劉萌萌，張根葆，魏 麗，閔志雪

(1.鄭州市第三人民醫(yī)院 病理科,河南 鄭州 450000;2.皖南醫(yī)學院 病理生理學教研室，安徽 蕪湖 241002)

近幾年來,我國甲狀腺癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)是最常見的甲狀腺癌，腫瘤生長相對其他類型較緩慢，瘤細胞分化較好，預后較好，但局部淋巴結(jié)早期轉(zhuǎn)移率高。雖然頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與病死率無關，但相關報道顯示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對長期預后有重要影響[1]。目前，對甲狀腺癌的轉(zhuǎn)移機制尚不清楚。近幾年發(fā)現(xiàn)，腫瘤間質(zhì)是腫瘤細胞賴以生存的“土壤”，是腫瘤-宿主相互作用的微環(huán)境，在腫瘤的生長、侵襲、轉(zhuǎn)移過程中起到尤為重要的作用[2]。

成纖維細胞激活蛋白(fibroblast activation protein，F(xiàn)AP)屬于絲氨酸蛋白酶家族，特異性表達于胚胎間葉組織及上皮癌間質(zhì)的成纖維細胞上，存在于多種惡性上皮性腫瘤的間質(zhì)中，具有內(nèi)肽酶和膠原酶的活性，可以水解基質(zhì)中二肽酶Ⅵ底物、明膠以及Ⅰ型膠原，降解細胞外基質(zhì)，促進腫瘤細胞從原發(fā)部位脫離，具有促遷移、血管生成作用[3]，在腫瘤間質(zhì)的重塑過程中發(fā)揮重要的作用，參與腫瘤的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移。因此其特異性的抑制劑也為腫瘤治療新靶點提供了有前景的參考。但 FAP在 PTC間質(zhì)中是否具有上述作用，具體的病理機制如何仍不十分清楚。本實驗就 FAP 在 PTC間質(zhì)中的表達及其臨床意義進行研究探討。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 收集鄭州市第三人民醫(yī)院病理科2010年1月～2013年10月診斷為甲狀腺乳頭狀癌的標本共66例，男36例，女30例，年齡24～68歲，平均年齡(47.3±8.4)歲。TNM分期，Ⅰ期20例，Ⅱ期22例，Ⅲ期18例，Ⅳ期6例[根據(jù)美國癌癥聯(lián)合會(AJCC)和國際抗癌聯(lián)盟(UICC)甲狀腺癌第七版分期]。區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性20例，陰性46例。10例正常甲狀腺組織作為對照。所有標本均經(jīng)4%中性甲醛固定，石蠟包埋，切片。常規(guī)行蘇木精-伊紅染色，普通鏡檢。

1.2 主要試劑 通用型SP法檢測試劑盒(福州邁新生物制劑有限公司)，兔抗人FAP多克隆抗體(Abcam公司)。

1.3 免疫組織化學染色 采用免疫組織化學SP法，主要步驟為切片脫蠟至水，切片在室溫下經(jīng)3% H2O2封閉內(nèi)源性過氧化物酶30 min；一抗FAP(濃度1∶100)室溫孵育1 h；標記二抗室溫孵育20 min，DAB顯色，蘇木素復染，脫水透明，中性樹膠封固。

1.4 免疫組織化學結(jié)果判定 免疫反應性：在高倍鏡下觀察，無陽性細胞記為0分，陽性細胞少于10%記為1分，10%～50%記為2分，50%～100%記為3分。染色強度：無染色記為0分；400倍鏡下染色明顯記為1分；100倍鏡下染色明顯，40倍鏡下染色不明顯記為2分；40倍鏡下染色明顯記為3分。免疫反應性和染色強度相加得到染色指數(shù)：0分為無表達(-)，1～2分為低表達(+)，3～4分為中表達()，5～6分為高表達()。為了避免誤差，由兩位有經(jīng)驗的病理診斷醫(yī)師雙盲判定結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計學處理 應用統(tǒng)計軟件SSPS 16.0進行定性資料的χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 FAP在甲狀腺乳頭狀癌中的表達 FAP在正常甲狀腺間質(zhì)及PTC癌細胞中不表達；在甲狀腺乳頭狀癌周圍間質(zhì)成纖維細胞胞漿中表達，呈棕黃色(見圖1，A、B、C的FAP表達分別為弱陽性、陽性和強陽性)。在66例甲狀腺乳頭狀癌標本中，57例表達FAP，陽性率為86.36%。

2.2 與臨床病理特征的關系 如表1所示，TNM分期為Ⅰ期病人FAP表達多為弱表達，陽性率為50%；Ⅱ期病人FAP表達多為弱表達和中表達，陽性率為91%；Ⅲ期病人 FAP 表達多為中表達，陽性率為94%；Ⅳ期病人FAP表達多為強表達，陽性率為100%。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的 PTC 間質(zhì)中 FAP 表達陽性率分別為95%和57%，其中前者多為中～強表達，而后者多為弱～中表達(表2)。由此可見，隨著甲狀腺惡性程度的增強，F(xiàn)AP 表達逐漸增強，同時統(tǒng)計結(jié)果顯示 FAP 表達與TNM分期(χ2=20.823，P<0．01，見表1)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(χ2=11.853，P<0．01，見表2)有關。提示 FAP 的表達與甲狀腺乳頭狀癌侵襲和轉(zhuǎn)移有關。

