李玉軍

專(zhuān)家述評(píng)

microRNAs在腫瘤病理學(xué)研究中的進(jìn)展

李玉軍

microRNAs（miRNAs）是一類(lèi)長(zhǎng)度約為20～23 nt的內(nèi)源性小分子單鏈非編碼RNA，其位于基因組內(nèi)非編碼區(qū)，進(jìn)化上高度保守，可在轉(zhuǎn)錄后水平對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行調(diào)節(jié)［1－3］。miRNAs通過(guò)調(diào)控基因表達(dá)、在細(xì)胞增殖、凋亡、分化及個(gè)體發(fā)育等過(guò)程中發(fā)揮著非常重要的作用。近十多年的研究［4，5］已證實(shí)，miRNAs與腫瘤的發(fā)生及發(fā)展關(guān)系密切，通過(guò)調(diào)控其靶基因的表達(dá)從而影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展，發(fā)揮著類(lèi)似癌基因或抑癌基因的作用。這些與腫瘤相關(guān)的miRNAs對(duì)腫瘤的診斷、治療及判斷預(yù)后都具有重要的意義及應(yīng)用前景。

1 miRNAs的發(fā)現(xiàn)、產(chǎn)生、成熟及作用機(jī)制

1993年，Lee等［6］首先在線蟲(chóng)的胚胎發(fā)育期發(fā)現(xiàn)一種長(zhǎng)度約為22 nt的小分子非編碼RNA，能調(diào)節(jié)線蟲(chóng)細(xì)胞發(fā)育時(shí)序，將其命名為lin－4。隨后研究者發(fā)現(xiàn)lin－4通過(guò)堿基配對(duì)的方式結(jié)合到lin14mRNA的3＇末端非翻譯區(qū)（3＇untranslational region，3＇UTR），可以抑制lin14蛋白表達(dá)。2000年Reinhart等［7］發(fā)現(xiàn)另一小分子單鏈非編碼RNA－let－7。與lin－4的作用機(jī)制相似，let－7通過(guò)與lin－41和lin－57mRNA的3＇UTR結(jié)合實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄抑制功能，從而影響線蟲(chóng)的時(shí)序性發(fā)育。從此以后，lin－4和let－7很快引起人們的關(guān)注，許多實(shí)驗(yàn)室從家鼠、擬南芥、線蟲(chóng)、果蠅及人類(lèi)等多種真核生物的細(xì)胞中陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了超過(guò)300余種此類(lèi)小分子非編碼RNA，科學(xué)家以miRNAs來(lái)命名這些呈現(xiàn)時(shí)空特異性表達(dá)模式的非編碼小分子。

miRNAs的產(chǎn)生及成熟過(guò)程大致可分為核內(nèi)及核外兩個(gè)階段。miRNAs基因經(jīng)RNA聚合酶II或III轉(zhuǎn)錄形成長(zhǎng)度約1000 bp的長(zhǎng)鏈RNA初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物（pri－miRNAs）。在細(xì)胞核中，Drosha及DGCR8酶對(duì)pri－miRNAs的基部進(jìn)行剪切，形成約60～70 nt帶有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的pre－miRNAs，然后通過(guò)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Exportin－5運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞質(zhì)。在細(xì)胞質(zhì)中，由Dicer酶識(shí)別并切割pre－miRNAs雙鏈的3＇末端及5＇末端，形成19～23 nt的小分子RNA，即成熟的miRNAs［8］。

成熟的miRNAs在細(xì)胞中通過(guò)RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體發(fā)揮作用［9，10］。成熟miRNAs通過(guò)種子序列匹配而結(jié)合到靶mRNAs上，通過(guò)與3＇UTR完全或不完全互補(bǔ)結(jié)合，對(duì)靶mRNAs進(jìn)行降解或抑制其蛋白翻譯，從而抑制靶基因的表達(dá)，發(fā)揮其生物學(xué)作用（圖1）。多個(gè)miRNAs可以協(xié)同調(diào)節(jié)單個(gè)靶基因，一個(gè)miRNA也可以調(diào)節(jié)若干個(gè)靶基因。因此，miRNAs和靶基因之間形成了復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，維系著細(xì)胞正常功能的運(yùn)轉(zhuǎn)。

