姚海青
【摘要】探討溫陽(yáng)活血通絡(luò)方對(duì)博萊霉素引起的小鼠硬皮病的治療作用。方法:把60只清潔級(jí)Balb/c小鼠隨機(jī)分為對(duì)照小組(10只)和模型組(50只),用博萊霉素選取模型組小鼠背部左側(cè)區(qū)域皮下注射,持續(xù)28天,對(duì)照小組用PBS在相同部位皮下注射。待小鼠皮膚切片觀察造模成功后,再把模型組分為中西藥小組(10只)、西藥小組(10只)、中藥小組(10只)、模型對(duì)照小組(10只)。分別灌藥,持續(xù)28天后再處死小鼠,剪去注射部分表皮組織,通過(guò)HE染色和皮膚厚度測(cè)量對(duì)比各組藥物的治療效果。結(jié)果:中西藥小組的皮膚組織恢復(fù)最明顯,其次是中藥組,最后是西藥組。結(jié)論:中西藥結(jié)合應(yīng)用可以最有效的改善硬皮病小鼠的皮膚組織病變。
【關(guān)鍵詞】硬皮??;溫陽(yáng)活血通絡(luò)方;Balb/c小鼠
【中圖分類號(hào)】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1004-4949(2014)04-0173-01
硬皮?。⊿D)是一個(gè)發(fā)病原因及機(jī)制當(dāng)今還尚不十分清楚的與免疫、環(huán)境等緊密聯(lián)系的結(jié)締組織病.目前關(guān)于硬皮病的發(fā)病機(jī)制存在著許多的假說(shuō),但是具體病因還不十分的明確,大多數(shù)學(xué)者研究認(rèn)為該病可能與遺傳、人種、環(huán)境、藥物、免疫異常、血管異常、結(jié)締組織異常、性別等因素有關(guān)。悉尼學(xué)者曾做過(guò)關(guān)于硬皮病與遺傳關(guān)系的研究,最后發(fā)現(xiàn)到,患者一級(jí)親屬患病的可能性比普通一般群體要多達(dá)11-158倍[1]。
1實(shí)驗(yàn)耗材與方法
1.1實(shí)驗(yàn)耗材
清潔級(jí)的Balb/c實(shí)驗(yàn)用小鼠,總計(jì)60只,都選雌性,全部為6周齡,購(gòu)買時(shí)稱重每只達(dá)到17-22g左右,都從湖北省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心購(gòu)入,合格號(hào):(鄂)2014-0-004。本次實(shí)驗(yàn)所用的溫陽(yáng)活血通絡(luò)方,其中藥組成包括:淫羊藿20g、丹參20g、黃芪20g、竹節(jié)參15g、當(dāng)歸10g、桂枝10g、白芍10g、白芥子10g、甘草5g,加蒸餾水煎煮成湯劑,以上中藥,購(gòu)自于湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院中藥房。醋酸潑尼松片,5mg/片,從湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院的西藥房購(gòu)買,國(guó)藥準(zhǔn)字:H36020039,批號(hào):111257。注射用進(jìn)口鹽酸博萊霉素粉劑(BLM),15mg/支,從日本化學(xué)藥株式會(huì)社購(gòu)買。另外,一些實(shí)驗(yàn)檢測(cè)設(shè)備等全部由湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院風(fēng)濕性疾病發(fā)生與干預(yù)免疫實(shí)驗(yàn)室與病理科提供。
1.2實(shí)驗(yàn)方法
在適應(yīng)性飼養(yǎng)7天后,將60只Balb/c小鼠取出,隨機(jī)地把它們分成10只的對(duì)照小組和50只的模型組。造模前,選取背部左側(cè)區(qū)域消毒,先用彎頭剪刀剃去小鼠背部左側(cè)相同部位的被毛。
將準(zhǔn)備好的400ug/ml的博萊霉素從模型組小鼠的背部左側(cè)脫毛皮膚區(qū)皮下注射0.1ml,每天1次,持續(xù)注射總計(jì)28天,將準(zhǔn)備好的對(duì)照小組在相同的地方皮下注射PBS0.1ml,每天1次,持續(xù)注射總計(jì)28天。
