余林普

輪狀病毒合并細菌性腹瀉的病原實驗室檢查及臨床意義

余林普

目的 探討人輪狀病毒（human rotavirus，HRV）合并細菌性腹瀉的發(fā)生率，為臨床治療提供實驗室依據(jù)。方法選取2012年3月至2013年12月期間經(jīng)初步診斷為細菌性腹瀉的患者128例，收集上述患者的糞便，細致觀察糞便性狀后，進行細菌鑒定及藥敏試驗，同時檢測HRV，對檢測結(jié)果進行統(tǒng)計學分析。結(jié)果在所有的128份樣本中，HRV檢測陽性率為64．06%（82／128），細菌檢測陽性率為53．91%（69／128），HRV及細菌均為陽性的陽性率為53．91%（69／128）。69份細菌陽性樣本中有27份檢出金黃色葡萄球菌，25份檢出非傷寒沙門菌，7份檢出志賀菌，4份檢出大腸埃希菌，6份同時檢出2種細菌。大腸埃希菌對所選6種抗生素均呈較高耐藥性，其中對氨芐西林、左氧氟沙星完全耐藥；25株非傷寒沙門菌及7株志賀菌對氨芐西林、頭孢曲松以及左氧氟沙星均呈較高的耐藥性；合并2種菌感染的標本中檢出的沙門菌B群對所選6種抗菌藥都呈較高耐藥性，其中對磺胺甲噁唑及頭孢曲松完全耐藥；金黃色葡萄球菌對頭孢曲松及氨芐西林呈較高的耐藥性，但對環(huán)丙沙星及氯霉素較敏感。HRV與細菌檢測均呈陽性的糞便外觀均呈膿血便、黏液便或水樣便，其中有36份糞便呈水樣便兼黏液便或者血便。結(jié)論HRV合并細菌性腹瀉臨床發(fā)生率較高，檢測HRV、病原菌及其耐藥性鑒定對臨床治療方案制定有重要的價值。

輪狀病毒；細菌性腹瀉；病原檢查；耐藥性

腹瀉是臨床十分常見的胃腸道疾病之一，該疾病不僅臨床發(fā)病率較高，而且傳播速度較快，傳播范圍較廣，對兒童的身心健康造成了嚴重的不良影響。細菌感染和人輪狀病毒（human rotavirus，HRV）感染是最多見的誘因［1，2］。近年來，隨著臨床檢驗技術(shù)的進步以及患者病情的變化，我們發(fā)現(xiàn)部分患者同時存在HRV感染和細菌感染現(xiàn)象，為了驗證上述發(fā)現(xiàn)，本文研究分析了128例腹瀉患者的糞便樣本，現(xiàn)將結(jié)果匯報如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選取2012年3月至2013年12月期間經(jīng)初步診斷為細菌性腹瀉的患者128例，其中男性68例，女性60例，年齡介于3個月～18歲，中位年齡為13月齡。依據(jù)患者年齡將患者分為＜0．5歲組、0．5～2歲組以及2歲以上組。診斷標準［3］糞便常規(guī)鏡檢結(jié)果WBC≥5／HP、RBC≥10／HP，收集上述患者的糞便，細致觀察糞便性狀后，進行細菌鑒定、藥敏試驗以及HRV檢測。

1.2 儀器與試劑HRV診斷試劑盒（ELISA法），由蘭州生研所提供，菌株和藥敏鑒定的培養(yǎng)基由廣州迪景公司提供，氨芐西林由吉林濟邦顯鋒藥業(yè)有限公司提供，磺胺甲噁唑由上海新亞藥業(yè)閔行有限公司提供，環(huán)丙沙星由山西津華暉星制藥有限公司提供，氯霉素由青島市新興藥業(yè)有限公司提供，頭孢曲松由上海羅氏制藥有限公司提供，左氧氟沙星由常州蘭陵制藥有限公司提供，診斷血清由蘭州生研所提供。質(zhì)控菌株：大腸埃希菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATC25923由甘肅省臨床檢驗中心提供。

1.3 方法采用ELISA法檢測患者糞便樣本中的HRV含量，所有操作均嚴格按照酶標儀及試劑盒說明書進行；細菌分離鑒定以及藥敏實驗設計、執(zhí)行均分別按照第3版《全國臨床檢驗操作規(guī)程》和臨床實驗室標準化協(xié)會（CLSI）更新版規(guī)則及標準進行［4，5］。

2 結(jié)果

2.1 糞便HRV及細菌培養(yǎng)結(jié)果在所有的128份樣本中，HRV檢測陽性率為64．06%（82／128），細菌檢測陽性率為53．91%（69／128），HRV及細菌均為陽性的陽性率為53．91%（69／128）。其中0．5～2歲患兒HRV及細菌檢測陽性率均呈較高水平，見表1。