圖1 miRNAs的產(chǎn)生及作用機(jī)制

2 miRNAs與腫瘤基礎(chǔ)研究

2.1 腫瘤細(xì)胞miRNAs表達(dá)差異及其機(jī)制與正常細(xì)胞相比，腫瘤細(xì)胞中有大量的miRNAs存在表達(dá)差異。miRNAs表達(dá)失調(diào)最先在慢性B淋巴細(xì)胞性白血病（B chronic lymphoblastic leukemia，B－CLL）中被發(fā)現(xiàn)。在50%～60%的BCLL患者中，定位于淋巴細(xì)胞染色體13q14位置上的miRNA－15和miRNA－16的2個(gè)基因有缺失或表達(dá)下調(diào)現(xiàn)象［3］。隨后，在人類(lèi)多種腫瘤中都檢測(cè)到miRNAs表達(dá)水平的變化。另有研究［12］分析了取自乳腺、結(jié)腸、肺、前列腺、胰腺、胃等6種常見(jiàn)腫瘤的標(biāo)本和正常組織對(duì)照，發(fā)現(xiàn)研究的228個(gè)miRNAs中，有26種miRNAs表達(dá)上調(diào)，表達(dá)下調(diào)的只有17種。在甲狀腺乳頭狀癌中，miRNA－221、miR NA－222和miRNA－146表達(dá)顯著上調(diào)［12］。兒童Burkitt淋巴瘤及霍奇金淋巴瘤中，miR NA－155／BIC的前體出現(xiàn)高表達(dá)［13］。Bloomston等［14］對(duì)胰腺癌miRNAs表達(dá)譜進(jìn)行分析，共發(fā)現(xiàn)21個(gè)miRNAs表達(dá)上調(diào)，4個(gè)miRNAs表達(dá)下調(diào)。miR NA－125b、miR NA－145、miR NA－21和miR NA－155在乳腺癌中均出現(xiàn)表達(dá)下調(diào)［15］。miR NA－143和miR NA－145在結(jié)腸腫瘤中均表達(dá)下調(diào)［16］。miR NA－21在肝癌、乳腺癌、惡性膠質(zhì)瘤以及胰腺癌中均出現(xiàn)高表達(dá)［17－23］。這些發(fā)現(xiàn)表明miRNAs的差異表達(dá)在腫瘤發(fā)病中具有重要作用，有望用于腫瘤診斷。

miRNAs在腫瘤組織中為什么會(huì)出現(xiàn)表達(dá)失調(diào)？其機(jī)制目前已發(fā)現(xiàn)至少有4種：（1）許多miRNAs基因被證實(shí)定位在腫瘤相關(guān)的基因組區(qū)域，即位于基因組中易伴隨腫瘤發(fā)生的變異區(qū)域。Calin等［24］研究了186個(gè)miRNAs在人類(lèi)染色體上的定位與腫瘤發(fā)生的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)50%的miRNAs基因頻繁地出現(xiàn)在與腫瘤相關(guān)的基因區(qū)域或是脆性位點(diǎn)上，如純合性缺失區(qū)、雜合性缺失區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、斷裂點(diǎn)區(qū)、靠近抑癌基因或癌基因的部位等；（2）miRNAs轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控。如miRNA－34家族是抑癌基因p53的直接轉(zhuǎn)錄調(diào)控靶標(biāo)［25］。miR NA－17－92多順?lè)醋踊蚴茉┗騝－myc的調(diào)控［26］；（3）miRNAs表達(dá)的表觀遺傳調(diào)控。細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的表觀遺傳標(biāo)志包括：DNA整體甲基化水平異常、CpG島甲基化以及組蛋白修飾失調(diào)等。表觀遺傳調(diào)控異常會(huì)影響miRNAs的表達(dá)水平。在乳腺癌細(xì)胞中，組蛋白去乙酰化酶受抑制會(huì)引起miRNAs表達(dá)水平出現(xiàn)廣泛而迅速的改變［27］。用組蛋白去乙酰化酶的抑制物4－苯丁酸和5－氮雜脫氧胞苷聯(lián)合作用于膀胱癌細(xì)胞后檢測(cè)313個(gè)miRNAs表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)有17個(gè)miRNAs出現(xiàn)3倍以上的表達(dá)上調(diào)，其中miRNA－127的表達(dá)水平變化最大［28］。miRNAs也可調(diào)控外在體系的表達(dá)。miRNA－148直接作用于DNA轉(zhuǎn)甲基酶Ⅲ，催化DNA的甲基化［29］；miR NA－1調(diào)控組蛋白轉(zhuǎn)甲酰基酶Ⅳ，而后者是一個(gè)重要的組蛋白修飾物［30］；（4）與miRNAs加工相關(guān)的基因及其蛋白異常變化。對(duì)非小細(xì)胞肺癌（non－small cell lung cancer，NSCLC）患者的大規(guī)模研究發(fā)現(xiàn)，在部分NSCLC中Dicer蛋白出現(xiàn)下調(diào)，而Drosha蛋白水平?jīng)]有發(fā)生改變。Dicer酶的失效與miRNAs表達(dá)下調(diào)相關(guān)［31］。上述幾種機(jī)制可獨(dú)立發(fā)揮作用，也可以協(xié)同作用。另外，miRNAs和mRNA之間的黏合性也可因突變或多態(tài)性受到影響，并干擾其轉(zhuǎn)錄過(guò)程。研究［32］已發(fā)現(xiàn)miR NA－146前體上存在G／C單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)，該位點(diǎn)可影響miRNAs的成熟效率，并與肝細(xì)胞癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。

