仇 琪 王 勇 楊克旭 李 春 所 偉 啜文靜 王 偉 林 陽△

(1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京安貞醫(yī)院臨床藥理中心，北京 100029;2.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029)

冠心病心功能不全是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的嚴(yán)重階段，是心肌長(zhǎng)期慢性缺血致能量供應(yīng)不足或能量代謝失衡時(shí)機(jī)體的綜合表現(xiàn)[1]。氣虛血瘀是冠心病心功能不全患者最常見的中醫(yī)證候[2，3]?；颊唧w征表現(xiàn)為神疲乏力、少氣懶言、自汗、舌胖或有齒印、脈虛無力(弱、軟、濡等)伴胸痛、舌質(zhì)紫黯、或有瘀點(diǎn)瘀斑等，生活質(zhì)量顯著下降。大量臨床研究表明，中藥復(fù)方給藥能夠顯著緩解患者氣虛血瘀證表征[4，5]。本研究應(yīng)用Ameroid縮窄環(huán)致小型豬心功能不全氣虛血瘀證病證結(jié)合模型對(duì)益心解毒方改善氣虛血瘀證表征療效進(jìn)行評(píng)價(jià)的同時(shí)，對(duì)該模型氣虛血瘀證的診斷進(jìn)行反證。

1 材料

1.1 動(dòng)物

健康四川巴馬小型豬22只，體質(zhì)量20±2kg，月齡6～10個(gè)月，雌雄各半，購自中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)清潔級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)基地(許可證號(hào)SYXK(京)2011-0006)。

1.2 儀器

麻醉機(jī)(美國(guó)，North American Drager);CV-2000電腦高頻電刀(中國(guó)，北京康威電子技術(shù)有限公司);FX-7202便攜式心電圖機(jī)(日本，福田電子株式會(huì)社);D100數(shù)碼相機(jī)(日本，Nikon)。

1.3 藥品及耗材

Ameroid縮窄環(huán) (Ameroid constrictor)，內(nèi)徑2.75mm(Research Instrument SW，USA);安爾碘(上海利康消毒高科技有限公司，批號(hào)20050808);鹽酸氯胺酮注射液(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號(hào)KH050302);地西泮注射液(天津金輝氨基酸有限公司，批號(hào)0506131);地高辛(上海醫(yī)藥集團(tuán)有限公司信誼制藥總廠，批號(hào)100505);益心解毒方(由黃芪、丹參、銀花等藥材組成，所有藥材均購于北京同仁堂制藥有限公司，北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院以水提醇沉工藝進(jìn)行加工)。

2 方法

2.1 造模方法

實(shí)驗(yàn)小型豬術(shù)前禁食24 h，適量飲水。肌肉注射氯胺酮25 mg·kg－1誘導(dǎo)麻醉，并建立耳緣靜脈通路維持。模型組動(dòng)物18只，于冠狀動(dòng)脈左前降支第一對(duì)角支上方，距心耳邊緣0.5～1 cm處放置直徑2.75 mm的Ameroid環(huán)[6]，關(guān)胸。另制作假手術(shù)動(dòng)物4只，不放置Ameroid環(huán)，其他操作均與模型組一致。

2.2 分組及給藥

所有動(dòng)物于術(shù)后3周末行冠脈造影、宏觀體征、超聲心動(dòng)及凝血相關(guān)指標(biāo)檢查。模型組根據(jù)左心室射血分?jǐn)?shù)(EF)檢查結(jié)果隨機(jī)分為模型組6只，地高辛組6只(每日1次，每次0.0125 mg·kg－1，益心解毒方組6只(每日2次，每次1 g·kg－1)。于評(píng)價(jià)后次日(術(shù)后4周)開始給藥，持續(xù)8周。

2.3 指標(biāo)檢測(cè)

2.3.1 宏觀體征氣虛血瘀證證候積分 于給藥前、給藥后第2、4、8周末對(duì)各組動(dòng)物宏觀表征進(jìn)行觀察，觀察指標(biāo)包括擺尾次數(shù)、精神狀態(tài)、被毛、舌色、爪甲、鼻盤等。對(duì)各部位觀察結(jié)果進(jìn)行證候積分(滿分10分)并用攝像機(jī)攝錄，其中擺尾次數(shù)以1 min內(nèi)擺尾次數(shù)計(jì)算，攝錄3次共3 min，取平均值。

2.3.2 局部照片采集 于給藥前后第2、4、8周末采集小型豬足底、鼻盤、舌面圖像，圖像采集過程以頂棚日光燈照明方式在室內(nèi)完成，固定對(duì)光角度。將小型豬2/3常規(guī)劑量麻醉，拍照時(shí)保證比色卡與小型豬被觀察部位處于同一平面。

