穆天慧

摘要：目的建立高效液相色譜法測定養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）中丹皮酚的含量方法。方法色譜柱為依利特-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動相：乙腈-水-冰醋酸（33∶67∶1.5）；流速：1.0 mL.min-1；檢測波長：274 nm。結(jié)果丹皮酚的濃度在0.2001～1.6008 μg.mL-1范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（r=0.9991，n=5），平均回收率102.9﹪，RSD為1.19%。結(jié)論本法準確、快速，簡便可靠，結(jié)果穩(wěn)定，可用于養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）中丹皮酚的含量測定。

關(guān)鍵詞：HPLC法；養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）；丹皮酚；含量測定

中圖分類號：R284.2文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2014）03-0051-02

養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）由牡丹皮、地黃、玄參、白芍等8味中藥組成，具有養(yǎng)陰潤肺，淸熱利咽的作用，用于咽喉干燥疼痛。其中牡丹皮具有淸熱涼血，活血化瘀的功效[1]，主要成分為丹皮酚。養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）現(xiàn)行質(zhì)量標準為國家藥品監(jiān)督管理局標準（試行）（YBZ27812005）[2]，其丹皮酚含量測定為蒸餾-紫外分光光度法。本實驗選擇丹皮酚為指標，用HPLC法對養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）進行含量測定。

1儀器與試劑

戴安HPLC SUMMIT 系統(tǒng)高效液相色譜儀（P680泵，ASI-100自動進樣器，柱溫箱，UltiMate 3000紫外檢測器，Chromeleon化學工作站），超聲波淸洗儀（中船七院七二六所），塞多利斯 CP324S 電子天平。丹皮酚對照品（110708-200506，中國藥品生物制品檢定所）。甲醇為色譜純，乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，冰醋酸為分析純。養(yǎng)陰淸肺口服液（批號20121001，20121002，20121003呼倫貝爾松鹿制藥有限公司 規(guī)格：每支裝10 mL）。

2實驗方法

2.1色譜條件色譜柱為依利特-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動相：乙腈-水-冰醋酸（33∶67∶2）；流速：1.0 mL.min-1；柱溫：30℃；檢測波長：274 nm；進樣量：10 μL。丹皮酚的保留時間約為12.83 min。丹皮酚對照品、供試品及陰性樣品的色譜圖見圖1。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備精密稱取丹皮酚對照品20.01 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，再精密量取1 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得0.04 002 mg.mL-1丹皮酚對照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備取養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）5支，混勻，精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇適量搖勻，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.2.3陰性樣品溶液的制備按處方比例及制法，制得除牡丹皮的陰性樣品。取相當于供試品的量，按供試品溶液的制備方法制成陰性樣品溶液。

3實驗結(jié)果

3.1線性實驗吸取2.2.1項下對照品溶液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾。分別精密吸取5，10，15，20，25 μL進樣，以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸。結(jié)果表明，丹皮酚的濃度在0.2001～1.6008 μg.mL-1 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，y=4.9736+28.6344x，r=0.9991（n=5）。

3.2精密度實驗精密吸取2.2.1項下對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣6次，測得丹皮酚的峰面積y分別為18.3117，18.3704，18.3499，18.2943，18.3816，18.3714。RSD為0.19%。表明所選色譜條件系統(tǒng)穩(wěn)定。

3.3空白實驗吸取2.2.3項下陰性樣品溶液，經(jīng)0.45 μ m 微孔濾膜過濾，精密吸取10 μ L，注入液相色譜儀，結(jié)果，在對照品和供試品色譜相應的保留時間，陰性樣品無色譜峰，表明陰性樣品不干擾測定，色譜圖見圖1。

3.4穩(wěn)定性實驗取同一樣品，按照2.2.2項下制備，分別在0，4，8，12 h測定峰面積為19.0357，19.1021，19.2214，19.3578，RSD為0.74%，說明丹皮酚甲醇溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

3.5重復性實驗取同一批樣品（批號：20121001）4份，按2.2.2項下制備，測定丹皮酚的含量，其含量的RSD為0.17%。

3.6加樣回收率實驗取已知含量的養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）（批號：20121001）4份，精密量取5 mL，置25 mL容量瓶中，分別加入不同濃度丹皮酚對照品溶液，加入甲醇溶液并稀釋至刻度，混勻。測得丹皮酚的回收率見表1。

4.1檢測波長的選擇文獻報到，檢測波長大多采用274 nm。取丹皮酚對照品溶液進行紫外可見光波段掃描（200～900 nm）掃描，結(jié)果在274 nm處有最大吸收，故選用274 nm作為檢測波長。