2.2 miRNAs參與腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程正常細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、發(fā)育、分化和死亡是高度有序的過(guò)程，這一過(guò)程發(fā)生紊亂可導(dǎo)致腫瘤的產(chǎn)生。miRNAs在腫瘤發(fā)生發(fā)展的各個(gè)階段均發(fā)揮了重要作用。

細(xì)胞增殖異常是腫瘤的重要特征，miRNAs可調(diào)控與細(xì)胞增殖相關(guān)的基因，改變細(xì)胞的正常周期，從而誘發(fā)了腫瘤。Yu等［33］研究發(fā)現(xiàn)，let－7可調(diào)節(jié)H－RAS和HMGA2基因而影響乳腺癌起始細(xì)胞的自我更新能力，從而影響乳腺癌細(xì)胞的成瘤能力。let－7還可通過(guò)下調(diào)pan－RAS、N－RAS和K－RAS，從而抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖［34］。miR NA－155是由人BIC基因編碼的miRNA，miR NA－155可通過(guò)抑制MAD1、MX11、ROX／MNT等基因的表達(dá)，促進(jìn)MYC基因的活性，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖，并且過(guò)表達(dá)miR NA－155的轉(zhuǎn)基因小鼠可出現(xiàn)B細(xì)胞異常增殖［35］。

抵抗凋亡也是促進(jìn)腫瘤發(fā)展的重要因素。miR NA－15a／16、miR NA－34、miR NA－29等均可抑制BCL－2蛋白的表達(dá)，使腫瘤細(xì)胞抗凋亡能力增高［36－38］。在人類(lèi)上皮性腫瘤細(xì)胞中過(guò)表達(dá)miR NA－143／145可抑制MDM2表達(dá)，通過(guò)干擾miRNAs－MDM2－p53環(huán)路可促進(jìn)細(xì)胞凋亡［39］。

侵襲和轉(zhuǎn)移也是惡性腫瘤發(fā)展的重要生物學(xué)特征，miRNAs廣泛參與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程的調(diào)控。miRNA－21是目前報(bào)道較多的可調(diào)控腫瘤轉(zhuǎn)移的miRNA，其對(duì)乳腺癌、肝細(xì)胞性肝癌、膽管癌、食管鱗癌、前列腺癌、結(jié)直腸癌以及黑色素瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移均有促進(jìn)作用［40－46］。miR NA－126參與調(diào)控非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的黏附、侵襲和遷移，這一過(guò)程可能是由接頭蛋白Crk介導(dǎo)的［47］。Nakada等［48］通過(guò)微陣列和定量PCR技術(shù)，對(duì)腎透明細(xì)胞癌和嫌色細(xì)胞癌中的470個(gè)人類(lèi)miRNAs進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)miR NA－141和miR NA－200c可能通過(guò)調(diào)控ZFHX1B而抑制E－鈣黏蛋白的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而影響腫瘤細(xì)胞的黏附和遷移。

