王 艷張 健.吉林省吉林市人民醫(yī)院耳鼻咽喉科，吉林吉林300；.吉林省吉林市中心醫(yī)院胸外乳腺甲狀腺科，吉林吉林30

鼻息肉組織Th細(xì)胞分化誘導(dǎo)因子IL-12 和IL-4的表達(dá)及臨床意義

王 艷1張 健2
1.吉林省吉林市人民醫(yī)院耳鼻咽喉科，吉林吉林132001；2.吉林省吉林市中心醫(yī)院胸外乳腺甲狀腺科，吉林吉林132011

[摘要]目的 分析鼻息肉組織中的Th1與Th2細(xì)胞和其分化誘導(dǎo)因子IL-12與IL-4的表達(dá)，進(jìn)一步研究鼻息肉組織的T細(xì)胞活化程度和組織免疫狀態(tài)。 方法 在我院2011年2月～2014年12月鼻息肉患者病例中隨機(jī)選擇41例作為實(shí)驗(yàn)組，另選同期行鼻中矯正手術(shù)病例41例作為對照組，分析兩組患者的Th1與Th2細(xì)胞反應(yīng)的具體特征。 結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組的Th1、Th2輔助細(xì)胞平均百分率、IL-12與IL-4水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。鼻息肉病例中，IL-12白細(xì)胞介素與Th1輔助細(xì)胞平均百分率、IL-4白細(xì)胞介素與Th2輔助細(xì)胞平均百分率呈正相關(guān)關(guān)系；IL-12白細(xì)胞介素同IL-4白細(xì)胞介素呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。結(jié)論 Th1細(xì)胞亞群是鼻息肉組織里的主要細(xì)胞群體，感染因素與鼻息肉的發(fā)生密切相關(guān)；同時由Th2 輔助細(xì)胞介導(dǎo)產(chǎn)生的變態(tài)反應(yīng)因素與鼻息肉的發(fā)生也有關(guān)聯(lián)。

[關(guān)鍵詞]鼻息肉組織；Th細(xì)胞；IL-12；IL-4；表達(dá)

鼻息肉是鼻科中發(fā)病比例較高的疾病，該病可由真菌、細(xì)菌和病毒等觸發(fā)因素引起，其發(fā)病機(jī)制具有不確定性[1-2]。目前普遍認(rèn)為炎癥細(xì)胞與細(xì)胞因子是鼻腔局部微環(huán)境的重要構(gòu)成部分，深入研究Th細(xì)胞亞群顯得尤為重要。本研究分析鼻息肉組織的Th細(xì)胞亞群和免疫狀態(tài)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

在我院2011年2月～2014年12月鼻息肉患者病例中隨機(jī)選擇41例為實(shí)驗(yàn)組，另選同期行鼻中矯正手術(shù)病例41例為對照組。實(shí)驗(yàn)患者均符合鼻息肉疾病的鼻鏡（包括鼻內(nèi)鏡）和CT分型診斷標(biāo)準(zhǔn)，均采用了病理活檢進(jìn)行確診，在進(jìn)行息肉標(biāo)本采集之前1～2周，全部停止使用抗生素、皮質(zhì)固醇激素。排除標(biāo)準(zhǔn)為：有哮喘史、慢性鼻竇炎、呼吸系統(tǒng)重疾、全身重疾或?qū)Π⑺酒チ植荒褪艿惹闆r。對照組納入標(biāo)準(zhǔn)：無變應(yīng)性鼻炎、鼻息肉、哮喘、慢性鼻竇炎和全身重大疾病。實(shí)驗(yàn)組男30例，女11例，年齡位于15～20歲間17例，21～48歲24例；對照組男32例，女9例，年齡位于15～20歲20例，21～48歲21例。將兩組患者的性別、年齡等一般資料做比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 標(biāo)本采集與處理

全部新鮮標(biāo)本均置入胎牛血清含量為10%的DMEM培養(yǎng)液里，使用磷酸緩沖液進(jìn)行反復(fù)清洗。將磷酸緩沖液中的標(biāo)本充分剪碎后，放置在100目尼龍網(wǎng)中輕輕摩擦，并使用260目的鎳鋅網(wǎng)進(jìn)行過濾，重懸后置于離心管內(nèi)，離心半徑為8cm，以1200r/min速度進(jìn)行，操作5min，并使用清洗磷酸緩沖液清洗2～3次備用[3-4]。

