高 慧, 佟 鑫, 裴啟洋, 賈天柱

1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院, 遼寧 大連116600； 2.國家中醫(yī)藥管理局中藥炮制原理解析重點(diǎn)研究室, 遼寧 大連 116600； 3.遼寧省中藥炮制工程技術(shù)研究中心, 遼寧 大連 116600）

五味子 “生熟異用” 之補(bǔ)腎陰作用

高 慧1,2,3, 佟 鑫1,2,3, 裴啟洋1,2,3, 賈天柱1,2,3

1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院, 遼寧 大連116600； 2.國家中醫(yī)藥管理局中藥炮制原理解析重點(diǎn)研究室, 遼寧 大連 116600； 3.遼寧省中藥炮制工程技術(shù)研究中心, 遼寧 大連 116600）

目的 比較五味子、醋五味子、酒五味子對腎陰虛小鼠的影響。方法 采用氫化可的松致小鼠腎陰虛模型，以六味地黃丸為陽性對照，以血清中環(huán)磷酸腺苷、環(huán)磷酸鳥苷、乙酰膽堿、肌酐的量，小鼠腎臟、肝臟、脾臟的臟器指數(shù)為評價(jià)指標(biāo)。結(jié)果 五味子不同炮制品對腎陰虛小鼠均有一定治療作用，可改善小鼠激素水平，增加臟器指數(shù)。其中酒制品作用最好，劑量之間無顯著性差異。結(jié)論 臨床應(yīng)用于治療腎陰虛時(shí)應(yīng)首選酒五味子。

五味子;炮制;腎陰虛;氫化可的松

五 味子為木蘭 科 藤 本植物五 味 子 Schisandra chinensis（Turcz.） Baill的干燥成熟果實(shí)， 功能收斂固澀， 益氣生津， 補(bǔ)腎寧心［1］。 《本草綱目》 記載五味子 “入嗽藥生用，入補(bǔ)藥熟用”， 即五味子“生熟異用”。 前期實(shí)驗(yàn)比較五味子不同炮制品對腎陽虛小鼠的影響發(fā)現(xiàn)，五味子對腎陽虛小鼠臟器指數(shù)、激素水平都有積極影響，且炮制后作用增強(qiáng)。因五味子既補(bǔ)腎陽又補(bǔ)腎陰，故本課題分別比較生熟五味子的補(bǔ)腎陽和補(bǔ)腎陰作用，以說明五味子 “入補(bǔ)藥熟用” 的炮制原理。 目前臨床常用炮制品種有醋五味子、酒五味子、蜜五味子等，醋五味子為藥典收載五味子唯一的炮制品種，但研究五味子的炮制沿革發(fā)現(xiàn)，醋五味子是近代新增的炮制品種，推測 “入補(bǔ)藥熟用” 中的五味子可能是酒五味子。所以本實(shí)驗(yàn)比較五味子、醋五味子、酒五味子對腎陰虛小鼠的影響，為五味子 “生熟異用”研究及臨床合理應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物 KM小鼠雌雄各半 90 只， 體質(zhì)量 18 ～22 g， 由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供， 動(dòng)物合格證號為 ［SCXK （遼） 2008-0002］。普通飼料，定時(shí)定量喂食，自由飲水。

1.2 藥物與試劑 五味子購自遼寧鳳城五味子種植基地，由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物教研室王冰教授鑒定為北五味子。

醋五味子制備:取凈五味子加米醋拌勻，悶潤1.5 h， 蒸制 5 h， 50 ℃干燥至恒定質(zhì)量。 五味子-米醋為100 ∶20。

酒五味子: 取凈五味子加黃酒拌勻， 悶潤1 h，蒸制 4 h， 50 ℃干燥至恒定質(zhì)量。 五味子-黃酒為100 ∶20。

氫化可的松注射液 （哈藥集團(tuán)制藥總廠，批號 H20023069）

六味地黃丸 （北京同仁堂藥業(yè)， 批號201209033）， 環(huán)磷酸腺 苷、 環(huán)磷酸鳥苷、 肌酐、乙酰膽堿試劑盒 （上?？婆d商貿(mào)有限公司 批號20120402B）。

1.3 儀器 離心機(jī) （上海安亭科技公司 TGL-16C）， 分 析 天 平 （ 上 海 天 平 儀 器 廠 生 產(chǎn)FA1004B），酶標(biāo)儀 （上海賽默飛世爾儀器有限公司 MK3）。