新生血管的生成，可以為腫瘤生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)和氧氣。miRNAs可通過(guò)直接或間接調(diào)節(jié)腫瘤血管生成來(lái)影響腫瘤的進(jìn)展。多個(gè)研究小組的報(bào)道都證實(shí)miRNAs可影響腫瘤血管生成。miR NA－221／222可通過(guò)負(fù)性調(diào)節(jié)c－kit的表達(dá)從而抑制臍帶血管內(nèi)皮細(xì)胞形成管的能力，也可通過(guò)下調(diào)eNOS抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移［49，50］。miR NA－17－92簇可通過(guò)影響凝血酶敏感蛋白1的表達(dá)而調(diào)節(jié)血管生成［51］。

3 miRNAs與腫瘤的診斷、預(yù)后和治療

miRNAs的表達(dá)具有明顯的組織特異性和腫瘤發(fā)生的階段特異性，腫瘤發(fā)生發(fā)展的不同階段具有不同的miRNAs表達(dá)譜。miRNAs也可作為癌基因或抑癌基因參與腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程。因此，miRNAs在腫瘤的診斷和分類(lèi)、預(yù)后判斷以及治療方面具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。

3.1 miRNAs與腫瘤診斷腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞miRNAs表達(dá)譜的差別，以及不同類(lèi)型腫瘤miRNAs表達(dá)譜的特異性，為腫瘤的診斷及鑒別診斷提供了非常有益的參考指標(biāo)。Lu等［52］使用流式微球細(xì)胞分析技術(shù)表達(dá)譜的方法對(duì)334例樣本中的217種人類(lèi)miRNAs進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)miRNAs的表達(dá)譜可較準(zhǔn)確地區(qū)分正常細(xì)胞和癌細(xì)胞，并可鑒別分化不良的腫瘤。miR NA－205及miR NA－21在胰腺導(dǎo)管腺癌中會(huì)出現(xiàn)過(guò)多表達(dá)，由于這兩種miRNA表達(dá)的上調(diào)發(fā)生于胰腺導(dǎo)管細(xì)胞的表型改變，因此miR NA－205和miR NA－21被認(rèn)為可以作為診斷胰腺導(dǎo)管腺癌的標(biāo)志物［53］。Volinia等［3］聚類(lèi)分析了363個(gè)來(lái)自于6種常見(jiàn)的實(shí)體瘤（乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、胰腺癌、胃癌以及前列腺癌）以及177個(gè)正常對(duì)照樣本，結(jié)果顯示不同組織器官表達(dá)的miRNAs各異。

隨著miRNAs檢測(cè)手段的不斷發(fā)展，近年來(lái)檢測(cè)血液樣本中miRNAs可以為癌癥的診斷提供無(wú)創(chuàng)性的檢測(cè)方法。相對(duì)腫瘤組織而言，外周血血清較易獲得和檢測(cè)，臨床應(yīng)用便捷，且miRNAs在血清中可長(zhǎng)期穩(wěn)定存在。因此，血清miRNAs表達(dá)譜檢測(cè)有可能成為一種癌癥無(wú)創(chuàng)診斷的手段。文獻(xiàn)研究［54］發(fā)現(xiàn)，血清miR NA－92可用作結(jié)直腸癌的分子標(biāo)志物，可以診斷Ⅰ～Ⅳ期的結(jié)直腸癌，靈敏度可達(dá)89%，特異性達(dá)到70%。血清中miR NA－141的表達(dá)水平可作為前列腺癌的診斷標(biāo)志物［55］。目前，盡管miRNAs有助于臨床腫瘤的診斷，但是距離真正應(yīng)用于臨床仍有很大距離，仍需大量臨床病例資料的系統(tǒng)研究。

