí)稱定剩余飼料質(zhì)量， 并稱定動(dòng)物體質(zhì)量， 計(jì)算24 h 攝食量， 攝食量 = （食物總量 -食物余量） /體質(zhì)量。

2.2.2 排便情況 分別在給藥前和給藥第 10、 第20、 第 30 天， 在直徑 60 cm的圓盆中盛滿水 （水溫 10 ℃ ±1 ℃）， 水中央放置直徑 10 cm的柱形平臺(tái)， 平臺(tái)面高出水面約 1 cm， 將各組大鼠置于平臺(tái)上，觀察各大鼠2 h內(nèi)排便情況，定形糞便記錄粒數(shù)，不定形或稀便記錄排便次數(shù);并對(duì)每?；蛎看渭S便性狀評(píng)分，泄瀉稀便計(jì)0分，軟便無(wú)定形計(jì)1分，軟便定形計(jì)2分，固體定形計(jì)3分，累積記錄各大鼠2 h內(nèi)糞便的評(píng)分。

2.2.3 自主運(yùn)動(dòng)量［9］自制敞箱 （ 高 40 cm， 長(zhǎng)寬均為80 cm，周壁為黑色， 白色地面用黑線劃分為面積相等的 25 塊）， 在暗的、無(wú)噪音、 安靜的房間進(jìn)行。 敞箱中央上方1 m處懸掛1 個(gè)100W燈泡。 給藥前和給藥第10、 第 20、 第 30 天將每只大鼠置于光潔敞箱的中央， 以 5 min 內(nèi)大鼠穿越地面方塊數(shù)作為水平運(yùn)動(dòng)得分， 以 5 min 內(nèi)直立次數(shù)為垂直運(yùn)動(dòng)得分，將得分加和表示大鼠的運(yùn)動(dòng)量，每只大鼠測(cè)定一次。

2.2.4 胃腸動(dòng)力［10］第 31 天給藥 1 h 后 （事先已禁食不禁水 12 h），各組大鼠灌胃半固體糊2.0 mL/只 （配制方法:16 g奶粉、 8 g蔗糖、 5 g活性炭、 10 g小鼠飼料粉 （過(guò) 80 目篩） 加入 250 mL的 5%的羧甲基纖維素懸液中， 充分?jǐn)嚢杌靹颍?30 min 后股動(dòng)脈放血， 取血約 1 mL加入抗凝管制備血漿， 另取血約2 mL自然凝固4 h制備血清，頸椎脫臼處死大鼠，開腹，結(jié)扎幽門和賁門，取胃，用濾紙擦干后稱定全質(zhì)量，然后沿胃大彎剪開胃體，洗去胃內(nèi)容物后擦干，稱凈重。迅速取出小腸，分離系膜，輕輕直鋪于水平白色臺(tái)面上，測(cè)量小腸全長(zhǎng) （幽門至回盲部距離） 及推進(jìn)距離 （幽門至半固體糊前沿的距離）。 分別計(jì)算胃排空率和腸推進(jìn)率。

胃排空率 （%） = ［（灌胃半固體糊質(zhì)量 -胃內(nèi)殘留糊質(zhì)量） /灌胃半固體糊質(zhì)量］ ×100%， 其中胃內(nèi)殘留糊質(zhì)量=胃全質(zhì)量-胃凈質(zhì)量; 腸推進(jìn)率（%） =（推進(jìn)距離/小腸全長(zhǎng)） ×100%

2.2.5 血清 或血漿、 結(jié) 腸勻漿 5-HT、 SP和 VIP水平 大鼠動(dòng)脈血室溫凝固 4 h， 低溫離心 3 000 r/min ×15 min， 分離血清 -20 ℃保存， 抗凝血低溫離心 4 000 r/min ×15 min， 分離血漿 -20 ℃ 保存， 按試劑盒說(shuō)明書測(cè)定血清 5-HT、 血漿 SP和VIP水平; 測(cè)完腸推進(jìn)后迅速摘取大鼠肛門上方3 cm處結(jié)腸 1 ～2 cm， 用生理鹽水洗凈內(nèi)容物， 稱重后加入冷生理鹽水手動(dòng)研磨制備 10%的組織勻漿， 于 4 000 r/min ×20 min 離心， 取上清 -20 ℃保存， 按試劑盒說(shuō)明書測(cè)定組織勻漿 5-HT、 SP和VIP水平。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 各組數(shù)據(jù)采用 SPSS13.0 統(tǒng)計(jì)軟件處理， 以均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差 （） 表示， 多組間比較采用單因素方 差分析 （one-way ANOVA），兩組間比較采用 t檢驗(yàn)， P＜0.05 差 異 具 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)腸易激綜合征模型大鼠體質(zhì)量的影響 見表1。