2 方法

2.1 藥物制備 五味子水提物的制備: 分別取一定量五味子不同炮制品粗粉，加8倍量的水浸泡0.5 h， 煎煮 3 次， 每次 1 h， 濾過，合并濾液， 濃縮， 制 成 低、 高 劑 量 組 （ 合 生 藥 量 45、 90 mg/mL）。

六味地黃丸藥液制備: 取六味地黃丸 18 g， 加入 100 mL純凈水制成 0.18 g/mL混懸液。

2.2 分組及給藥 將90 只 KM小鼠雌雄各半隨機(jī)分為9組，即空白對照組，模型對照組，陽性對照（六味地黃丸） 組、 生品低、高劑量組，醋制品低、 高劑量組， 酒制品低、 高劑量組， 每組10只。除空白組與模型組灌胃生理鹽水外，其他組灌胃相應(yīng)藥液， 灌胃劑量均為 0.02 mL/g， 連續(xù) 11 d， 第7天開始除空白組外其他各組在灌胃同時(shí)腹腔注射氫化可的松注射液制造腎陰虛模型， 0.2 mL/只，連續(xù)4 d。 每3天稱定質(zhì)量， 并記錄觀察精神行為狀況。

2.3 取材 第 10 天給藥后禁食不禁水 24 h， 第11 天末次給藥 1 h 后采取摘眼球法取血約 1 m L，放入 EP管中， 于 10 000 r/min 的離心機(jī)中離心 5 min， 取血清于 EP管中， -20 ℃保存?zhèn)溆?。分離肝、脾、兩側(cè)腎臟，用生理鹽水洗凈，濾紙拍干，于分析天平稱定質(zhì)量。

2.4 指標(biāo)測量 激素指標(biāo)測量: 嚴(yán)格按照試劑盒說明書提供方法檢測，經(jīng)過稀釋、加樣、溫育、洗滌、 顯色后于 405 nm處測定吸光度，計(jì)算即得。臟器指數(shù)測量:臟器分析天平稱定質(zhì)量，按照“臟器指數(shù) = （臟器質(zhì)量/體質(zhì)量） ×1 000” 進(jìn)行計(jì)算。

3 結(jié)果

3.1 對 cAMP、 cGMP及比值的影響 模型組環(huán)磷酸腺苷 （cAMP） 較空白組升高明顯， 環(huán)磷酸鳥苷（cGMP） 變化不明顯， cAMP/cGMP升高明顯，治療組較空白組 cAMP升高幅度較模型組減少，有顯著性差異， cGMP變化不明顯， cAMP/cGMP介于模型與空白之間，與模型組存在顯著性差異。各炮制品中酒制品最好，低、高劑量間無顯著性差距，低劑量略好。 結(jié)果見表1。

表1 不同炮 制 品對腎陰 虛 小鼠 cAM P、 cGM P水 平 的影響（， n=10）Tab.1 Effects of different Schisandrae chinensis Fructus on meliorating the cAMP， cGMP of kidney-yin deficiency rats（， n=10）

表1 不同炮 制 品對腎陰 虛 小鼠 cAM P、 cGM P水 平 的影響（， n=10）Tab.1 Effects of different Schisandrae chinensis Fructus on meliorating the cAMP， cGMP of kidney-yin deficiency rats（， n=10）

注: 與模型組相比較，*P＜0.05，**P＜0.01。 下表同

組別 cAMP/（PM·mL-1）cGMP/（PM·m L-1）（cAMP/ cGMP）空白對照組 45.71 ±6.26**1.78 ±0.15 25.16 ±1.71**模型對照組 75.11 ±3.42 1.48 ±0.13 51.05 ±6.57**陽性對照組 55.02 ±11.73* 2.12 ±1.20 27.19 ±6.51**生品低劑量組 66.72 ±11.04* 1.73 ±0.17 37.33 ±5.26**生品高劑量組 67.15 ±9.40* 1.81 ±0.23 37.75 ±7.57**醋品低劑量組 60.84 ±9.40 1.52 ±0.15*39.21 ±7.00**醋品高劑量組 70.59 ±7.84* 1.80 ±0.21 39.24 ±4.52**酒品低劑量組 72.85 ±6.07 2.11 ±0.10 34.69 ±3.03**酒品高劑量組 72.88 ±6.54 2.12 ±0.20 35.88 ±6.35**

