李楊，聞京偉，蔣登高，郭毅（.河南省食品藥品檢驗(yàn)所，鄭州450003；.鄭州大學(xué)化工與能源學(xué)院，鄭州 45000）

苯妥英鈉（Phenytoin sodium）主要作為癲癇大發(fā)作的首選藥物，在空氣中會(huì)漸漸吸收二氧化碳分解成苯妥英；其水溶液顯堿性反應(yīng)，常因發(fā)生部分水解而產(chǎn)生渾濁[1]；且筆者根據(jù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該藥在酸性溶液和在pH 9.6以下的緩沖液中均產(chǎn)生沉淀。該藥臨床使用個(gè)體差異大，治療濃度范圍窄（有效血藥濃度10～20 μg/ml）[2]，據(jù)醫(yī)院臨床血藥濃度監(jiān)測(cè)人員反映，不同廠家、不同批次的苯妥英鈉片在同一患者體內(nèi)的血藥達(dá)峰濃度和時(shí)間均不一樣，患者在更換藥品廠家和批號(hào)時(shí)常出現(xiàn)不良反應(yīng)?？梢?，該藥在各廠家各批次之間有顯著差異，進(jìn)行溶出度的考察很有必要。

2010年版《中國藥典》（二部）中以水作為溶出介質(zhì)考察苯妥英鈉的溶出度[1]，但由前所述苯妥英鈉的性質(zhì)可知，其在水中不穩(wěn)定；筆者經(jīng)過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，對(duì)照品水溶液在短時(shí)間內(nèi)吸光度就有明顯下降，因此，這對(duì)大批量檢驗(yàn)十分不便；此外，水對(duì)不同廠家片劑的區(qū)分作用也比較差。在日本橙皮書中并未收載該藥的溶出行為，其所常用的幾種介質(zhì)也均偏酸性，均可使該藥產(chǎn)生沉淀，無法測(cè)定，即使嘗試加入表面活性劑和模擬人工胃液后也同樣產(chǎn)生沉淀。為了更好地區(qū)分藥品的溶出行為，以及使其在溶出介質(zhì)中性質(zhì)更穩(wěn)定，不在短時(shí)間內(nèi)降解，筆者決定采用pH 10.0的緩沖液（硼砂-氫氧化鈉）為溶出介質(zhì)，對(duì)苯妥英鈉片進(jìn)行溶出度評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，建立的方法區(qū)分作用強(qiáng)，并且使溶液更加穩(wěn)定。本試驗(yàn)中，筆者根據(jù)醫(yī)院推薦得知某知名企業(yè)S藥廠生產(chǎn)的產(chǎn)品效果最佳，決定以該廠產(chǎn)品作為參比制劑進(jìn)行以下試驗(yàn)。

1 材料

1.1 儀器

UV-2550紫外分光光度測(cè)定儀（日本島津公司）；FOPT-601FX光纖藥物溶出儀（上海富科思生物技術(shù)發(fā)展有限公司）；ZKT-18F真空脫氣儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）。

1.2 藥品與試劑

苯妥英鈉對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100210-201002，純度：98.6%）；苯妥英鈉片（國內(nèi)12家藥廠生產(chǎn)產(chǎn)品，廠家編號(hào)為A～L，產(chǎn)品共247批，規(guī)格分別為：每片50、100 mg）；參比制劑苯妥英鈉片（S藥廠，批號(hào)：043120302，規(guī)格：每片50 mg）。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備

分別取苯妥英鈉對(duì)照品40 mg兩份，精密稱定，分別置于兩個(gè)200 ml量瓶中，用水和pH 10.0緩沖液（0.05 mol/L硼砂50 ml和0.2 mol/L氫氧化鈉溶液43 ml混合，稀釋至200 ml）分別溶解并稀釋至刻度，得兩種溶出介質(zhì)的對(duì)照品溶液。

2.2 測(cè)定條件

光纖溶出儀測(cè)定；測(cè)定間隔：60 s；探頭規(guī)格：5 mm；檢測(cè)波長(zhǎng)：258 nm，參比波長(zhǎng)：550 nm[3]；溶出時(shí)間：60 min。

2.3 溶出條件的選擇

2.3.1 方法、轉(zhuǎn)速及溶出介質(zhì)體積。根據(jù)2010年版《中國藥典》方法[1]，仍采用槳法；為了更好地體現(xiàn)區(qū)分作用，轉(zhuǎn)速擬定為50 r/min；由于采用了5 mm的探頭，為了使吸光度在0.3～0.7內(nèi)，溶出介質(zhì)體積采用500 ml。

2.3.2 溶出曲線考察比較。取12個(gè)廠家中具有代表性的100批樣品，分別以水和pH 10.0緩沖液為溶出介質(zhì)進(jìn)行溶出度考察，繪制溶出曲線，并與參比制劑進(jìn)行比較，見圖1。

