傅金英，于勝男，徐萌萌，李瑞麗，杜 蕾

(河南中醫(yī)學(xué)院，鄭州 450008)

絕經(jīng)后婦女由于卵巢功能衰退，雌激素分泌減少，機(jī)體出現(xiàn)糖脂代謝紊亂、脂肪分布改變及骨鈣丟失增加，容易患高血壓、冠心病、糖尿病、骨質(zhì)疏松等疾病[1]。我們在生活中發(fā)現(xiàn)，許多女性進(jìn)入中年以后出現(xiàn)腹型肥胖;長期臨床觀察也發(fā)現(xiàn)，中年女性隨著卵巢功能衰退，容易出現(xiàn)脂代謝紊亂，而受腎上腺調(diào)控的皮質(zhì)激素與脂代謝異常及肥胖關(guān)系密切。本實驗采用去卵巢雌鼠模型，通過觀察“坤安煎劑”對去卵巢大鼠體質(zhì)量及血清皮質(zhì)酮水平的影響，驗證卵巢功能衰退后是否會影響腎上腺軸(HPA軸)，并探討中藥對其干預(yù)作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動物及分組

選用SPF級雌性成年Wister大鼠40只，體質(zhì)量200±10 g，由山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司提供(實驗動物質(zhì)量許可證號SCXK(魯)20080002)。實驗室溫度18±3℃，相對濕度70%。

動物適應(yīng)喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為4組:空白組不予任何處理;模型組摘除大鼠雙側(cè)卵巢，術(shù)后7 d給予生理鹽水灌胃，10 ml/kg/次，連續(xù)8周;中藥組摘除大鼠雙側(cè)卵巢，術(shù)后7 d給予中藥“坤安煎劑”灌胃，10 ml/kg/次，相當(dāng)于成人等效劑量的6倍，連續(xù)8周;補(bǔ)佳樂組摘除大鼠雙側(cè)卵巢，術(shù)后7 d給予補(bǔ)佳樂生理鹽水混懸液(0.01 mg/ml)灌胃，10 ml/kg/次，相當(dāng)于成人等效劑量的6倍，連續(xù)8周。

1.2 藥品和試劑

坤安煎劑組成:北沙參15 g，山茱萸15 g，枸杞20 g，地骨皮 15 g，女貞子15 g，旱蓮草 30 g，知母 15 g，黃柏 12 g，黃芪 30 g，茯苓15 g，杜仲20 g，淫羊藿30 g，煅龍骨 30 g，煅牡蠣 30 g，丹參30 g，酸棗仁 30 g，由河南省中醫(yī)院制藥室提供，1 ml相當(dāng)于3.52 g生藥，4℃冰箱保存?zhèn)溆?鹽酸氯胺酮注射液2 ml，0.1 g/支，由福建古田藥業(yè)有限公司提供(生產(chǎn)批號H35020148)。注射用青霉素鈉80萬單位/支，由華北制藥股份有限公司提供(生產(chǎn)批號H13020657);生理鹽水500 ml/瓶，由河南太龍藥業(yè)股份有限公司提供(生產(chǎn)批號H41023506);補(bǔ)佳樂戊酸雌二醇片由法國Delpharm Lille SAS提供(生產(chǎn)批號J20080036);皮質(zhì)酮(CORT)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，由伊萊瑞特生物技術(shù)有限公司提供。

1.3 儀器

AG204型電子天平，動物天平(上海精密儀器儀表有限公司)，80-2型離心機(jī)(上海云樓醫(yī)用儀器廠)，電熱恒溫水浴箱(HI-I·W21·Cu660型上海醫(yī)療器械廠)，－80℃超低溫冰箱(美國)，光學(xué)顯微鏡(上海光學(xué)儀器廠)。

1.4 動物模型復(fù)制

用5%鹽酸氯胺酮注射液將大鼠腹腔注射麻醉(用量100 mg/kg)，切開皮膚及肌肉層1-1.5 cm，找到雙角管狀子宮，沿子宮可找到卵巢，將雙側(cè)卵巢摘除止血，再將牽拉出的輸卵管及子宮輕輕放回腹腔。縫合腹肌和皮膚，術(shù)后肌肉注射青霉素每只每天20萬U，連續(xù)3 d。大鼠摘除卵巢后3 d，逐只進(jìn)行陰道脫落細(xì)胞涂片檢查，每天1次，連續(xù)5 d，顯示動情周期紊亂，證明去卵巢成功。

1.5 大鼠稱重及血清皮質(zhì)酮(CORT)水平測定方法

末次給藥24 h后稱取各大鼠體質(zhì)量。腹腔麻醉后腹主動脈取血5 ml，分離出血清，－80℃保存，用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血清皮質(zhì)酮(CORT)水平，檢測方法嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，組間比較采用單因素方差分析，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

結(jié)果表明，大鼠卵巢切除后體質(zhì)量明顯升高，與空白組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);補(bǔ)佳樂組大鼠體質(zhì)量有降低趨勢，但與模型組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);中藥組大鼠體質(zhì)量明顯降低，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);中藥組與補(bǔ)佳樂組比較體質(zhì)量降低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 各組大鼠體質(zhì)量及血清CORT比較(s)

表1 各組大鼠體質(zhì)量及血清CORT比較(s)

注:與空白組比較:▲P＜0.01;與模型組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與補(bǔ)佳樂組比較:△P＜0.01。