3.2 對 Ach、 Cr水平的影響 模型組較空白組乙酰膽堿 （ Ach） 降低， 肌苷 （ Cr） 升高， 差異明顯，治療組較模型組治療效果明顯，酒制品效果最好，高低劑量間無顯著性差異。結(jié)果見表2。

表 2 不同炮制品對腎陰虛小鼠 Ach、 Cr的影響 （，n=10）Tab.2 Effects of different Schisandrae chinensis Fructus on m eliorating the Ach， Cr of kidney-yin deficiency rats（， n=10）

表 2 不同炮制品對腎陰虛小鼠 Ach、 Cr的影響 （，n=10）Tab.2 Effects of different Schisandrae chinensis Fructus on m eliorating the Ach， Cr of kidney-yin deficiency rats（， n=10）

組 別 Ach/（ pg·m L-1） Cr/（ ng·m L-1）空白對照組 23.98 ±1.25** 13.17 ±0.70**模型對照組 18.49 ±2.29 18.82 ±0.69**陽性對照組 23.23 ±2.56** 14.71 ±0.79**生品低劑量組 20.32 ±1.04* 16.31 ±0.71**生品高劑量組 19.78 ±0.70 15.69 ±0.58**醋品低劑量組 20.66 ±1.43 15.63 ±0.69**醋品高劑量組 20.37 ±1.90* 15.95 ±0.73**酒品低劑量組 21.85 ±1.53** 15.67 ±0.70**酒品高劑量組 22.28 ±1.01** 14.46 ±0.74**

3.3 對臟器指數(shù)的影響 空白組與給藥組較模型組臟器指數(shù)高，酒品低劑量組效果最好，較其他組有顯著性差異。 見表3。

表3 不同炮制品對腎陰虛小鼠臟器指數(shù)的影響（，n=10）Tab.3 Effects of different Schisandrae chinensis Fructus on the viscera index of kidneys， liver， spleen of kidney-yin deficiency rats（， n=10）

表3 不同炮制品對腎陰虛小鼠臟器指數(shù)的影響（，n=10）Tab.3 Effects of different Schisandrae chinensis Fructus on the viscera index of kidneys， liver， spleen of kidney-yin deficiency rats（， n=10）

組 別 腎臟 /（ mg·g-1） 肝臟 /（ mg·g-1） 脾臟 /（ mg·g-1）空白對照組 12.36 ±1.14**60.06 ±3.83** 3.75 ±0.62**模型對照組 9.49 ±4.55 42.05 ±2.99 1.32 ±0.28陽性對照組 12.28 ±1.75**49.84 ±4.05** 1.87 ±0.46*生品低劑量組 11.10 ±2.24 44.50 ±2.76 1.48 ±0.19生品高劑量組 10.92 ±1.50 43.54 ±3.51 1.47 ±0.14*醋品低劑量組 10.53 ±1.08 53.55 ±1.50** 1.82 ±0.50醋品高劑量組 10.93 ±1.26 54.49 ±3.47** 1.56 ±0.12酒品低劑量組 10.91 ±0.96 49.65 ±3.89** 2.42 ±0.12**酒品高劑量組 11.29 ±1.40 47.42 ±4.05** 1.83 ±0.21*

4 討論

目前研究中 常用的 腎虛模 型有兩 種［2-6］， 即甲狀腺素腎虛模型和氫化可的松腎虛模型，對比發(fā)現(xiàn)甲狀腺素所致模型為腎陰不足，虛火內(nèi)生的甲亢腎虛模型，并非五味子主治證，故本實(shí)驗(yàn)采用注射氫化可的松造模。預(yù)實(shí)驗(yàn)中以進(jìn)食量，進(jìn)水量以及小鼠大便狀態(tài)為指標(biāo)［7］， 考察腹腔注射、 皮下注射、后肢肌肉注射造模效果，腹腔注射效果最好，注射一天后小鼠進(jìn)食量明顯減小，進(jìn)水量增加，大便干結(jié)，故選用腹腔注射。氫化可的松腎陰虛模型關(guān)鍵在于短程、大劑量，造模時(shí)間長容易由陰虛轉(zhuǎn)陽虛，劑量小則造模不能成功，預(yù)實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)小鼠腹腔注射最大可承受劑量為 0.2 mL， 超過0.2 mL小鼠會(huì)出現(xiàn)立即昏厥， 抽搐， 甚至死亡，故劑量定為 0.2 mL。 大劑量注射氫化可的松會(huì)導(dǎo)致大量蛋白質(zhì)、脂肪水解，是一種機(jī)體的生理應(yīng)激反應(yīng)，表現(xiàn)為小鼠體質(zhì)量明顯下降，而治療組體質(zhì)量下降趨勢較緩于模型組，五味子可減緩這種應(yīng)激作用。大劑量給予氫化可的松可致全身過敏反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)過程中表現(xiàn)為小鼠眼瞼腫脹，出水，模型組中6只小鼠雙眼腫脹，出水，治療組中兩組各出現(xiàn)一只，故五味子可以較好地緩解這種過敏癥狀。