4.2流動相的考察根據(jù)文獻資料報道，當流動相比例為甲醇-水（75：25）[3]和乙腈-水-冰醋酸（33∶67∶2）[4]下都能出峰，而在反復驗證下，在本實驗環(huán)境下，乙腈-水-冰醋酸（33∶67∶1.5）時，出峰的保留時間合適，分離效果比較好，所以本實驗的流動相比例為乙腈-水-冰醋酸（33∶67∶1.5）。

4.3不同提取方法的考察取同一批號的樣品，分別采用水蒸氣蒸餾法，有機溶劑提取法，直接加甲醇溶劑定量稀釋法，按樣品測定法測定含量，含量幾無差別，故采用甲醇溶劑定量稀釋法。

4.4不同溶劑的考察采用甲醇、無水乙醇、95%乙醇為溶劑，按樣品測定方法測定，含量分別為0.415 mg/mL、0.387 mg/mL、0.382 mg/mL，表明甲醇為溶劑效果好。

5結(jié)論

該方法準確、快速，簡便可靠，結(jié)果穩(wěn)定，可用于養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）的含量測定。

參考文獻：

[1]中華人民共和國國家藥典委員會.中國藥典[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：160.

[2]國家藥品監(jiān)督管理局標準（試行）（YBZ27812005）.

[3]李健，陳妍，徐金波.液相色譜法測定養(yǎng)陰淸肺顆粒中丹皮酚的含量[J].天津中醫(yī)藥，2004，21（1）：72-73.

[4]趙剛，李月霞，吳貴華.反相高效液相色譜法測定養(yǎng)陰淸肺丸中丹皮酚的含量[J].天津藥學，2005，17（5）：14-15.endprint

摘要：目的建立高效液相色譜法測定養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）中丹皮酚的含量方法。方法色譜柱為依利特-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動相：乙腈-水-冰醋酸（33∶67∶1.5）；流速：1.0 mL.min-1；檢測波長：274 nm。結(jié)果丹皮酚的濃度在0.2001～1.6008 μg.mL-1范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（r=0.9991，n=5），平均回收率102.9﹪，RSD為1.19%。結(jié)論本法準確、快速，簡便可靠，結(jié)果穩(wěn)定，可用于養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）中丹皮酚的含量測定。

關(guān)鍵詞：HPLC法；養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）；丹皮酚；含量測定

中圖分類號：R284.2文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2014）03-0051-02

養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）由牡丹皮、地黃、玄參、白芍等8味中藥組成，具有養(yǎng)陰潤肺，淸熱利咽的作用，用于咽喉干燥疼痛。其中牡丹皮具有淸熱涼血，活血化瘀的功效[1]，主要成分為丹皮酚。養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）現(xiàn)行質(zhì)量標準為國家藥品監(jiān)督管理局標準（試行）（YBZ27812005）[2]，其丹皮酚含量測定為蒸餾-紫外分光光度法。本實驗選擇丹皮酚為指標，用HPLC法對養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）進行含量測定。

1儀器與試劑

戴安HPLC SUMMIT 系統(tǒng)高效液相色譜儀（P680泵，ASI-100自動進樣器，柱溫箱，UltiMate 3000紫外檢測器，Chromeleon化學工作站），超聲波淸洗儀（中船七院七二六所），塞多利斯 CP324S 電子天平。丹皮酚對照品（110708-200506，中國藥品生物制品檢定所）。甲醇為色譜純，乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，冰醋酸為分析純。養(yǎng)陰淸肺口服液（批號20121001，20121002，20121003呼倫貝爾松鹿制藥有限公司 規(guī)格：每支裝10 mL）。

2實驗方法

2.1色譜條件色譜柱為依利特-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動相：乙腈-水-冰醋酸（33∶67∶2）；流速：1.0 mL.min-1；柱溫：30℃；檢測波長：274 nm；進樣量：10 μL。丹皮酚的保留時間約為12.83 min。丹皮酚對照品、供試品及陰性樣品的色譜圖見圖1。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備精密稱取丹皮酚對照品20.01 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，再精密量取1 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得0.04 002 mg.mL-1丹皮酚對照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備取養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）5支，混勻，精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇適量搖勻，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.2.3陰性樣品溶液的制備按處方比例及制法，制得除牡丹皮的陰性樣品。取相當于供試品的量，按供試品溶液的制備方法制成陰性樣品溶液。

3實驗結(jié)果

3.1線性實驗吸取2.2.1項下對照品溶液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾。分別精密吸取5，10，15，20，25 μL進樣，以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸。結(jié)果表明，丹皮酚的濃度在0.2001～1.6008 μg.mL-1 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，y=4.9736+28.6344x，r=0.9991（n=5）。

3.2精密度實驗精密吸取2.2.1項下對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣6次，測得丹皮酚的峰面積y分別為18.3117，18.3704，18.3499，18.2943，18.3816，18.3714。RSD為0.19%。表明所選色譜條件系統(tǒng)穩(wěn)定。