組 別 例數(shù) 體質(zhì)量(g)血清CORT(pg/ml)10 318.70±27.29 102.92± 3.93模 型 組 10 390.88±38.92▲ 205.62± 3.54▲△中 藥 組 10 357.30±36.05* 170.79± 4.36＊＊▲△補(bǔ)佳樂組 10 378.50±24.05▲ 151.52±25.51空白組＊＊▲

大鼠卵巢切除后血清皮質(zhì)酮(CORT)水平明顯升高，與空白組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);中藥組及補(bǔ)佳樂組大鼠血清CORT水平明顯降低，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);中藥組與補(bǔ)佳樂組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。

3 討論

更年期綜合征(Climacteric Syndrome，CS)是臨床常見病、多發(fā)病，是婦女在絕經(jīng)前后因卵巢功能逐漸衰退以致雌激素水平下降所引起的以植物神經(jīng)功能紊亂代謝障礙為主的一系列證候群，屬于中醫(yī)“絕經(jīng)前后諸癥”范疇[2]?！端貑枴ど瞎盘煺嬲摗吩?“……七七任脈虛，太沖脈衰少，天癸竭，地道不通，故形壞而無子也?！敝嗅t(yī)認(rèn)為，婦女49歲左右，腎氣漸衰，天癸將竭，任沖二脈虛衰，腎陰虧虛，陰不斂陽，陽浮于外，陰陽平衡失調(diào)，所以主要表現(xiàn)為腎陰虛，而“陰累及于陽”，致陰陽兩虛影響心、肝、脾等臟，從而發(fā)生一系列的病理變化而引起絕經(jīng)前后諸癥。近期主要表現(xiàn)為潮熱、出汗、心悸、抑郁、失眠等，遠(yuǎn)期可致骨質(zhì)疏松、泌尿生殖道改變、老年癡呆及心血管疾病發(fā)病率增加[3，4]。治療以補(bǔ)腎滋陰為主，兼以溫陽養(yǎng)血、益精填髓。本次研究所用方“坤安煎劑”是導(dǎo)師傅金英教授在基礎(chǔ)研究及大量臨床經(jīng)驗中總結(jié)出的經(jīng)驗方，由經(jīng)方“知柏地黃丸”合“二至丸”加減化裁而來。方中北沙參、知母、黃柏滋陰降火;地骨皮退虛熱;山茱萸、杜仲、枸杞、女貞子、旱蓮草補(bǔ)益肝腎、益精填髓;淫羊藿補(bǔ)腎壯陽;丹參活血化瘀;煅龍骨、煅牡蠣斂汗固精、鎮(zhèn)靜安神;酸棗仁養(yǎng)心安神;黃芪、茯苓益氣健脾。諸藥合用切中病機(jī)，共奏補(bǔ)腎填精、調(diào)理氣血、平衡陰陽之功效。

皮質(zhì)醇(cortisol，CORT)是從腎上腺皮質(zhì)中提取出的對糖類代謝具有最強(qiáng)作用的腎上腺皮質(zhì)激素，屬于糖皮質(zhì)激素的一種，鼠類皮質(zhì)醇含量較少，而以皮質(zhì)酮為主。CORT的分泌水平受HPA軸調(diào)控，HPA軸活性被認(rèn)為與肥胖等的發(fā)生有關(guān)，且CORT可以拮抗生長激素和性激素對外周脂肪組織的作用，促進(jìn)腹部脂肪的堆積，可見中心性脂肪堆積，即腹型肥胖多數(shù)是CORT分泌增加的結(jié)果。Phillips[5]等報道，早晨血皮質(zhì)醇水平升高，并與糖耐量異常、胰島素抵抗、高脂血癥、高血壓相關(guān)，脂肪組織和肝臟皮質(zhì)醇代謝異?？赡茉谥行男头逝趾痛x綜合征發(fā)病中發(fā)揮重要作用。代謝綜合征(metabolic syndrome，MS)為臨床綜合征，包含多方面的要素:腹型肥胖、胰島素抵抗、血脂異常、血壓異常、糖耐量異常等[6]。殷元萬等[7]研究中發(fā)現(xiàn)，代謝綜合征患者午夜血清皮質(zhì)醇水平與腰圍、體質(zhì)量指數(shù)、收縮壓、空腹血糖、甘油三酯呈正相關(guān)，與高密度脂蛋白、膽固醇呈負(fù)相關(guān)。另外，CORT在各種應(yīng)激狀態(tài)下大量釋放，能直接影響糖、蛋白質(zhì)、脂肪等三大營養(yǎng)物質(zhì)代謝，通過“許可作用”保持血管平滑肌對去甲腎上腺素的敏感性，從而對心血管系統(tǒng)產(chǎn)生影響[8]。葉林秀等[9]在冠心病患者唾液皮質(zhì)醇水平與糖代謝狀況的研究中發(fā)現(xiàn)，冠心病患者皮質(zhì)醇水平顯著升高。湯圓圓等[10]研究發(fā)現(xiàn)，急性心肌缺血大鼠CORT含量明顯升高。總之，皮質(zhì)酮水平與血脂代謝紊亂、心血管疾病的發(fā)生密切相關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)，大鼠去卵巢后可引起血清皮質(zhì)酮水平的升高和體質(zhì)量的增加，驗證了我們之前提出的關(guān)于女性絕經(jīng)后由于卵巢功能衰退進(jìn)而影響到HPA軸的一個假說，提示益腎填精中藥“坤安煎劑”可能通過調(diào)節(jié)血清皮質(zhì)酮水平改善去卵巢大鼠血脂代謝紊亂等情況，為臨床研究提供了實驗支持。但連接HPO-HPA軸的紐帶及其機(jī)制尚待進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)。

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