環(huán)磷酸腺苷 （cAMP）、 環(huán)磷酸鳥苷 （cGMP）對細(xì)胞功能具有雙向調(diào)節(jié)作用，通過相互拮抗作用使細(xì)胞處于穩(wěn)定狀態(tài)，與傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中的陰陽學(xué)說相似［8］， cAMP升 高， 說 明 機(jī) 體 處 于 陰 虛 狀 態(tài)，cGMP升高則為陽虛， 因此 cAMP/cGMP升高則為陰虛，降低則為陽虛，是目前比較常用，也比較權(quán)威的指標(biāo)。

肝臟具有多種生理功能，為體內(nèi)糖的重要貯備器官。從模型組與空白組肝臟臟器指數(shù)明顯差異說明采用氫化可的松造?？蓪?dǎo)致小鼠肝臟萎縮，但使用炮制品治療后小鼠肝臟增重，說明炮制后可增強(qiáng)小鼠對糖類的吸收，進(jìn)一步說明了五味子炮制前后功效的差異。

氫化可的松是一種強(qiáng)的免疫抑制劑，強(qiáng)烈抑制淋巴細(xì)胞增殖，進(jìn)一步導(dǎo)致脾臟萎縮，降低小鼠免疫功能［9-10］， 故選擇脾臟臟器指數(shù)作為對治療作用的評價(jià)指標(biāo)，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)五味子能提高腎陰虛小鼠的免疫作用，酒制品高劑量組好［9-10］。

前期查閱文獻(xiàn) ［11-14］發(fā)現(xiàn)腎陰虛型大鼠垂體及下丘腦處于受抑制狀態(tài) （外源性激素的負(fù)反饋抑制作用），HPA軸功能下降， 主要表現(xiàn)為促腎上腺素釋放激素 （CRH） 減少， 進(jìn)而影響 Ach 的分泌， 故采用 Ach 這一腎上腺指數(shù)為指標(biāo)， 檢測腎陰虛小鼠的 HPA軸功能狀態(tài)。

本研究證明五味子能改善氫化可的松所致腎陰虛小鼠的激素水平，提高肝腎臟器指數(shù)，對腎陰虛有一定治療作用。其機(jī)制可能為減輕對腎臟的損害，從而使Cr水平降低， 腎臟臟器指數(shù)增加; 減小氫化可的松免疫抑制作用，保護(hù)肝脾功能;減小HPA軸抑制作用， 增加血清中 Ach 的量。 本研究實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明五味子低劑量組較高劑量組效果好，酒制品較其他炮制品效果好。

［ 1 ］ 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典:2010 年版一部［S］.北京: 中國醫(yī)藥科技出版社， 2010:62.

［2］ 杜 江， 李 楠，王和鳴.腎虛模型造模方法及相關(guān)指標(biāo)［J］.中 國 組織工 程 研 究與臨 床 康 復(fù)， 2010， 14 （ 50 ）: 9433-9436.

［3］ 王 劍.從多個(gè)陰虛病變模型研究陰虛證機(jī)理［D］.廣州:廣州中醫(yī)藥大學(xué)， 2006.

［4］ 姚 凝.甘肅產(chǎn)華中五味子對實(shí)驗(yàn)性腎陰虛型小鼠血清超氧化物歧化酶、 活性氧的影響［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2005， 12（5）:33-34.

［5］ 王秀榮， 張永紅，王秀英， 等.六味地黃湯對糖皮質(zhì)激素腎陰虛模型免疫功能的影響［J］.河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2006， 26（6）:451-454.

［6］ 曹永孝，劉 靜， 李發(fā)榮， 等.培坤膠囊的滋陰補(bǔ)腎作用［ J］ .中成藥， 2001， 23（2） :142-143.