表1 當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)腸易激綜合征模型大鼠體質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果 （， n=10）Tab.1 Effects on rats’ w eight（， n=10）

表1 當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)腸易激綜合征模型大鼠體質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果 （， n=10）Tab.1 Effects on rats’ w eight（， n=10）

注: 與正常組比較，**P＜0.01; 與模型組比較，#P＜0.05

組別 劑量/（ mg·kg-1）給藥前體質(zhì)量/ g給藥后體質(zhì)量/g第 10 天 第20 天 第30天正常組 —221.0 ±24.1 234.2 ±27.3 259.9 ±25.4 298.4 ±19.3模型組 — 187.5 ±18.2** 193.0 ±20.0** 211.6 ±18.7** 232.4 ±28.6**陽(yáng)性組 15 184.7 ±22.5** 199.6 ±23.7 235.2 ±15.5# 258.9 ±21.3#當(dāng)歸腹痛寧滴丸高劑量組 120 185.0 ±15.6** 203.5 ±25.8 232.0 ±15.2# 263.2 ±30.8#當(dāng)歸腹痛寧滴丸中劑量組 60 180.8 ±19.2** 196.3 ±29.1 228.8 ±21.3 246.9 ±24.7當(dāng)歸腹痛寧滴丸低劑量組 30 184.2 ±22.9**198.3 ±23.2 221.6 ±22.0 239.0 ±27.2

與正常組比較，造模后各大鼠體質(zhì)量明顯減輕（P＜0.01），給藥第 10 天， 各組大鼠體質(zhì)量均有增加，與模型組比較，各給藥組組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; 給藥第 20 天和第 30 天， 各組大鼠體質(zhì)量明顯增加，陽(yáng)性組和當(dāng)歸腹痛寧滴丸高劑量組增加顯著 （P＜0.05）。

3.2 當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)腸易激綜合征模型大鼠攝食量的影響 見表2。

與正常組比較， 造模后各組大鼠24 h 內(nèi)平均攝食量明顯減少 （P＜0.01），給藥第 10 天， 各組大鼠平均攝食量均有增加，與模型對(duì)照組比較，各給藥組組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; 給藥第20 天， 各組大鼠24 h內(nèi)平均攝食量明顯增加， 與模型組比較， 陽(yáng)性組和當(dāng)歸腹痛寧滴丸高劑量組增加顯著 （P＜0.05， P＜0.01）; 給藥第 30 天， 陽(yáng)性組、 當(dāng)歸腹痛寧滴丸高、中、 低劑量組增加顯著 （P＜0.05， P＜0.01）。

表2 當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)腸易激綜合征模型大鼠攝食量的影響 （， n=10）Tab.2 Effects on feed consum ption in rats（， n=10）

表2 當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)腸易激綜合征模型大鼠攝食量的影響 （， n=10）Tab.2 Effects on feed consum ption in rats（， n=10）

注: 與正常組比較，**P＜0.01; 與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

組別 劑量/（mg·kg-1）給藥前攝食量/（g/100 g體質(zhì)量）給藥后攝食量/（g/100 g體質(zhì)量）第10 天 第20 天 第30天正常組 —4.7 ±0.3 5.4 ±0.7 5.5 ±0.6 6.0 ±0.9模型組 — 3.1 ±0.5** 3.3 ±1.2** 3.7 ±0.6** 3.8 ±1.2**陽(yáng)性組 15 2.7 ±1.2** 3.6 ±1.4 4.6 ±1.1# 5.4 ±0.2##當(dāng)歸腹痛寧滴丸高劑量組 120 3.2 ±1.5** 3.7 ±0.4 5.0 ±0.6## 5.6 ±0.2##當(dāng)歸腹痛寧滴丸中劑量組 60 2.9 ±1.5** 3.6 ±0.7 4.1 ±0.9 5.2 ±0.6##當(dāng)歸腹痛寧滴丸低劑量組 30 3.3 ±1.0** 3.5 ±0.7 4.0 ±1.7 4.9 ±0.8#