2.3.3 圖像分析 使用Adobe Photoshop 8.0.1軟件對(duì)圖像進(jìn)行分析。首先，根據(jù)Casmatch比色卡說明將待分析圖像進(jìn)行歸一化處理，再采用“直方圖”工具，對(duì)圖像選定區(qū)域內(nèi)的R、G、B(即紅、綠、藍(lán)色度值)均值進(jìn)行記錄，輸入Excel表格待統(tǒng)計(jì)分析[7]。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示。相同時(shí)間點(diǎn)各指標(biāo)組間比較采用ANOVA方差分析法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

觀察時(shí)間窗內(nèi)，模型動(dòng)物宏觀體征呈現(xiàn)精神緊張、易激惹、目光晦暗無神、皮毛疏松雜亂且少澤、單位時(shí)間內(nèi)擺尾次數(shù)減少且尾部縮、行動(dòng)緩慢、鼻盤干燥、趾蹼間肌膚甲錯(cuò)、舌青紫暗紅、舌態(tài)欠靈活等特點(diǎn)。

3.1 心功能不全氣虛血瘀證小型豬宏觀體征血瘀證證候積分分析

表1顯示，不同時(shí)間點(diǎn)各組動(dòng)物宏觀體征血瘀證證候積分結(jié)果顯示，給藥前心功能不全模型動(dòng)物血瘀證積分與假手術(shù)組比較顯著升高(P＜0.05或P＜0.01)。藥物治療后，各治療組動(dòng)物證候積分逐漸下降，至給藥后8周，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。

表1 不同時(shí)間點(diǎn)各組宏觀體征血瘀證證候積分比較(s，min)

表1 不同時(shí)間點(diǎn)各組宏觀體征血瘀證證候積分比較(s，min)

注:與假手術(shù)組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與模型組比較:△P＜0.05，△△P＜0.01

組 別 例數(shù) 給藥前 給藥后2周 給藥后4周 給藥后8周假手術(shù)組△△

3.2 心功能不全氣虛血瘀證小型豬局部圖像色度分析

3.2.1 各組間動(dòng)物舌部圖像色度分析 表2-1顯示，給藥后8周，益心解毒方組動(dòng)物舌RGB、R、G、B值與模型組比較均顯著降低(P＜0.01)。

3.2.2 各組間動(dòng)物鼻部圖像色度分析 表2-2顯示，給藥前，假手術(shù)組鼻部圖像RGB、R、G、B值均顯著高于模型動(dòng)物(P＜0.01或P＜0.05);給藥后4周及給藥后8周，益心解毒方組RGB、R、G、B值與模型組比較均顯著上升(P＜0.01或P＜0.05)。

3.2.3 各組間動(dòng)物前蹄圖像色度分析 表2-3顯示，給藥后4周，模型組前蹄RGB值、B值及地高辛組R、G值均顯著高于假手術(shù)組(P＜0.01)，益心解毒方組 RGB、R、G、B值顯著低于模型組(P＜0.01);給藥后8周，模型組、地高辛組動(dòng)物前蹄RGB、R、G、B 值顯著高于假手術(shù)組(P ＜0.01)，益心解毒方組上述指標(biāo)測(cè)定值顯著低于模型組(P＜0.05)。

4 討論

證候表征是中醫(yī)診斷和治療的核心，也是中藥干預(yù)的對(duì)象。病證結(jié)合動(dòng)物模型的建立和評(píng)價(jià)是目前中醫(yī)藥臨床前研究過程中的熱點(diǎn)和難點(diǎn)問題。望診是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物表征采集的重要方式[8]。將患者的證候診斷指標(biāo)與動(dòng)物表征指標(biāo)的病理意義進(jìn)行比較后，對(duì)患者與動(dòng)物模型進(jìn)行證候?qū)傩酝|(zhì)性判定是目前被廣泛接受的證候表征判斷方式[9，10]。然而，評(píng)價(jià)方法的客觀化和標(biāo)準(zhǔn)化一直是廣大學(xué)者關(guān)注的重點(diǎn)。

表2-1 各時(shí)間點(diǎn)舌部色度組間比較 (s)

表2-1 各時(shí)間點(diǎn)舌部色度組間比較 (s)

注:與假手術(shù)組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與模型組比較:△P＜0.05，△△P＜0.01