［7］ 徐 飛， 尹蓉莉，賴慶寬， 等.不同提取工藝的六味地黃復(fù)方提取物對腎陰虛模型小鼠的藥理作用比較［J］.中國藥房， 2007， 18（6）:418-419.

［8］ 王培源， 劉 蓬，黃燕曉.腎陰虛豚鼠模型的建立及對內(nèi)耳形態(tài)學(xué)影響的實(shí)驗(yàn)研究［J］.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2006， 8（4）:135-137.

［9］ 徐 勤， 杜標(biāo)炎，羅 惠， 等.六味地黃湯對糖皮質(zhì)激素腎陰虛模型免疫器官淋巴細(xì)胞凋亡的抑制作用 （Ⅱ） ［J］.廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)， 2000， 17（3）:207-208.

［10］ 杜標(biāo)炎， 徐 勤， 吳紹鋒， 等.六味地黃湯對糖皮質(zhì)激素腎陰虛模型免疫器官淋巴細(xì)胞凋亡的抑制作用［J］.廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)， 2009， 17（3）:204-206.

［11］ 諶 婕， 吳克明， 王家葵， 等.雷公藤多苷致雌性小鼠腎虛生殖功能低下動(dòng)物模型的研究［J］.中藥新藥與臨床藥理， 2007， 18（3）:208-211.

［12］ 史正剛， 潘翌翌， 張士卿.知柏地黃丸對腎上腺皮質(zhì)激素型腎陰虛幼齡大鼠血漿 CoRT、 ACTH、 CRH及腎上腺指數(shù)和組織學(xué)結(jié)構(gòu)的影響［ J］.中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志， 2006，12（3）:167-170.

［13］ 陳曉陽， 李 晟， 鄒志秦， 等.憂慮康液對腎陰虛抑郁模型大鼠血漿促腎上腺皮質(zhì)激素、皮質(zhì)醇及下丘腦形態(tài)學(xué)的影響［J］.中國老年學(xué)雜志， 2010， 4（30）:1080-1082.

［14］ 安紅梅， 胡 兵， 張學(xué)文.從腎陰虛入手證病結(jié)合治療帕金森病 思路探 討 ［ J］.中國中 醫(yī) 急 癥， 2004， 13 （ 12 ）: 818-819.

Effect of processed Schisandrae chinensis Fructus on tonifying kidney yin

GAO Hui1，2，3， TONG Xin1，2，3， PEIQi-yang1，2，3， JIA Tian-zhu1，2，3
（1.College of Pharmacy， Liaoning University of TCM， Dalian 116600 ， China;2.Key Laboratory of Processing Theory Analysisof State Administration of TCM， Dalian 116600， China;3.Engineering Technology Research Center of TCM Processing of Liaoning Province， Dalian 116600， China）

AIM To make the comparison between raw， vinegar-steaming and wine-steaming Schisandrae chinensis Fructus to study the effects on tonifying kidney yin.METHODS Kidney-yin deficiency ratmodels induced by hydrocortisone were used and receiving three Schisandrae chinensis Fructus extracts compared to Liuwei Dihuang Pills as the positive control drug.The contentsofserum cyclic adenosinemonophosphate， cyclic guanosine monophosphate， acetylcholine， creatinine and the viscera index of kidney， liver， and spleen were adopted as the evaluation.RESULTS Three preparations of Schisandrae chinensis Fructus had certain therapeutic effects on kidney-yin deficiency rats， such asmeliorating the hormonal condition and raising the viscera index of kidney-yin deficiencymouse， ofwhich the wine-steaming preparation was the bestwithout dosage-effect.CONCLUSION The wine-steaming Schisandrae chinensis Fructus should be recommended as the clinic application in kidney-yin deficiency of choice.

Schisandra chinensis Fructus;processing;kidney-yin deficiency;hydrocortisone

R285.5

:A

1001-1528（2014）12-2471-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.12.006

2013-12-11

國家發(fā)改委 2011 年中醫(yī)藥行業(yè)科研專項(xiàng)項(xiàng)目 （20110700704）

高 慧 （1974—）， 女， 博士， 副 教 授， 碩 士 生 導(dǎo) 師， 研 究 方 向: 中 藥 炮 制 原 理。 Tel: （ 0411 ） 85890146， E-mail:gaohuitcm@163.com