溶出曲線與參比制劑相似的產(chǎn)品，才有可能在體內(nèi)具有與參比制劑相似的功效。因此，能夠最大限度地區(qū)分各個(gè)產(chǎn)品之間的差異的溶出介質(zhì)則為最理想溶出介質(zhì)?？疾煜嗨菩缘姆椒ㄒ话悴捎孟嗨埔蜃樱╢2）法：

式中，Rt和Tt分別代表參比制劑和受試制劑第t時(shí)間點(diǎn)的平均累積釋放度，n為測(cè)試點(diǎn)數(shù)。

以受試制劑和參比制劑各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的溶出量的差值為統(tǒng)計(jì)量進(jìn)行分析，判斷標(biāo)準(zhǔn)（條件：任一溶出點(diǎn)平均差異限度不大于10%）：f2小于50，兩條溶出曲線不相似；f2界于50～100，可認(rèn)為兩條溶出曲線相似。

結(jié)果，除去抽驗(yàn)中一些生產(chǎn)批數(shù)少和批號(hào)重復(fù)等部分不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的廠家，選取了國內(nèi)3家產(chǎn)量大的藥廠L、H、F，比較情況見表1。

由表1結(jié)果可知，L廠家產(chǎn)品與參比制劑在兩種介質(zhì)中最為相似，f2分別達(dá)到了78、100；而F廠家產(chǎn)品在水中f2為23，在緩沖液中卻全部不相似；H廠家產(chǎn)品在緩沖液中也較在水中的f2更低?？梢?，pH 10.0的緩沖液區(qū)分作用明顯，多數(shù)在水中與參比制劑相似的產(chǎn)品，在緩沖液中體現(xiàn)出了差異。據(jù)此，可推測(cè)用pH 10.0的緩沖液作為溶出介質(zhì)比水對(duì)苯妥英鈉片溶出量的鑒別力更強(qiáng)。

2.3.3 溶出介質(zhì)的選擇。根據(jù)上述溶出曲線的考察和相似性比較的結(jié)果，決定采用pH 10.0緩沖液為溶出介質(zhì)。

2.3.4 限度的確定。根據(jù)溶出度檢測(cè)要求的規(guī)定，如果第1次出現(xiàn)相鄰的2個(gè)點(diǎn)溶出量均達(dá)到85%以上，且二者的平均值的差值在5%以內(nèi)，則第1個(gè)點(diǎn)即為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的取樣點(diǎn)。參比制劑在30、31 min時(shí)溶出量均達(dá)到100%，最終選擇30 min作為取樣點(diǎn)。該點(diǎn)的溶出量為100%，減去15%，可得溶出限度Q為85%[4]。取全國抽驗(yàn)的247批產(chǎn)品進(jìn)行光纖溶出測(cè)定后，驗(yàn)證得該時(shí)間點(diǎn)和限度的要求有效、可行。

2.4 含量測(cè)定方法

2.4.1 專屬性試驗(yàn)。取已知處方的苯妥英鈉片生產(chǎn)廠家的輔料按照處方配制成樣品再按供試品溶液制備方法制備，在本試驗(yàn)條件下檢測(cè)，結(jié)果輔料在258 nm波長(zhǎng)處的吸光度為0.01～0.04，供試品溶液在258 nm波長(zhǎng)處的吸光度為0.5～0.75，可見輔料對(duì)本方法測(cè)定未見影響，方法專屬性良好。

圖1 不同廠家樣品在兩種溶出介質(zhì)中的溶出曲線比較Fig 1 Comparison of dissolution curves of samples from different manufacturers in 2 dissolution mediums

表1 各廠家產(chǎn)品在兩種介質(zhì)中的相似性考察Tab 1 Similarities assessment of samples from different manufacturers in 2 dissolution mediums

2.4.2 線性關(guān)系考察。精密稱取苯妥英鈉對(duì)照品約32 mg，置于50 ml量瓶中，加pH 10.0緩沖液溶解并稀釋至刻度，搖勻得貯備液。精密量取貯備液置于量瓶中，加緩沖液稀釋至刻度，搖勻，分別配制質(zhì)量濃度為0.032、0.064、0.080、0.160、0.192、0.320 mg/ml的系列溶液，于258 nm波長(zhǎng)處測(cè)定。以質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)、吸光度（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為y＝3.3706x－0.0045（r＝0.9999），結(jié)果表明苯妥英鈉檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為0.032～0.320 mg/ml。

2.4.3 重復(fù)性試驗(yàn)。取“2.4.2”項(xiàng)下溶液（0.192 mg/ml），重復(fù)測(cè)定6次，結(jié)果吸光度的RSD＝0.2%（n＝6）。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)。取某批樣品配制成供試品溶液（溶劑為pH 10.0的緩沖液）后分別在0、1、2、4、8、24 h測(cè)定吸光度，結(jié)果吸光度的RSD＝0.3%（n＝6），表明苯妥英鈉在pH 10.0的緩沖液中24 h內(nèi)穩(wěn)定性很好。

2.4.5 耐用性試驗(yàn)。更換紫外分光光度計(jì)，由3名不同人員測(cè)定同一供試品溶液，測(cè)得吸光度的RSD＝0.3%（n＝3），可見方法耐用性好。