3.3 當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)腸易激綜合征模型大鼠排 便情況的影響 見表3， 表4。

表3 當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)腸易激綜合征模型大鼠排便量的影響 （， n=10）Tab.3 Effects on the quantities of stool in rats（， n=10）

表3 當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)腸易激綜合征模型大鼠排便量的影響 （， n=10）Tab.3 Effects on the quantities of stool in rats（， n=10）

注: 與正常組比較，＊P＜0.05，**P＜0.01; 與模型組比較，#P＜0.05

組別 劑量/（mg·kg-1）給藥前排便粒數(shù)或次數(shù) /（n/2 h）給藥后排便粒數(shù)或次數(shù)/（n/2 h）第10 天 第20 天 第30天正常組 —4.2 ±1.9 5.1 ±2.1 4.9 ±2.4 5.4 ±2.3模型組 — 6.9 ±1.5** 7.6 ±1.8* 7.3 ±1.7* 6.8 ±1.8陽(yáng)性組 15 6.7 ±1.5** 5.4 ±2.1# 5.2 ±2.3# 5.1 ±2.2當(dāng)歸腹痛寧滴丸高劑量組 120 7.2 ±2.4** 6.5 ±2.5 5.0 ±1.9# 5.0 ±1.7#當(dāng)歸腹痛寧滴丸中劑量組 60 7.0 ±2.1** 7.4 ±2.9 7.2 ±2.5 4.5 ±2.6#當(dāng)歸腹痛寧滴丸低劑量組 30 6.2 ±2.3**7.3 ±3.0 7.6 ±2.1 6.0 ±2.2

如表3所示，與正常組比較，造模后各大鼠2 h內(nèi)排便量明顯增多 （P＜0.01）， 給藥第 10 天，與模型組比較， 陽(yáng)性組大鼠排便量減少 （P＜0.05）; 給藥第20 天， 陽(yáng)性組和當(dāng)歸腹痛寧滴丸高劑量組大鼠排便量減少 （P＜0.05）; 給藥第 30天，當(dāng)歸腹痛寧滴丸高、中劑量組大鼠排便量明顯減少 （P＜0.05）。

表4 當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)腸易激綜合征模型大鼠糞便性狀總評(píng)分的影響 （， n=10）Tab.4 Effects on scores of stool characteristics in rats（， n=10）

表4 當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)腸易激綜合征模型大鼠糞便性狀總評(píng)分的影響 （， n=10）Tab.4 Effects on scores of stool characteristics in rats（， n=10）

注: 與正常組比較，**P＜0.01; 與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

組別 劑量/（mg·kg-1）給藥前糞便總評(píng)分（n）給藥后糞便總評(píng)分（n）第10 天 第20 天 第30天正常組 —13.2 ±3.8 15.5 ±4.1 14.7 ±3.4 16.4 ±4.3模型組 — 2.8 ±1.1 5.6 ±1.7** 7.2 ±4.6** 9.6 ±3.8**陽(yáng)性組 15 3.1 ±1.3 8.0 ±2.2# 11.6 ±4.4# 13.9 ±4.5#當(dāng)歸腹痛寧滴丸高劑量組 120 2.2 ±0.5 8.5 ±2.7# 12.0 ±3.8# 15.2 ±3.9##當(dāng)歸腹痛寧滴丸中劑量組 60 2.6 ±1.1 6.8 ±2.0 9.8 ±3.5 14.1 ±5.6#當(dāng)歸腹痛寧滴丸低劑量組30 3.2 ±1.3 5.3 ±1.1 8.6 ±4.7 10.0 ±4.4

結(jié)果顯示，與正常組比較，造模后各大鼠均出現(xiàn)稀便和無(wú)定形軟便 （P＜0.01）， 給藥第 10 天，與模型對(duì)照組比較，各給藥組大鼠稀便減少，以無(wú)定形軟便為主，陽(yáng)性組和當(dāng)歸腹痛寧滴丸高劑量組組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）; 給藥第 20天，陽(yáng)性組和當(dāng)歸腹痛寧滴丸高劑量組大鼠固體粒狀糞便增多 （P＜0.05）; 給藥第 30 天， 陽(yáng)性組、當(dāng)歸腹痛寧滴丸高、中劑量組大鼠糞便性狀接近正常 （P＜0.05， P＜0.01）。