3.3空白實驗吸取2.2.3項下陰性樣品溶液，經(jīng)0.45 μ m 微孔濾膜過濾，精密吸取10 μ L，注入液相色譜儀，結(jié)果，在對照品和供試品色譜相應的保留時間，陰性樣品無色譜峰，表明陰性樣品不干擾測定，色譜圖見圖1。

3.4穩(wěn)定性實驗取同一樣品，按照2.2.2項下制備，分別在0，4，8，12 h測定峰面積為19.0357，19.1021，19.2214，19.3578，RSD為0.74%，說明丹皮酚甲醇溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

3.5重復性實驗取同一批樣品（批號：20121001）4份，按2.2.2項下制備，測定丹皮酚的含量，其含量的RSD為0.17%。

3.6加樣回收率實驗取已知含量的養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）（批號：20121001）4份，精密量取5 mL，置25 mL容量瓶中，分別加入不同濃度丹皮酚對照品溶液，加入甲醇溶液并稀釋至刻度，混勻。測得丹皮酚的回收率見表1。

4.1檢測波長的選擇文獻報到，檢測波長大多采用274 nm。取丹皮酚對照品溶液進行紫外可見光波段掃描（200～900 nm）掃描，結(jié)果在274 nm處有最大吸收，故選用274 nm作為檢測波長。

4.2流動相的考察根據(jù)文獻資料報道，當流動相比例為甲醇-水（75：25）[3]和乙腈-水-冰醋酸（33∶67∶2）[4]下都能出峰，而在反復驗證下，在本實驗環(huán)境下，乙腈-水-冰醋酸（33∶67∶1.5）時，出峰的保留時間合適，分離效果比較好，所以本實驗的流動相比例為乙腈-水-冰醋酸（33∶67∶1.5）。

4.3不同提取方法的考察取同一批號的樣品，分別采用水蒸氣蒸餾法，有機溶劑提取法，直接加甲醇溶劑定量稀釋法，按樣品測定法測定含量，含量幾無差別，故采用甲醇溶劑定量稀釋法。

4.4不同溶劑的考察采用甲醇、無水乙醇、95%乙醇為溶劑，按樣品測定方法測定，含量分別為0.415 mg/mL、0.387 mg/mL、0.382 mg/mL，表明甲醇為溶劑效果好。

5結(jié)論

該方法準確、快速，簡便可靠，結(jié)果穩(wěn)定，可用于養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）的含量測定。

參考文獻：

[1]中華人民共和國國家藥典委員會.中國藥典[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：160.

[2]國家藥品監(jiān)督管理局標準（試行）（YBZ27812005）.

[3]李健，陳妍，徐金波.液相色譜法測定養(yǎng)陰淸肺顆粒中丹皮酚的含量[J].天津中醫(yī)藥，2004，21（1）：72-73.

[4]趙剛，李月霞，吳貴華.反相高效液相色譜法測定養(yǎng)陰淸肺丸中丹皮酚的含量[J].天津藥學，2005，17（5）：14-15.endprint

摘要：目的建立高效液相色譜法測定養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）中丹皮酚的含量方法。方法色譜柱為依利特-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動相：乙腈-水-冰醋酸（33∶67∶1.5）；流速：1.0 mL.min-1；檢測波長：274 nm。結(jié)果丹皮酚的濃度在0.2001～1.6008 μg.mL-1范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（r=0.9991，n=5），平均回收率102.9﹪，RSD為1.19%。結(jié)論本法準確、快速，簡便可靠，結(jié)果穩(wěn)定，可用于養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）中丹皮酚的含量測定。

關(guān)鍵詞：HPLC法；養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）；丹皮酚；含量測定

中圖分類號：R284.2文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2014）03-0051-02

養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）由牡丹皮、地黃、玄參、白芍等8味中藥組成，具有養(yǎng)陰潤肺，淸熱利咽的作用，用于咽喉干燥疼痛。其中牡丹皮具有淸熱涼血，活血化瘀的功效[1]，主要成分為丹皮酚。養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）現(xiàn)行質(zhì)量標準為國家藥品監(jiān)督管理局標準（試行）（YBZ27812005）[2]，其丹皮酚含量測定為蒸餾-紫外分光光度法。本實驗選擇丹皮酚為指標，用HPLC法對養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）進行含量測定。