3.2 miRNAs與腫瘤預(yù)后利用惡性腫瘤中的miRNAs表達(dá)譜可鑒定出許多與癌癥預(yù)后預(yù)測(cè)相關(guān)的信號(hào)。研究［20，56，57］顯示，miR NA－21高表達(dá)的乳腺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌患者預(yù)后較差。Takamizawa等［58］報(bào)道肺癌中l(wèi)et－7的表達(dá)水平下降，且與更低的術(shù)后存活率密切相關(guān)。在胰腺癌的miRNAs表達(dá)譜中，一共包含6個(gè)miRNAs的亞群，在有較長(zhǎng)生存期的患者和24個(gè)月內(nèi)死亡的患者中出現(xiàn)表達(dá)差異；另外，高表達(dá)miRNA－196a－2預(yù)示較差的預(yù)后［15］。Li等［59］報(bào)道，一個(gè)包括miR NA－10b、miR NA－21、miR NA－223、miR NA－338、let－7a、miR NA－30a－5p、miR NA－126這7個(gè)miRNAs在內(nèi)的miRNAs譜可用于胃癌患者的生存預(yù)測(cè)。在肝癌中，miR NA－221的表達(dá)上調(diào)與患者更短的復(fù)發(fā)時(shí)間相關(guān)［60］。另有研究［61］發(fā)現(xiàn)，miR NA－199a／b－3p在肝癌患者中的低表達(dá)與較差的生存預(yù)后有關(guān)。以上研究說(shuō)明，miRNAs表達(dá)譜不僅可以作為腫瘤的診斷標(biāo)志，同時(shí)也可作為腫瘤的預(yù)后標(biāo)志。

3.3 miRNAs與腫瘤治療miRNAs在諸多腫瘤中表達(dá)的研究證實(shí)了miRNAs在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用，并顯示miRNAs有可能作為腫瘤治療的新靶點(diǎn)。例如，Elyakim等［62］在原位移植肝癌細(xì)胞的小鼠腹腔內(nèi)注射miR NA－191抑制物，40 d后發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組的移植瘤塊明顯比對(duì)照組小。利用慢病毒載體可將let－7導(dǎo)入乳腺癌干細(xì)胞，可以明顯降低乳腺癌干細(xì)胞的體外自我更新能力和增殖能力，且顯著抑制其體內(nèi)成瘤和轉(zhuǎn)移能力［33］。Kim等［63］發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌細(xì)胞系及乳腺癌患者的癌組織中，miR NA－145與其靶基因如c－MYC、IGF－1R、Fascin－1表達(dá)量之間存在著負(fù)相關(guān)性。他們將腺病毒表達(dá)的miR NA－145導(dǎo)入乳腺癌細(xì)胞系以及乳腺癌小鼠進(jìn)行體內(nèi)外試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)腺病毒構(gòu)建的miRNA－145均能抑制乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，而且miRNA－145與5－氟尿嘧啶聯(lián)合使用顯現(xiàn)出更加強(qiáng)烈的抑癌作用，因此研究者認(rèn)為miR NA－145在乳腺癌的治療中具有應(yīng)用價(jià)值。將脂質(zhì)納米與miR NA－34a模擬物的制劑分別經(jīng)瘤內(nèi)和尾靜脈注射入非小細(xì)胞肺癌荷瘤小鼠，均能有效抑制腫瘤的生長(zhǎng)并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，且發(fā)現(xiàn)經(jīng)尾靜脈注射后小鼠瘤塊更?。?4］。

4 小結(jié)

miRNAs作為一類(lèi)新的分子靶標(biāo)顯現(xiàn)出了廣闊的應(yīng)用前景。目前，miRNAs應(yīng)用于腫瘤的治療仍然存在許多難題和弊端。因?yàn)榧?xì)胞內(nèi)每個(gè)miRNA分子可調(diào)控上千個(gè)靶基因，所以單純進(jìn)行某些特定的miRNA轉(zhuǎn)染及單純對(duì)某一個(gè)內(nèi)源性miRNA進(jìn)行基因打靶或拮抗都可能會(huì)導(dǎo)致非特異性的靶基因mRNA的降解或轉(zhuǎn)錄后翻譯阻遏，從而產(chǎn)生多種副作用。其次RNA不穩(wěn)定，易降解。如何提高miRNAs治療轉(zhuǎn)染的高效性、穩(wěn)定性及特異性等都是需要面對(duì)和解決的問(wèn)題。以miRNAs為策略的抗腫瘤治療為腫瘤的生物治療開(kāi)辟了新途徑，但miRNAs從實(shí)驗(yàn)室到用于腫瘤的治療應(yīng)用還有很長(zhǎng)的路要走。