3.4 當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)腸易激綜合征模型大鼠自主運(yùn)動(dòng)量的影響 見表5。

與正常組比較，造模后各大鼠均出現(xiàn)蜷縮、喜臥、萎靡等狀態(tài)，環(huán)境敏感性增高，自主運(yùn)動(dòng)量減少 （P＜0.01），與模型組比較，給藥第 10 天和第20天， 各給藥組大鼠運(yùn)動(dòng)量增加， 但組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義; 給藥第 30 天， 陽(yáng)性組、 當(dāng)歸腹痛寧滴丸高劑量組大鼠運(yùn)動(dòng)量接近正常 （P＜0.05，P＜0.01）。

3.5 當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)腸易激綜合征模型大鼠胃腸動(dòng)力的影響 見表6。

表5 當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)腸易激綜合征模型大鼠自主運(yùn)動(dòng)量的影響 （， n=10）Tab.5 Effects on autonom ic activities in rats（， n=10）

表5 當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)腸易激綜合征模型大鼠自主運(yùn)動(dòng)量的影響 （， n=10）Tab.5 Effects on autonom ic activities in rats（， n=10）

注: 與正常組比較，＊P＜0.05，**P＜0.01; 與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

組別 劑量/（mg·kg-1）給藥前運(yùn)動(dòng)量/（ n/10 min）給藥 后運(yùn) 動(dòng)量 /（ n/5 min）第10 天 第20 天 第30天正常組 —66.4 ±11.9 69.5 ±14.1 73.9 ±15.4 68.4 ±13.3模型組 — 42.5 ±8.5** 52.6 ±14.4** 51.0 ±8.7** 50.6 ±12.3＊陽(yáng)性組 15 44.7 ±15.5 59.2 ±12.7 55.6 ±11.4 67.9 ±13.0#當(dāng)歸腹痛寧滴丸高劑量組 120 41.2 ±12.2 60.5 ±14.4 60.0 ±12.0 69.2 ±10.9##當(dāng)歸腹痛寧滴丸中劑量組 60 39.4 ±5.6 46.3 ±13.2 53.5 ±10.4 62.0 ±13.3當(dāng)歸腹痛寧滴丸低劑量組30 44.2 ±8.3 48.3 ±10.6 55.6 ±7.9 58.0 ±10.7

表6 當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)腸易激綜合征模型大鼠胃排空率和腸推進(jìn)率的影響 （， n=10）Tab.6 E ffects on gastric em ptying ratesand intestinal propulsion rates in rats（， n=10）

表6 當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)腸易激綜合征模型大鼠胃排空率和腸推進(jìn)率的影響 （， n=10）Tab.6 E ffects on gastric em ptying ratesand intestinal propulsion rates in rats（， n=10）

注: 與正常組比較，**P＜0.01; 與模 型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01; 與陽(yáng)性組比較△P＜0.05

組別 劑量/（mg·kg-1） 胃排空率/% 腸推進(jìn)率/%正常組 —56.1 ±7.0 48.7 ±8.2模型組 — 37.2 ±8.1** 68.6 ±5.7**陽(yáng)性組 15 45.5 ±6.8# 59.1 ±7.3#當(dāng)歸腹痛寧滴丸高劑量組 120 46.8 ±7.4# 50.7 ±8.8##△當(dāng)歸腹痛寧滴丸中劑量組 60 37.9 ±9.5 55.8 ±5.5##當(dāng)歸腹痛寧滴丸低劑量組 30 34.9 ±7.8 61.0 ±6.3#

與正常組比較，模型組大鼠胃排空率明顯減小、 腸推進(jìn)率明顯加快 （P ＜0.01）， 與模型組比較，陽(yáng)性組和當(dāng)歸腹痛寧滴丸高劑量組大鼠胃排空率明顯增加 （P＜0.05）， 陽(yáng)性組和當(dāng)歸腹痛寧滴丸各劑量組大鼠腸推進(jìn)率明顯減小 （P＜0.05，P＜0.01）。