A：弱陽性 B:陽性 C:強陽性

圖1 FAP在甲狀腺乳頭狀癌中的表達

Fig 1 Expression of FAP in stromal fibroblasts of PTC

表1 甲狀腺乳頭狀癌中FAP表達與TNM分期的關系

Tab l Relationship between FAP protein expression and TNM in PTC

TNM分期例數(shù)FAP表達-+ χ2值P值Ⅰ期206104020．823<0．001Ⅱ期222884Ⅲ期181278Ⅳ期60114

表2 甲狀腺乳頭狀癌中FAP表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關系

Tab 2 Relationship between FAP protein expression and lymph node metastasis in PTC

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移例數(shù)FAP表達-+ χ2值P值陽性20128911．853<0．001陰性46819127

3 討論

近幾年發(fā)現(xiàn)，腫瘤間質(zhì)是腫瘤細胞賴以生存的“土壤”，是腫瘤-宿主相互作用的微環(huán)境，在腫瘤的生長、侵襲、轉(zhuǎn)移過程中起到尤為重要的作用[2]。隨著腫瘤的進展，F(xiàn)AP表達增多、降解ECM的能力增強，導致ECM重塑以至基底膜被破壞，為腫瘤細胞的遷移打開通道，最終腫瘤細胞沿著ECM間隙和基底膜缺損向遠處侵襲生長、轉(zhuǎn)移[4-5]。

本實驗通過采用免疫組織化學 SP 法檢測了FAP在PTC和正常甲狀腺組織間質(zhì)中的表達，并探討其可能機制。研究結(jié)果顯示 FAP在甲狀腺乳頭狀癌間質(zhì)中成纖維細胞中表達，陽性率為 86.36%；而在正常甲狀腺間質(zhì)中不表達。甲狀腺乳頭狀癌間質(zhì)中 FAP 表達與腫瘤 TNM 分期 (χ2=20.823，P<0.01 ) 及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 (χ2=11.853，P<0.01) 有關。隨著甲狀腺惡性程度和侵襲能力的增強，PTC間質(zhì)中FAP表達增強，提示了FAP的表達參與促纖維增生性間質(zhì)反應[6]，與甲狀腺乳頭狀癌的演進有一定關系，提示PTC間質(zhì)中FAP的表達與甲狀腺乳頭狀癌的侵襲、轉(zhuǎn)移有關。

FAP可選擇性地表達于90%以上的惡性上皮腫瘤(肺癌、乳腺癌、大腸癌、胃癌、卵巢癌、前列腺癌等)和某些肉瘤的間質(zhì)中激活的成纖維細胞，而在良性腫瘤和大部分正常成熟組織不表達，腫瘤細胞的生長和轉(zhuǎn)移涉及細胞的粘附、遷移和EMC的降解，而FAP具有溶解明膠變性的Ⅰ型和Ⅲ型膠原的活性，因此FAP可能在降解EMC蛋白、細胞的粘附、遷移中起著顯著的作用。FAP還是黑色素瘤形成的不同階段的間質(zhì)細胞增生的標記，臨床研究也表明，腫瘤間質(zhì)高表達FAP的結(jié)腸癌病人更容易出現(xiàn)病灶轉(zhuǎn)移及復發(fā)的可能性[3]。FAP可能通過不同的途徑在甲狀腺乳頭狀癌的ECM重塑過程中起“tilling the soil”作用。FAP可以直接溶解與其臨近的細胞外基質(zhì)或激活另一種蛋白酶原間接溶解EMC;解離與基質(zhì)蛋白結(jié)合的生長因子，使之發(fā)揮促生長作用；FAP可以與CD26、整合蛋白α3β1及尿激酶型纖維蛋白酶原激活劑(uPAR)形成膜復合物[7]，參與黑色素細胞瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移，因此推測甲狀腺乳頭狀癌中FAP可能通過形成膜復合物增加成纖維細胞的粘附性、遷移性和侵襲性，使成纖維細胞募集到腫瘤區(qū)域，參與ECM重建。Aimes等報道TGF-β1和FAP共同參與肺腺癌、宮頸癌及子宮內(nèi)膜癌腫瘤間質(zhì)的重建[8]，Cai F等報道FAP可能通過促血管生成參與胃癌、宮頸癌、乳腺癌的生長和組織的重建，因此FAP也可能通過促進血管生成參與甲狀腺乳頭狀癌生長、侵襲及局部轉(zhuǎn)移[9]。林靜報道[10]腫瘤間質(zhì)的侵襲特性可隨著上皮癌變而同步激活，口腔癌相關成纖維細胞(CAFs)能特異性地促進FAP及MMP-2蛋白表達，參與腫瘤細胞外基質(zhì)的重建并促進腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移。由此可見，F(xiàn)AP可能通過多種途徑參與了甲狀腺乳頭狀癌的生長、轉(zhuǎn)移、侵襲及間質(zhì)的重塑?？傊現(xiàn)AP的表達以某些通路促進腫瘤的生長。

綜上所述，F(xiàn)AP特異性表達在甲狀腺乳頭狀癌間質(zhì)成纖維細胞中，且與TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關，PTC間質(zhì)中FAP的表達對 PTC 的侵襲、轉(zhuǎn)移具有較好的預測價值。FAP也有望成為治療甲狀腺乳頭狀癌的新靶點，但有關FAP基因在甲狀腺癌中的具體作用機制，仍需進行進一步地深入研究。

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