組別 例數(shù) 給藥前 給藥后2周 給藥后4周 給藥后8周RGB 值假 手 術(shù) 組 4 115.28±18.04 106.91±12.05 106.16± 8.00 98.25±32.96模 型 組 6 127.76± 7.58 124.03± 8.88 121.50±11.22 151.33±13.50＊＊地 高 辛 組 6 120.53±25.17 112.93±25.71 116.19±13.59 129.99±19.73*益心解毒方組 6 130.33±14.93 113.22±24.12 109.50±15.53 88.08±26.74△△R值組假 手 術(shù) 組 4 142.91±17.56 131.81±11.25 134.04±12.97 124.14±38.80模 型 組 6 152.49±10.63 150.78± 8.87 147.60±13.76 181.92± 9.97＊＊地 高 辛 組 6 148.86±31.74 141.39±22.90 145.79±11.05 156.33±16.36益心解毒方組 6 155.83±16.45 142.58±23.23 132.29±16.20 106.31±33.35△△G值組假 手 術(shù) 組 4 99.96±14.88 94.43±15.25 95.24±10.04 85.66±30.76模 型 組 6 116.33±7.39 110.27±10.10 110.23±9.87 138.17±13.21地 高 辛 組 6 112.85±27.99 100.54±26.79 102.80±17.70 119.54±23.18益心解毒方組 6 119.43±14.78 102.19±25.21 98.82±16.34 80.62±25.28△△B值組假 手 術(shù) 組 4 100.49±20.34 92.49±10.79 92.69± 7.33 84.93±30.23模 型 組 6 114.46± 9.10 111.05± 9.14 106.67±11.00 133.89±18.32＊＊地 高 辛 組 6 110.50±27.05 96.87±28.23 101.01±15.64 111.90±20.90益心解毒方組 6 115.73±14.91 94.88±24.15 97.39±14.26 77.32±24.10△△

表2-2 各時(shí)間點(diǎn)鼻部色度組間比較 (s)

表2-2 各時(shí)間點(diǎn)鼻部色度組間比較 (s)

注:與假手術(shù)組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與模型組比較:△P＜0.05，△△P＜0.01

組別 例數(shù) 給藥前 給藥后2周 給藥后4周 給藥后8周RGB 值 組假 手 術(shù) 組 4 147.98± 8.86 148.53± 5.14 139.68±10.07 149.63±22.76模 型 組 6 127.20± 2.90＊＊ 133.36± 5.43* 120.32±14.13* 117.84±12.78＊＊地 高 辛 組 6 120.59± 6.24＊＊ 129.00±5.02＊＊ 117.82± 6.20* 126.87± 4.46*益心解毒方組 6 132.66± 6.71* 132.67± 8.02* 137.69± 7.71△ 145.59±12.70△△R值組假 手 術(shù) 組 4 178.12±3.02 176.49±8.43 170.99±3.23 185.73±21.42模 型 組 6 152.80±15.26＊＊ 163.86± 9.24 147.51±17.78* 149.95±16.95＊＊地 高 辛 組 6 151.71±10.35＊＊ 161.09±9.72 152.50±6.96* 156.04±5.44*益心解毒方組 6 161.02± 6.72* 159.28±6.57 165.45± 7.23△ 174.62±12.43△G值組假 手 術(shù) 組 4 135.99±11.59 131.70± 4.22 130.09±18.63 135.77±21.26模 型 組 6 119.00± 6.27 124.26±10.30 111.41±15.15 106.04±13.48＊＊地 高 辛 組 6 109.23±7.22＊＊ 119.09±8.44 104.43±8.47* 115.21±11.29益心解毒方組 6 124.17±10.64 124.69±11.53 130.24± 7.50△ 136.63±12.04△△B值組假 手 術(shù) 組 4 129.84±11.98 127.40± 8.35 117.95±10.28 127.40±25.67模 型 組 6 109.80± 2.94* 111.95±10.17* 102.04±10.09 97.52±10.39＊＊地 高 辛 組 6 100.82± 7.38＊＊ 106.82±7.97＊＊ 96.51± 5.09* 109.35± 6.88益心解毒方組 6 112.81± 6.53* 114.03±12.01 117.37±10.98△ 125.52±14.28△△