1儀器與試劑

戴安HPLC SUMMIT 系統(tǒng)高效液相色譜儀（P680泵，ASI-100自動進樣器，柱溫箱，UltiMate 3000紫外檢測器，Chromeleon化學工作站），超聲波淸洗儀（中船七院七二六所），塞多利斯 CP324S 電子天平。丹皮酚對照品（110708-200506，中國藥品生物制品檢定所）。甲醇為色譜純，乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，冰醋酸為分析純。養(yǎng)陰淸肺口服液（批號20121001，20121002，20121003呼倫貝爾松鹿制藥有限公司 規(guī)格：每支裝10 mL）。

2實驗方法

2.1色譜條件色譜柱為依利特-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動相：乙腈-水-冰醋酸（33∶67∶2）；流速：1.0 mL.min-1；柱溫：30℃；檢測波長：274 nm；進樣量：10 μL。丹皮酚的保留時間約為12.83 min。丹皮酚對照品、供試品及陰性樣品的色譜圖見圖1。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備精密稱取丹皮酚對照品20.01 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，再精密量取1 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得0.04 002 mg.mL-1丹皮酚對照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備取養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）5支，混勻，精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇適量搖勻，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.2.3陰性樣品溶液的制備按處方比例及制法，制得除牡丹皮的陰性樣品。取相當于供試品的量，按供試品溶液的制備方法制成陰性樣品溶液。

3實驗結(jié)果

3.1線性實驗吸取2.2.1項下對照品溶液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾。分別精密吸取5，10，15，20，25 μL進樣，以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸。結(jié)果表明，丹皮酚的濃度在0.2001～1.6008 μg.mL-1 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，y=4.9736+28.6344x，r=0.9991（n=5）。

3.2精密度實驗精密吸取2.2.1項下對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣6次，測得丹皮酚的峰面積y分別為18.3117，18.3704，18.3499，18.2943，18.3816，18.3714。RSD為0.19%。表明所選色譜條件系統(tǒng)穩(wěn)定。

3.3空白實驗吸取2.2.3項下陰性樣品溶液，經(jīng)0.45 μ m 微孔濾膜過濾，精密吸取10 μ L，注入液相色譜儀，結(jié)果，在對照品和供試品色譜相應的保留時間，陰性樣品無色譜峰，表明陰性樣品不干擾測定，色譜圖見圖1。

3.4穩(wěn)定性實驗取同一樣品，按照2.2.2項下制備，分別在0，4，8，12 h測定峰面積為19.0357，19.1021，19.2214，19.3578，RSD為0.74%，說明丹皮酚甲醇溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

3.5重復性實驗取同一批樣品（批號：20121001）4份，按2.2.2項下制備，測定丹皮酚的含量，其含量的RSD為0.17%。

3.6加樣回收率實驗取已知含量的養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）（批號：20121001）4份，精密量取5 mL，置25 mL容量瓶中，分別加入不同濃度丹皮酚對照品溶液，加入甲醇溶液并稀釋至刻度，混勻。測得丹皮酚的回收率見表1。

4.1檢測波長的選擇文獻報到，檢測波長大多采用274 nm。取丹皮酚對照品溶液進行紫外可見光波段掃描（200～900 nm）掃描，結(jié)果在274 nm處有最大吸收，故選用274 nm作為檢測波長。

4.2流動相的考察根據(jù)文獻資料報道，當流動相比例為甲醇-水（75：25）[3]和乙腈-水-冰醋酸（33∶67∶2）[4]下都能出峰，而在反復驗證下，在本實驗環(huán)境下，乙腈-水-冰醋酸（33∶67∶1.5）時，出峰的保留時間合適，分離效果比較好，所以本實驗的流動相比例為乙腈-水-冰醋酸（33∶67∶1.5）。

4.3不同提取方法的考察取同一批號的樣品，分別采用水蒸氣蒸餾法，有機溶劑提取法，直接加甲醇溶劑定量稀釋法，按樣品測定法測定含量，含量幾無差別，故采用甲醇溶劑定量稀釋法。

4.4不同溶劑的考察采用甲醇、無水乙醇、95%乙醇為溶劑，按樣品測定方法測定，含量分別為0.415 mg/mL、0.387 mg/mL、0.382 mg/mL，表明甲醇為溶劑效果好。

5結(jié)論

該方法準確、快速，簡便可靠，結(jié)果穩(wěn)定，可用于養(yǎng)陰淸肺口服液（無糖型）的含量測定。

參考文獻：

[1]中華人民共和國國家藥典委員會.中國藥典[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：160.

[2]國家藥品監(jiān)督管理局標準（試行）（YBZ27812005）.

[3]李健，陳妍，徐金波.液相色譜法測定養(yǎng)陰淸肺顆粒中丹皮酚的含量[J].天津中醫(yī)藥，2004，21（1）：72-73.

[4]趙剛，李月霞，吳貴華.反相高效液相色譜法測定養(yǎng)陰淸肺丸中丹皮酚的含量[J].天津藥學，2005，17（5）：14-15.endprint