3.6 當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)腸易激綜合征模型大鼠血清 5-HT、 血漿 SP和 VIP水平的影響 見表 7。

與正常組比較， 模型組大鼠血清 5-HT水平明顯升高、血漿 SP和 VIP水平均明顯降低 （ P＜0.01）， 與模型組比較， 陽(yáng)性組和當(dāng)歸腹痛寧滴丸各劑量組大鼠血清 5-HT水平明顯下降、 陽(yáng)性組血漿 SP水平和當(dāng)歸腹痛寧滴丸高劑量組血漿 VIP水平明顯升高 （P＜0.05， P＜0.01）。

3.7 當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)腸易激綜合征模型大鼠結(jié)腸勻漿 5-HT、 SP和 VIP水平的影響 見表 8。

表 7 當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)腸易激綜合征模型大鼠血清 5-HT、 血漿 SP和 VIP水平的影響 （， n=10）Tab.7 Effects on serum 5-HT， p lasma SP or VIP levels in rats（， n=10）

表 7 當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)腸易激綜合征模型大鼠血清 5-HT、 血漿 SP和 VIP水平的影響 （， n=10）Tab.7 Effects on serum 5-HT， p lasma SP or VIP levels in rats（， n=10）

組別 劑 量 /（ mg·kg-1） 5-TH/（ ng·mL-1） SP/（pg·mL-1） VIP/（ pg·mL-1）正常組 —173.22 ±30.01 46.64 ±5.07 35.68 ±3.32模型組 — 231.58 ±26.16** 37.52 ±6.41** 28.40 ±5.34**陽(yáng)性組 15 196.25 ±41.60# 45.67 ±4.68# 29.91 ±4.95當(dāng)歸腹痛寧滴丸高劑量組 120 165.18 ±35.92## 40.05 ±5.80 37.20 ±4.86##△△當(dāng)歸腹痛寧滴丸中劑量組 60 192.35 ±30.89## 39.86 ±5.57 29.45 ±5.78當(dāng)歸腹痛寧滴丸低劑量組 30 202.45 ±25.20#35.60 ±6.47 26.07 ±4.20注: 與正常組比較，**P＜0.01; 與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01; 與陽(yáng)性組比較，△△P＜0.01

表 8 當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)腸易激綜合征模型大鼠結(jié)腸勻漿 5-HT、 SP和 VIP水平的影響 （， n=10）， n=10）Tab.8 Effects on 5-HT， SP and VIP levels in colon homogenates in rats（

注: 與正常組比較，**P＜0.01; 與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01; 與陽(yáng)性組比較，△P＜0.05

組別 劑 量 /（ mg·kg-1） 5-TH/（ ng·g-1） SP/（ pg·g-1） VIP/（ pg·g-1）正常組 —76.42 ±7.90 29.95 ±8.14 70.44 ±6.30模型組 — 95.15 ±8.51** 41.16 ±6.04** 75.06 ±8.37陽(yáng)性組 15 64.37 ±7.45## 35.36 ±5.35# 65.79 ±4.95##當(dāng)歸腹痛寧滴丸高劑量組 120 81.12 ±5.80## 30.50 ±7.72## 59.24 ±5.93##△當(dāng)歸腹痛寧滴丸中劑量組 60 85.58 ±6.05# 36.78 ±5.86 67.70 ±7.17當(dāng)歸腹痛寧滴丸低劑量組30 92.25 ±8.37 38.62 ±5.04 68.08 ±6.97

與正常組比較， 模型組大鼠結(jié)腸勻漿 5-HT和SP水平明顯升高 （P＜0.01）， 但結(jié)腸勻漿 VIP水平變化不明顯;與模型對(duì)照組比較，陽(yáng)性組和當(dāng)歸腹痛寧滴丸高、 中劑量組大鼠結(jié)腸勻漿 5-HT水平明顯下降 （P＜0.05， P＜0.01）， 陽(yáng)性組和當(dāng)歸腹痛寧滴丸高劑量組大鼠結(jié)腸勻漿 SP和 VIP水平明顯下降 （P＜0.05， P＜0.01）。