表1 不同年齡組患兒糞便HRV及細菌培養(yǎng)結(jié)果［n（%）］

2.2 糞便性狀觀察結(jié)果69份HRV與細菌檢測均陽性的糞便外觀均呈膿血便、黏液便或水樣便，其中有36份糞便呈水樣便兼黏液便或者血便，見表2。

表2 HRV合并細菌性腹瀉患者糞便性狀辨析結(jié)果

2.3 糞便細菌培養(yǎng)結(jié)果69株陽性菌株依次為27株金黃色葡萄球菌，25株非傷寒沙門菌（11株腸炎沙門菌，7株都伯林沙門菌，7株沙門菌B群），7株志賀菌，4株大腸埃希菌以及6份同時檢出2種細菌樣本（2份為沙門菌B群合并志賀菌，4份為金黃色葡萄球菌合并沙門菌B群）。

2.4 藥敏結(jié)果4株大腸埃希菌對所選6種抗菌藥物均呈較高耐藥性，其中對氨芐西林、左氧氟沙星完全耐藥；25株非傷寒沙門菌及7株志賀菌對氨芐西林、頭孢曲松以及左氧氟沙星呈較高的耐藥性；合并2種菌感染的標本中的沙門菌B群對本研究所用6種抗菌藥都呈較高耐藥性，其中對磺胺甲噁唑及頭孢曲松完全耐藥；金黃色葡萄球菌對頭孢曲松及氨芐西林呈較高的耐藥性，但對環(huán)丙沙星及氯霉素較敏感，見表3。

3 討論

在經(jīng)臨床初步診斷為細菌性腹瀉的128例患者中，共有69例患者糞便樣本HRV及細菌檢測結(jié)果均呈陽性，陽性率高達53．91%。這表明在腹瀉患者中，HRV合并細菌感染患者并不少見，應引起臨床醫(yī)生的重視。上述合并HRV及細菌感染的患者糞便性狀均呈膿血便、黏液便或水樣便，部分糞便呈水樣便兼黏液便或者血便，這表明這些感染患者的糞便兼有細菌感染和病毒感染的特性，可以幫助臨床進行初步診斷。

表3 細菌藥敏試驗結(jié)果

當機體處于健康狀態(tài)時，腸道的微生態(tài)菌群可以抑制病原菌的過度繁殖。但當機體感染HRV后，腸道的微生態(tài)菌群會處于失衡狀態(tài)［6－8］，不再對機體具有保護作用，從而導致腸道病原微生物過度繁殖。本文研究結(jié)果顯示，0．5～2歲腹瀉患兒HRV陽性率及細菌培養(yǎng)陽性率均呈現(xiàn)較高水平，可能與此年齡段兒童來自母體的免疫因子已消耗殆盡，同時自身免疫系統(tǒng)及消化系統(tǒng)均發(fā)育不完善有關(guān)，因而較易發(fā)生感染。由于HRV感染機制的特點，當機體再次發(fā)生HRV感染時，免疫系統(tǒng)會激活記憶而使機體處于受保護狀態(tài)，從而不會出現(xiàn)明顯臨床癥狀，故HRV感染一般不會成為成人腹瀉的病因［9，10］。

本文研究結(jié)果顯示，陽性菌株以金黃色葡萄球菌和非傷寒沙門菌為主，這可能與樣本多為0．5～2歲兒童糞便樣本有關(guān)。小兒的食物來源主要為奶制品，奶制品存放不當、未使用熱水消毒、喂養(yǎng)不注意等因素均極易導致小兒發(fā)生金黃色葡萄球菌感染。且此階段小兒多以爬行為主，喜好抓食、吃手等，容易使沙門菌進入體內(nèi)導致腹瀉。

本文藥敏試驗結(jié)果表明，糞便中的菌株對頭孢曲松、左氧氟沙星等常規(guī)抗菌藥物均表現(xiàn)出一定程度的耐藥性。此外，非傷寒沙門菌、志賀菌、金黃色葡萄球菌對氨芐西林均呈較高耐藥性。上述藥敏試驗結(jié)果提示，不同類型菌種對臨床常用抗生素的敏感程度差異很大，在制定臨床治療方案時應針對不同類型細菌感染采用不同的抗菌藥物，以達到更好的治療效果。

此外，在全部69例HRV合并細菌性腹瀉患者中，有6例患者糞便樣本中同時檢測出2種細菌，其中包括對所有常用抗菌藥物均具有較高耐藥性的沙門菌B群。這不僅意味著我們需要改變臨床用藥方案，同時也提示我們在進行細菌培養(yǎng)時在得到一種感染菌種后，應繼續(xù)進行細致的觀察和驗證是否存在其他的感染菌種，避免漏診，以期為臨床提供準確有效的實驗室依據(jù)，提升臨床用藥合理性。