2.4.6 回收率試驗(yàn)。分別精密稱取苯妥英鈉對(duì)照品及輔料置于200 ml量瓶中，制備質(zhì)量濃度為0.10、0.15、0.20 mg/ml的溶液各3份，測(cè)定吸光度，計(jì)算得回收率，見表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝3）Tab 2Results of recovery tests（n＝3）

2.5 在pH 10.0的緩沖液與水溶液中穩(wěn)定性比較

在進(jìn)行pH 10.0的緩沖液的穩(wěn)定性試驗(yàn)時(shí)，同時(shí)配制水溶液，平行做穩(wěn)定性試驗(yàn)，分別在0、1、2、4、8、24 h測(cè)定吸光度。結(jié)果吸光度分別為 0.674、0.667、0.660、0.651、0.648、0.621，RSD＝2.9%（n＝6）?？梢娕cpH 10.0的緩沖液相比，苯妥英鈉水溶液的穩(wěn)定性較差，苯妥英鈉分解較快。

2.6 測(cè)定結(jié)果

取抽樣量較大的3家企業(yè)樣品采用《中國藥典》方法和本方法的測(cè)定結(jié)果見表3。

由表3結(jié)果可見，取全國12個(gè)廠家247批樣品按照建立的方法測(cè)定溶出度，結(jié)果不合格率為8.1%；而按《中國藥典》方法檢測(cè)的結(jié)果卻是樣品全部合格，二者結(jié)果有顯著差異。其中L廠家的合格率為100%，H廠家的合格率為94%，F(xiàn)廠家的合格率為91%，這與溶出曲線的相似率比較結(jié)果也是一致的。從試驗(yàn)中筆者還發(fā)現(xiàn)，這些產(chǎn)品在緩沖液中的溶出曲線千差萬別，部分樣品3 min就全部溶出了，而部分樣品在整個(gè)溶出時(shí)間內(nèi)都沒有平臺(tái)期，這可能就是為什么不同廠家不同批號(hào)的產(chǎn)品，雖然檢查結(jié)果都是合格的，但在同一個(gè)患者身上產(chǎn)生的效果不一樣的原因。如果用水溶液為溶出介質(zhì)，這種差別就無法體現(xiàn)了，并且穩(wěn)定性也不好。由此可以確證，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的區(qū)分作用明顯不夠，采用pH10.0的緩沖液作為溶出介質(zhì)能夠顯著提高區(qū)分作用。

表3 兩種測(cè)定方法測(cè)得合格率比較Tab 3 Comparison of qualification rate between 2 kinds of methods

3 討論

為了使溶液穩(wěn)定不降解，并能夠有效地區(qū)分產(chǎn)品的優(yōu)劣，筆者認(rèn)為現(xiàn)行法定標(biāo)準(zhǔn)中苯妥英鈉片溶出度考察時(shí)需要改變?nèi)艹鼋橘|(zhì)的pH，并建議以pH 10.0的緩沖液代替水作為溶出介質(zhì)。

筆者在考察了鄭州市幾家大型醫(yī)院苯妥英鈉片的臨床使用情況并進(jìn)行了血藥濃度監(jiān)測(cè)后發(fā)現(xiàn)，服藥后患者的血藥濃度差別較大。經(jīng)分析后估計(jì)，隨著人年齡的增長(zhǎng)，胃酸的分泌越來越稀，胃動(dòng)力也越來越差，藥物的吸收也將越來越難，由此造成血藥達(dá)峰時(shí)間隨著年齡增長(zhǎng)越來越延長(zhǎng)?？紤]到中老年人的胃動(dòng)力并且為了更好體現(xiàn)區(qū)分作用，建議苯妥英鈉片溶出度考察時(shí)轉(zhuǎn)速設(shè)為50 r/min，而不是《中國藥典》中的100 r/min，取樣時(shí)間則根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果定為30 min。

在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)廠家樣品與參比制劑相比溶出曲線差別最大，且廠內(nèi)批與批之間的重復(fù)性也很差，分析可能是由于所有的廠家?guī)缀醵加昧说矸圩鳛樘畛鋭鳩廠沒有使用淀粉作為填充劑，并且制劑工藝不穩(wěn)定所致。L廠家的產(chǎn)品與參比制劑相似性最高，但在輔料中只用到了淀粉和硬脂酸鎂，比參比制劑相比少用了兩種輔料。可見，淀粉和硬脂酸鎂是達(dá)到苯妥英鈉最佳溶出的必需輔料，其余輔料可視情況而定。而H廠家用到的輔料以及制片過程與L廠家都近似，但相似率卻不高，分析可能是因?yàn)橹破^程中操作不同造成的。

綜上所述，本文建立的苯妥英鈉片溶出度方法區(qū)分作用強(qiáng)、溶液穩(wěn)定，不僅對(duì)藥品的質(zhì)量控制具有現(xiàn)實(shí)意義，而且對(duì)于改進(jìn)制劑工藝、進(jìn)一步提高藥物的生物利用度也具有較好的考察作用。

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：二部[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：440.

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