4 討論

目前腸易激綜合征動(dòng)物模型主要是以中樞 （社會(huì)心理因素） 或外周 （腸道炎癥、感染因素）為刺激靶點(diǎn)建立的腸易激綜合征模型，能模擬腸易激綜合征臨床的部分特征，但僅從腸易激綜合征病理生理學(xué)機(jī)制的某一個(gè)方面著手，均不能完全反應(yīng)腸易激綜合征復(fù)雜的發(fā)病機(jī)制和病理生理學(xué)特征［11］，本研究根據(jù)腸易激綜合征患者的發(fā)病特點(diǎn)和主要病因，遴選出8種致病因素作為模型復(fù)制的刺激因子，采用隨機(jī)排列，使動(dòng)物不可預(yù)見刺激作用，造模40 d， 基本出現(xiàn)了腸易激綜合征臨床病人具備的大體癥狀，且未見動(dòng)物死亡，模型比較穩(wěn)定，更適合進(jìn)行藥效評(píng)價(jià)和基礎(chǔ)研究。

當(dāng)歸腹痛寧滴丸是以甘肅道地藥材當(dāng)歸油為主要原料，采用現(xiàn)代制劑工藝制成的中藥制劑，已經(jīng)取得了良好的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益， 研究報(bào)道［12］， 當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)嬰幼兒秋季腹瀉有良好的療效，服藥作用快， 無(wú)不良反應(yīng)。 另有報(bào)道［13］， 當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)胃腸平滑肌具有明顯的松弛作用，可延緩胃腸排空時(shí)間，其作用機(jī)理是阻滯M受體、α受體、 H1受體和直接抑制平滑肌， 優(yōu)于阿托品類與罌粟堿等解痙藥，還有明顯的鎮(zhèn)痛、消炎和抗菌作用。

最新研 究 發(fā) 現(xiàn)［6，14-15］，當(dāng) 歸 油 對(duì) 兔 離 體 胃 底、胃體、十二指腸、空腸和回腸平滑肌均具有舒張作用，且呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系;對(duì)正常小鼠胃排空有一定的延緩作用，對(duì)正常小鼠小腸推進(jìn)未見明顯作用;對(duì)模型小鼠胃排空和小腸推進(jìn)亢進(jìn)現(xiàn)象具有明顯的改善效應(yīng);當(dāng)歸揮發(fā)油能改善實(shí)驗(yàn)性胃腸動(dòng)力障礙，可能與促進(jìn)乙酰膽堿和胃腸激素的分泌有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)， 持續(xù)給藥20 d， 高劑量當(dāng)歸腹痛寧滴丸 （120 mg/kg）能顯著改善模型大鼠的攝食量、 排便量和糞便性狀; 持續(xù)給藥30 d， 高、 中劑量當(dāng)歸腹痛寧滴丸 （120、 60 mg/kg） 能進(jìn)一步改善模型大鼠的自主運(yùn)動(dòng)、調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力，結(jié)果提示當(dāng)歸腹痛寧滴丸對(duì)腸易激綜合征消化系統(tǒng)癥狀具有一定的治療作用。

5-HT、 VIP和 SP是主要的胃腸激素， 也是存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和腸神經(jīng)系統(tǒng)與腸易激綜合征發(fā)生有直接關(guān)系的腦-腸肽， 在調(diào)節(jié)內(nèi)臟感覺(jué)和運(yùn)動(dòng)起重要作用［16］。 研究報(bào)道［17］， 腸易激綜合征患者外周組織 5-HT水平增高是內(nèi)臟痛覺(jué)過(guò)敏的主要發(fā)病機(jī)制;本研究發(fā)現(xiàn)，模型大鼠血清和結(jié)腸組織5-HT水平明顯增高， 當(dāng)歸腹痛寧滴丸高、 中劑量治療 30 d 后， 模型大鼠血清和結(jié)腸組織 5-HT水平明顯下降，有利于提高內(nèi)臟痛閾，消除腸道過(guò)敏;本研究中， 腸易激綜合征模型大鼠結(jié)腸組織 SP水平增加， 血漿 SP水平降低。 結(jié)腸中SP水平的增加可能與模型動(dòng)物排便增加，胃腸運(yùn)動(dòng)亢進(jìn)有關(guān)，與前期研究結(jié)果一致［18］; 當(dāng)歸腹痛寧滴丸高劑量能明顯降低結(jié)腸組織 SP水平， 從而改善胃腸動(dòng)力，消除腸道過(guò)敏。 VIP是抑制胃腸運(yùn)動(dòng)的主要神經(jīng)遞質(zhì)之一，具有松弛胃腸平滑肌、促進(jìn)腸道水和電解質(zhì)的分泌的功能［19］。 本 研 究 發(fā) 現(xiàn) 模 型 大 鼠 血 漿VIP水平均明顯降低， 但結(jié)腸勻漿 VIP水平變化不明顯; 當(dāng)歸腹痛寧滴丸高劑量治療 30 d 后血漿 VIP水平明顯升高而結(jié)腸 VIP水平明顯下降， 對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)亢進(jìn)具 有 一 定 的 調(diào) 節(jié) 作用， 與 文獻(xiàn)［20-21］報(bào) 道 一致，具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，當(dāng)歸腹痛寧滴丸可能通過(guò)降低腸道敏感性、止瀉、降低腸推進(jìn)率等改善胃腸道癥狀，進(jìn)一步緩解精神神經(jīng)異常等治療腸易激綜合征;作用機(jī)制與抑制腦腸軸 5-HT和 VIP過(guò)度分泌， 促使其向正常水平恢復(fù)等多個(gè)環(huán)節(jié)有關(guān)。