1 BartelDP．MicroRNAs：genomics，biogenesis，mechanism，and function．Cell，2004，116：281－297．

2 LimLP，GlasnerME，YektaS，etal．Vertebrate microRNA genes．Science，2003，299：1540．

3 Volinia S，Calin GA，Liu CG，et al．A microRNA expression signature of human solid tumors defines cancer gene targets． Proc Natl Acad Sci USA，2006，103：2257－2261．

4 Voorhoeve PM，leSageC，SchrierM，etal．A genetic screen implicates miRNA－372 and miRNA－373 as oncogenes in testicular germ cell tumors．Cell，2006，124：1169－1181．

5 Johnson SM，GrosshansH，ShingaraJ，etal．Ras is regulated by the let－7 microRNA family．Cell，2005，120：635－647．

6 Lee RC，F(xiàn)einbaumRL，AmbrosV．TheC．elegans heterochronic genelin－4 encodes small RNAs with antisense complementarity to lin－14．Cell，1993，75：843－854．

7 Reinhart BJ，SlackFJ，BassonM，etal．The21－nucleotidelet－7RNA regulates developmental timing in Caenorhabditis elegans．Nature，2000，403：901－906．

8 Cullen BR． Transcription and processing of human microRNA precursors．Mol Cell，2004，16：861－865．

9 Lund E，GuttingerS，CaladoA，etal．Nuclear export of microRNA precursors．Science，2004，303：95－98．

10 Kim VN．MicroRNA precursors inmotion：Exportin－5mediates theirnuclearexport．TrendsCell Biol，2004，14：156－159．

11 Calin GA，Dumitru CD，Shimizu M，et al．Frequent deletions and down－regulation ofmicro－RNA genesmiR－15 andmiR－16 at13q14 in chronic lymphocytic leukemia．Proc Natl Acad Sci USA，2002，99：15524－15529．

12 He H，Jazdzewski K，LiW，et al．The role ofmicroRNA genes in papillary thyroid carcinoma．Proc Natl Acad Sci USA，2005，102：19075－19080．

13 Metzler M，W ilda M，Busch K，et al．High expression of precursor microRNA－155／BICRNA in children with Burkitt lymphoma．Genes ChromosomesCancer，2004，39：167－169．

14 Bloomston M，F(xiàn)rankelWL，Petrocca F，etal．MicroRNA expression patterns to differentiate pancreatic adenocarcinoma from normal pancreas and chronic pancreatitis．Jama，2007，297：1901－1908．

15 Iorio MV，F(xiàn)erracin M，Liu CG，et al．MicroRNA gene expression deregulation in human breast cancer．Cancer Res，2005，65：7065－7070．

16 MichaelMZ，O＇Connor SM，van HolstPellekaan NG，etal．Reduced accumulation ofspecificmicroRNAsin colorectalneoplasia．MolCancerRes，2003，1：882－891．

17 Connolly E，MelegariM，Landgraf P，etal．Elevated expression of the miR－17－92 polycistron andmiR－21 in hepadnavirus－associated hepatocellular carcinoma contributes to themalignant phenotype．Am J Pathol，2008，173：856－864．

18 Gramantieri L，F(xiàn)ornari F，Callegari E，etal．MicroRNA involvement in hepatocellular carcinoma．JCellMolMed，2008，12：2189－2204．

19 Qian B，Katsaros D，Lu L，etal．HighmiR－21 expression in breast cancerassociatedwith poordisease－freesurvival in early stagedisease and high TGF－beta1．BreastCancer ResTreat，2009，117：131－140．

20 Yan LX，Huang XF，Shao Q，et al．MicroRNA miR－21 overexpression in human breastcancer isassociated with advanced clinical stage，lymph node metastasis and patient poor prognosis．RNA，2008，14：2348－2360．

21 Chen Y，Liu W，Chao T，et al．MicroRNA－21 down－regulates the expression of tumor suppressor PDCD4 in human glioblastoma cell T98G．Cancer Letter，2008，272：197－205．

22 Gabriely G，Wurdinger T，Kesari S，et al．MicroRNA 21 promotes glioma invasion by targetingmatrixmetalloproteinase regulators．Mol Cell Biol，2008，28：5369－5380．

23 Lee EJ，Gusev Y，Jiang J，etal．Expression profiling identifiesmicroRNA signature in pancreatic cancer．Int JCancer，2007，120：1046－1054．