硬皮病小鼠制作成功后,需要進(jìn)行分小組灌胃治療,將模型組隨機(jī)平均分成四小組(西藥小組10只,中藥小組10只,中西藥小組10只、模型對(duì)照小組10只)。從造模成功后的第2天起開(kāi)始分小組給于不同的藥物,療程共28天,每天灌胃一次,其中,中西藥小組要先后依次灌入中藥湯劑與西藥溶劑,兩者灌服給藥時(shí)間的間距大約1個(gè)小時(shí)左右。本次給藥嚴(yán)格采用《中藥藥理研究方法學(xué)》中的“等效劑量”法[2]實(shí)施。
(1) 模型對(duì)照小組小鼠:按照5ml.kg-1的計(jì)算方法,每天用生理鹽水灌服。
(2) 中藥小組小鼠:按照20.55g .kg-1(大約為正常成人使用量的12.33倍,正常成人按60kg算)的計(jì)算方法,每天用溫陽(yáng)活血通絡(luò)方灌胃。
(3) 西藥小組小鼠:將5mg醋酸潑尼松片取出,每天一片用滅菌苯研成粉末狀,倒進(jìn)50ml的生理鹽水中充分?jǐn)噭?,按?mg .kg-1的計(jì)算方法,每天用強(qiáng)的松混溶液灌服。
(4) 中西藥小組小鼠:西藥、中藥聯(lián)合應(yīng)用,按5ml.kg-1的計(jì)算方法灌入,兩者灌服時(shí)間的間距大約為1小時(shí)。
1.3檢測(cè)方法
將小鼠皮膚組織切片各免疫組化染色后在顯微鏡下察看,擇取出5個(gè)視野(從每張切片中隨機(jī)選擇),并且測(cè)量器其皮膚厚度,所有數(shù)據(jù)都將通過(guò)“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”來(lái)測(cè)量, 使用用于處理數(shù)據(jù)的SPSS軟件系統(tǒng),t 檢驗(yàn)進(jìn)行各小組比較,P的分析結(jié)果小于0.05算作有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2.1皮膚組織病理學(xué)改變
(1)根據(jù)相關(guān)的皮膚組織圖可發(fā)現(xiàn),模型組小鼠與對(duì)照小組相比,皮膚真皮層厚度明顯增加,膠原纖維增生,毛囊等皮膚附屬器減少,在真皮小血管四周存在炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),血管腔有些縮小,血管壁變厚硬化,有一些甚至堵塞。
(2)根據(jù)相關(guān)的皮膚組織圖可發(fā)現(xiàn),中西藥小組小鼠皮膚組織恢復(fù)最是明顯,最接近于對(duì)照小組,如皮膚厚度變薄等(如表1)。其次是中藥小組,最后是西藥小組,兩者差距不大。
3 討論
硬皮病是一種目前病因還不十分清楚的結(jié)締組織病。美國(guó)的一個(gè)研究顯示,硬皮病可發(fā)生于任何年齡,在女性患者尤為常見(jiàn),大約四倍于男性患者,兒童患者比較罕見(jiàn)。溫陽(yáng)活血通絡(luò)方在湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院與川北醫(yī)學(xué)院長(zhǎng)期臨床治療硬皮病中取得了良好的療效,其中淫羊藿、丹參、黃芪為共為君藥,竹節(jié)參、當(dāng)歸為臣,桂枝、白芍、白芥子為佐,甘草為使,各種藥物的相扶搭配,既能祛邪和通絡(luò)調(diào)血,又能補(bǔ)益諸虛。
由于硬皮病的病因病機(jī)十分復(fù)雜,且病情反復(fù),虛實(shí)駁雜,??衫奂皟?nèi)臟,臨床上單方單藥難以有效控制病情發(fā)展。多數(shù)醫(yī)家經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期反復(fù)的臨床實(shí)踐,認(rèn)為中西藥合用可以達(dá)到取長(zhǎng)補(bǔ)短,有效控制病情發(fā)展的目的。中醫(yī)西醫(yī)的結(jié)合用藥,不但更能提高西藥在抗炎、抑制纖維化、調(diào)整免疫等方面的藥效,而且能彌補(bǔ)西藥在增強(qiáng)病人體質(zhì)、調(diào)節(jié)臟腑功能等方面的缺失,,減輕兩者的副作用,從而綜合提高治療效果。
參考文獻(xiàn)
[1]陳奇主編.中藥藥理研究方法學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社,2006,1168
[2]張乃崢主編.臨床風(fēng)濕病學(xué)[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,1999,275