課題組在前期研究中，根據(jù)1986年《血瘀證診斷標(biāo)準(zhǔn)》與1986年5月修訂的《中醫(yī)虛證辨證參考標(biāo)準(zhǔn)》，通過 casmatch標(biāo)準(zhǔn)比色卡校準(zhǔn)，采用Photoshop軟件將動(dòng)物局部色質(zhì)轉(zhuǎn)化為R、G、B值進(jìn)行定量分析;小型豬的活動(dòng)度、乏力懶動(dòng)等癥狀結(jié)合中獸醫(yī)學(xué)經(jīng)驗(yàn)，以搖尾實(shí)驗(yàn)進(jìn)行分析;結(jié)合一般狀況如毛發(fā)、精神狀況及掙扎力度等運(yùn)用中醫(yī)基礎(chǔ)理論進(jìn)行辨證，確定模型動(dòng)物的基本證候，認(rèn)為Ameroid縮窄環(huán)致心肌缺血小型豬術(shù)后4～12周具備氣虛血瘀證指征[11]。筆者針對(duì)大鼠血瘀證前期研究結(jié)果顯示，模型動(dòng)物舌色、足底、耳廓的圖像色度改變與血液流變學(xué)指標(biāo)改變呈顯著相關(guān)[12]。結(jié)合上述研究結(jié)果，本實(shí)驗(yàn)選擇術(shù)后第4周初作為給藥起始時(shí)間點(diǎn)，以地高辛為對(duì)照藥物，于給藥前、后第2、4、8周對(duì)各組動(dòng)物宏觀體征進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，以觀察藥物對(duì)模型動(dòng)物氣虛血瘀證表征的改善作用。

表2-3 各時(shí)間點(diǎn)前蹄色度組間比較 (s)

表2-3 各時(shí)間點(diǎn)前蹄色度組間比較 (s)

注:與假手術(shù)組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與模型組比較:△P＜0.05，△△P＜0.01

組別 例數(shù) 給藥前 給藥后2周 給藥后4周 給藥后8周RGB 值 組假 手 術(shù) 組 4 155.54±13.56 147.92±11.75 141.87±113.91 128.12±11.54模 型 組 6 157.52±13.17 163.80±15.28 165.97± 10.95＊＊ 155.85±10.42＊＊地 高 辛 組 6 148.84±11.41 153.20±12.43 159.72± 10.85 157.46±16.84＊＊益心解毒方組 6 151.53±17.63 153.39±23.34 138.98± 12.06△△ 136.16±11.56△R值組假 手 術(shù) 組 4 188.00±8.47 183.24±4.84 176.77±14.43 166.75±11.51模 型 組 6 192.56±12.00 198.25± 9.94 197.45± 9.58* 193.14±14.00＊＊地 高 辛 組 6 189.91± 8.05 185.89± 9.26 196.60± 10.68* 193.23±10.28＊＊益心解毒方組 6 187.11±16.28 188.20±21.16 173.82± 9.04△△ 178.93± 5.17△△G值組假 手 術(shù) 組 4 148.06±14.78 136.88±14.53 134.93± 12.33 122.39± 7.64模 型 組 6 152.25±14.40 158.20±19.29 159.92± 13.25* 144.43±11.62*地 高 辛 組 6 138.42±11.75 147.47±14.94 154.68± 13.04 150.20±19.10*益心解毒方組 6 144.53±20.25 147.38±26.83 131.31± 14.77△△ 128.25±16.27 B值組假 手 術(shù) 組 4 130.55±17.52 118.65±15.00 113.92± 15.11 95.23±18.78模 型 組 6 127.76±14.48 134.95±19.02 140.53± 13.61* 129.08± 9.83＊＊地 高 辛 組 6 118.18±14.95 126.25±14.72 127.76± 11.93 128.93±21.91＊＊益心解毒方組 6 122.97±17.20 124.59±22.57 111.82± 14.51△△ 101.31±13.75△△

心氣虛衰導(dǎo)致心血瘀滯、煉聚成毒犯心，心脈不通、胸陽不振是冠心病心功能不全中醫(yī)病機(jī)之根本。益心解毒方以益氣溫陽、活血解“毒”立法，由黃芪、丹參、銀花等藥物組成，主要針對(duì)冠心病心功能不全氣虛血瘀證的治療[13]。結(jié)果顯示，地高辛給藥8周后動(dòng)物證候積分與模型動(dòng)物比較顯著改善，與地高辛改善心功能療效相關(guān)，但該藥物對(duì)動(dòng)物局部圖像色度無顯著改善。益心解毒方能夠改善模型動(dòng)物宏觀體征，降低證候積分，同時(shí)改善局部圖像色度，減輕血瘀癥狀。此項(xiàng)結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了模型動(dòng)物體表局部色度改變可以作為證候的評(píng)價(jià)指標(biāo)，而氣虛血瘀對(duì)證治療的效果顯著亦對(duì)Ameriod縮窄環(huán)致小型豬心功能不全氣虛血瘀證的存在進(jìn)行了反證。

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