24 Calin GA，SevignaniC，Dumitru CD，etal．HumanmicroRNA genes are frequently located at fragile sitesand genomic regions involved in cancers．Proc Natl Acad SciUSA，2004，101：2999－3004．

25 He L，He X，Lim LP，etal．AmicroRNA componentof the p53 tumour suppressor network．Nature，2007，447：1130－1134．

26 He L，Thomson JM，Hemann MT，etal．AmicroRNA polycistron asa potentialhuman oncogene．Nature，2005，435：828－833．

27 ScottGK，MattieMD，Berger CE，etal．Rapid alteration ofmicroRNA levels by histone deacetylase inhibition．Cancer Res，2006，66：1277－1281．

28 Saito Y，Liang G，Egger G，et al．Specific activation ofmicroRNA－127with downregulation of the proto－oncogene BCL6 by chromatinmodifying drugs in human cancer cells．Cancer Cell，2006，9：435－443．

29 Duursma AM，Kedde M，Schrier M，et al．miR－148 targets human DNMT3b protein coding region．Rna，2008，14：872－877．

30 Datta J，Kutay H，Nasser MW，etal．Methylationmediated silencing of MicroRNA－1 gene and its role in hepatocellular carcinogenesis．Cancer Res，2008，68：5049－5058．

31 Karube Y，Tanaka H，Osada H，et al．Reduced expression of Dicer associated with poor prognosis in lung cancer patients．Cancer Sci 2005，96：111－115．

32 Xu T，Zhu Y，WeiQK，etal．A functionalpolymorphism in themiR－146a gene is associated with the risk for hepatocellular carcinoma．Carcinogenesis，2008，29：2126－2131．

33 Yu F，Yao H，Zhu P，etal．let－7 regulates self renewal and tumorigenicity ofbreastcancer cells．Cell，2007，131：1109－1123．

34 Lee ST，Chu K，Oh HJ，etal．Let－7microRNA inhibits the proliferation ofhuman glioblastoma cells．JNeurooncol，2011，102：19－24．

35 Costinean S，Zanesi N，Pekarsky Y，et al．Pre－B cell proliferation and lymphoblastic leukemia／high－grade lymphoma in E（mu）－miR155 transgenicmice．Proc Natl Acad Sci USA，2006，103：7024－7029．

36 He L，He X，Lim LP，etal．AmicroRNA componentof the p53 tumour suppressornetwork．Nature，2007，447：1130－1134．

37 Cimmino A，Calin GA，F(xiàn)abbriM，etal．miR－15 andmiR－16 induce apoptosis by targeting BCL2．Proc Natl Acad Sci USA，2005，102：13944－13949．

38 Xiong Y，F(xiàn)ang JH，Yun JP，etal．EffectsofmicroRNA－29 on apoptosis，tumorigenicity，and prognosis of hepatocellular carcinoma．Hepatology，2010，51：836－845．

39 Zhang J，Sun Q，Zhang Z，etal．Loss ofmicroRNA－143／145 disturbs cellular growth and apoptosisofhuman epithelial cancersby impairing theMDM2－p53 feedback loop．Oncogene，2013，32：61－69．

40 Zhu S，Wu H，Wu F，etal．MicroRNA－21 targets tumor suppressor genesin invasion andmetastasis．CellRes，2008，18：350－359．

41 Meng F，Henson R，Wehbe－Janek H，etal．MicroRNA－21 regulates expression of the PTEN tumor suppressor gene in human hepatocellular cancer．Gastroenterology，2007，133：647－658．

42 Selaru FM，Olaru AV，Kan T，et al．MicroRNA－21 is overexpressed in human cholangiocarcinoma and regulates programmed cell death 4 and tissue inhibitor of metalloproteinase 3．Hepatology，2009，49：1595－1601．

43 Hiyoshi Y，Kamohara H，Karashima R，et al．MicroRNA－21 regulates the proliferation and invasion in esophageal squamous cell carcinoma．Clin CancerRes，2009，15：1915－1922．

44 LiT，LiD，Sha J，etal．MicroRNA－21 directly targetsMARCKSand promotes apoptosis resistance and invasion in prostate cancer cells．Biochem BiophysRes Commun，2009，383：280－285．