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Pharm acodynam ics of Danggui Futongning Dropping Pills in rat w ith irritable bowel syndrom e

DU Li-dong1，2， WU Guo-tai1，2， JING Qi1， LIUWu-zhou1， LIYing-dong1， REN Yuan1，2*

AIM To study the therapeutic effect of Danggui Futongning Dropping Pills（ angelica oil） in rat with irritable bowel syndrome.METHODS Mice'models for irritable bowel syndrome were induced by eight types of stimulations.Sixty SD rat were divided into the normal control group， the model group， positive control group （ Pinaverium Bromide Tablets） ， high-dose， middle-dose， low-dose Danggui Futongning Dropping Pills group.The treatment lasted for 31 days.Body weights， appetite， defecation， independent exercise of all ratswere recorded.The rate of gastric emptying and small intestinal propulsion rate were measured.The 5-HT in serum，substance P（ SP） and vasoactive intestinal peptide（ VIP） in plasma or 5-HT， SP， VIP in colon homogenateswere evaluated by radioimmunoassay.RESULTS With the treatment of Danggui Futongning Dropping Pills， the food intake and stool quantity increased.Consequently， body weights and appetite increased as well.The independent movement returned to normal level.High-dose Danggui Futongning Dropping Pillsgroup performed the best and followed bymiddle-dose group.The same resultsobserved in those two groups for emptying rates and intestinal propulsion rates.The 5-HT levels in serum and in colonic homogenate significantly reduced but VIP levels in plasma increased markedly.The SP and VIP contents significantly decreased in colonic homogenate.CONCLUSION Thetherapeutic effect of Danggui Futongning Dropping Pills on irritable bowel syndrome is obvious.The mechanism could be related to inhibition against the excessive secretion of5-HT and VIP in brain-gut-axis.

Danggui Futongning Dropping Pills;irritable bowel syndrome（ IBS）;gastrointestinal function;5-HT;substance P（ SP） ;vasoactive intestinal peptide（VIP）

R285.5

:A

1001-1528（2014）12-2445-07

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.12.001

2013-12-24

“十二五” 國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目子課題 （2011BAI05B0206）; 甘肅省自然科學(xué)基金項(xiàng)目 （1212RJZA079）; 甘肅省中藥藥理與毒理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放基金項(xiàng)目 （ZDSYS-KJ-2012-004 ）

杜麗東 （1978—）， 女， 碩士， 講師， 研究方向: 中藥藥理與毒理。 Tel:13919030726， E-mail:lidong-du@126.com

*通信作者: 任 遠(yuǎn) （ 1963—）， 男， 教授， 博士生導(dǎo)師， 研究方 向: 中藥藥理與毒理。 Tel: （0931 ） 8762653， E-mail:Leyuan816@ 163.com

（1.Cansu College of Traditional Chinese Medicine， Lanzhou 730000， China;2.Cansu Provincial Key Laboratory of Pharmacology and Toxicology of TCM， Lanzhou 730000， China ）