綜上所述，對疑似細菌感染性腹瀉患者同時進行HRV及細菌感染檢查是十分必要的，尤其在HRV流行季節(jié)應提倡對腹瀉患兒常規(guī)進行HRV檢測。這不僅能夠準確了解患者的致病原因，更有助于制定切實有效的治療方案，加速患者的康復進程，減少耐藥菌株的產(chǎn)生。

1 聶青和．感染性腹瀉的發(fā)病機制研究進展及治療指導.中華實驗和臨床感染病雜志（電子版），2007，01：158－159．

2 繆小輝．對感染性腹瀉的新認識.中華傳染病雜志，2006，24：217－219．

3 趙錦銘，陳紅，嚴嵐，等．小兒急性感染胃腸炎輪狀病毒感染的病原學研究．中華實驗和臨床病毒學雜志，2001，15：55－60．

4 葉應嫵，王毓三，申子瑜．全國臨床檢驗操作規(guī)程．第3版．南京：東南大學出版社，2006．

5 張曉冬，張艷，徐莉．E－test法和Rosco紙片法檢測申克孢子絲菌對伊曲康唑和氟康唑的敏感性試驗.中國皮膚性病學雜志，2010，24：992－993，1029．

6 杜惠敏，陳穎紅，陳俊義，等．輪狀病毒感染與健康兒童腸道菌群結(jié)構(gòu)的比較.實用兒科臨床雜志，2006，21：1237－1238．

7 于國慧，董方，甄景慧，等．兒童輪狀病毒合并細菌性腹瀉病實驗室檢查及臨床分析.中華檢驗醫(yī)學雜志，2009，32：923－925．

8 梁鵬．小兒急性腹瀉糞便中A群輪狀病毒檢測與分析.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2007，23：3684－3685．

9 張萍，付蓉，賀榮．莉西咪替丁聯(lián)合蒙脫石治療嬰幼兒輪狀病毒腹瀉的療效與護理.中國實用醫(yī)刊，2011，38：120－121．

10 張國來，胡金繪，孫佃軍．小兒廣樸止瀉口服液治療嬰幼兒輪狀病毒腸炎76例療效觀察.中國中西醫(yī)結(jié)合兒科學，2011，03：539－540．

The laboratory examination and clinical significance of pathogen detection of rotavirus combine bacterial diarrhea

YU Lin－pu．Departmentof Clinical Laboratory，EnshiAutonomous Prefecture for Disease Controland Prevention Center，Enshi445000，China

ObjectiveTo investigate the incidence rate ofhuman rotavirus（HRV）combine bacterial diarrhea，and provide laboratory base for clinical therapy．MethodsFaecesof128 cases diagnosed bacterial diarrhea patients from March 2012 to December2013 in ourhospitalwere collected．Bacteria identification and drug sensitive testwere doneafter the traitwereobserved．The HRVwere detected at the same time．The results wereanalyzed statistically．ResultsIn all 128 samples，the positive rate of HRV was 64．06％（82 ／128），the positive rate of bacteria was 53．91％（69／128），the positive rate of both HRV and bacteria all positive was53．91%（69／128），69 cases bacteria positive strains including 27 cases Staphylococcus aureus，25 cases non－Salmonella typhi，7 casesShigella，4 casesEscherichia coli，and 6 cases found two kinds bacteria simultaneously．Escherichia colishown higher drug resistance to all 6 kinds antibiotics，and were completely resistant to ampicillin and levofloxacin．25 cases non－Salmonella typhiand 7 casesShigellashowed higher drug resistance to ampicillin，ceftriaxone and levofloxacin．Salmonellagroup B detected from merge two kinds bacterial infections shown higher drug resistance to all 6 kinds antibiotics，and were completely resistant to sulfamethoxazole and ceftriaxone．The trait of faeces which with HRV and bacteria both positive showed pus and blood stool，mucous stool，mucousstool，liquidstool，liquid stool，and including 36 cases showed liquid stool combined mucous stool or blood stool．ConclusionThe incidence rate of HRV combined bacterial diarrhea show higher．HRV and bacterial resistance detecting all have important value to therapeutic schedule formulating．

Rotavirus；Bacterialdiarrhea；Etiologicaldetection；Drug resistance

10．3969／j．issn．1674－7151．2014．01．009

2014－02－04）

（本文編輯：張志成）

445000 恩施市，恩施土家族苗族自治州疾病預防控制中心檢驗科