45 Asangani IA，Rasheed SA，Nikolova DA，etal．MicroRNA－21（miR－21）post－transcriptionally downregulates tumor suppressor Pdcd4 and stimulates invasion，intravasation and metastasis in colorectal cancer．Oncogene，2008，27：2128－2136．

46 Yang CH，Yue J，Pfeffer SR，etal．MicroRNAmiR－21 regulates the metastatic behavior of B16 melanoma cells．JBiol Chem，2011，286：39172－39178．

47 Crawford M，Brawner E，Batte K，et al．MicroRNA－126 inhibits invasion in non－small cell lung carcinoma cell lines．Biochem Biophys ResCommun，2008，373：607－612．

48 Nakada C，Matsuura K，Tsukamoto Y，etal．Genome－widemicroRNA expression profiling in renalcell carcinoma：significantdown－regulation ofmiR－141 andmiR－200c．JPathol，2008，216：418－427．

49 Poliseno L，Tuccoli A，Mariani L，et al．MicroRNAsmodulate the angiogenic propertiesofHUVECs．Blood，2006，108：3068－3071．

50 Suarez Y，F(xiàn)ernandez－Hernando C，Pober JS，etal．Dicer dependent microRNAs regulategeneexpression and functions in human endothelial cells．Circ Res，2007，100：1164－1173．

51 Suarez Y，F(xiàn)ernandez－HernandoC，Yu J，etal．Dicer－dependentendothelialmicroRNAs are necessary for postnatal angiogenesis．Proc Natl Acad SciUSA，2008，105：14082－14087．

52 Lu J，GetzG，Miska EA，etal．MicroRNA expression profiles classify human cancers．Nature2005，435：834－838．

53 du Rieu MC，Torrisani J，Selves J，et al．MicroRNA－21 is induced early in pancreatic ductal adenocarcinoma precursor lesions．Clin Chem，2010，56：603－612．

54 Ng EK，ChongWW，Jin H，etal．Differential expression ofmicroRNAsin plasmaofpatientswith colorectal cancer：a potentialmarker for colorectalcancerscreening．Gut，2009，58：1375－1381．

55 Mitchell PS，Parkin RK，Kroh EM，et al．CirculatingmicroRNAs as stable blood－based markers for cancer detection．Proc Natl Acad Sci USA，2008，105：10513－10518．

56 Roldo C，Missiaglia E，Hagan JP，etal．MicroRNA expression abnormalities in pancreatic endocrine and acinar tumorsare associated with distinctive pathologic features and clinical behavior．JClin Oncol，2006，24：4677－4684．

57 Schetter AJ，Leung SY，Sohn JJ，etal．MicroRNA expression profiles associated with prognosisand therapeutic outcome in colon adenocarcinoma．JAMA，2008，299：425－436．

58 Takamizawa J，Konishi H，Yanagisawa K，et al．Reduced expression of the let－7 microRNAs in human lung cancers in association with shortened postoperative survival．Cancer Res，2004，64：3753－3756．

59 LiX，Zhang Y，Zhang Y，etal．Survival prediction of gastric cancer byaseven－microRNA signature．Gut，2010，59：579－585．

60 Gramantieri L，F(xiàn)ornari F，Callegari E，etal．MicroRNA involvement in hepatocellular carcinoma．JCellMolMed，2008，12：2189－2204．

61 Hou J，Lin L，Zhou W，et al．Identification ofmiRNomes in human liver and hepatocellular carcinoma revealsmiR－199a／b－3p as therapeutic target for hepatocellular carcinoma．Cancer Cell，2011，19：232－243．

62 Elyakim E，Sitbon E，F(xiàn)aerman A，etal．hsa－miR－191 isa candidate oncogene target for hepatocellular carcinoma therapy．Cancer Res，2010，70：8077－8087．

63 Kim Seok－Jun，Oh Ji－Sun，Shin Ji－Young，et al．Development of microRNA－145 for therapeutic application in breast cancer．JControlled Release，2011，155：427－434．

64 Wiggins JF，Ruffino L，Kelnar K，etal．Developmentofa lung cancer therapeutic based on the tumor suppressor microRNA－34．Cancer Res，2010，70：5923－5930．

2013－12－15）

（本文編輯：楊軍）

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