取經(jīng)手術(shù)切除的實(shí)驗(yàn)組患者的鼻息肉組織和對照組患者的中鼻甲組織作為觀察標(biāo)本，利用生理鹽水將標(biāo)本洗凈和擦干后，置于零下80℃環(huán)境中低溫保存；在檢測前待標(biāo)本經(jīng)常溫熔化恢復(fù)常態(tài)后，立即使用天平稱取1g，并在存放冰水的平皿中剪成碎片，添加1mL的磷酸緩沖溶液后，在玻璃勻漿器中進(jìn)行充分研磨，離心半徑為8cm，以3000r/min速度進(jìn)行，操作20min，待漿液磨勻后取清液以備檢測。

1.3 觀察和測定方法

（1）Th1、Th2百分率：集齊全部的標(biāo)本懸液之后，可開始刺激、培養(yǎng)，進(jìn)行細(xì)胞膜打孔，熒光抗體進(jìn)行染色標(biāo)記，全部完成后再上機(jī)檢測。采用流式細(xì)胞儀對Th1、Th2細(xì)胞計數(shù)統(tǒng)計CD4+細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的IFN-γ是Th1細(xì)胞，產(chǎn)生的IL-4是Th2細(xì)胞，并用軟件CELL Quest作分析。

（2）IL-12與IL-4：使用ELISA對白細(xì)胞介素IL-4 、IL-12進(jìn)行測定，實(shí)驗(yàn)按照試劑盒的說明步驟操作，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線對標(biāo)本勻漿里的IL-4 、IL-12含量（單位：pg/mL）進(jìn)行推算。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組的Th1、Th2輔助細(xì)胞百分率測定

實(shí)驗(yàn)組的Th1、Th2輔助細(xì)胞平均百分率均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1　兩組Th1、Th2輔助細(xì)胞百分率測定（±s，%）

表1　兩組Th1、Th2輔助細(xì)胞百分率測定（±s，%）

組別　n　Th1輔助細(xì)胞平均百分率　Th2輔助細(xì)胞平均百分率實(shí)驗(yàn)組　41　56.64±5.87　7.18±0.89對照組　41　20.37±2.14　3.05±0.33 t 9.64　8.72 P ＜0.05　?。?.05

2.2 兩組的IL-12與IL-4表達(dá)比較

實(shí)驗(yàn)組的IL-12與IL-4水平要高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2　兩組患者的IL-12與IL-4表達(dá)比較（±s，pg/mL）

表2　兩組患者的IL-12與IL-4表達(dá)比較（±s，pg/mL）

組別　n　IL-12水平　IL-4水平實(shí)驗(yàn)組　41　50.17±4.94　64.52±5.21對照組　41　 8.66±1.15　30.42±2.56 t 11.76　10.64 P ＜0.05　?。?.05

2.3 相關(guān)性分析

IL-12白細(xì)胞介素與Th1 輔助細(xì)胞平均百分率呈明顯的正相關(guān)（r=0.900，P＜0.05）；IL-4白細(xì)胞介素與Th2 輔助細(xì)胞平均百分率呈明顯的正相關(guān)（r=0.945，P＜0.05）；IL-12白細(xì)胞介素同IL-4白細(xì)胞介素呈明顯的負(fù)相關(guān)（r=-0.974，P＜0.05）。

3 討論

盡管目前的研究沒有對鼻息肉的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行明確的說明，但大量的研究表明淋巴細(xì)胞在炎性反應(yīng)中發(fā)揮了主要作用，是促進(jìn)患者鼻息肉形成的重要因素[5-9]。人體的鼻息肉組織存在著大量的T細(xì)胞淋巴，CD4+T細(xì)胞（即Th輔助細(xì)胞）的數(shù)量比CD8+細(xì)胞的數(shù)量要多。根據(jù)產(chǎn)生細(xì)胞因子分類以及功能劃分的結(jié)果，Th細(xì)胞可分為Th1與Th2細(xì)胞，它們的存在，對于臨床基礎(chǔ)免疫學(xué)有著重大意義[10-11]。實(shí)驗(yàn)組的Th1、Th2輔助細(xì)胞平均百分率、IL-12與IL-4水平均要高于對照組，組間對比具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。鼻息肉病例中，IL-12白細(xì)胞介素與Th1輔助細(xì)胞平均百分率、IL-4白細(xì)胞介素與Th2輔助細(xì)胞平均百分率呈明顯的正相關(guān)；IL-12白細(xì)胞介素同IL-4白細(xì)胞介素呈明顯的負(fù)相關(guān)。目前大量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明了Th1與Th2細(xì)胞可為平衡免疫應(yīng)答發(fā)揮關(guān)鍵性作用，兩種細(xì)胞的平衡狀態(tài)直接關(guān)系到免疫類疾病的轉(zhuǎn)歸。對于正常人的鼻黏膜，Th1與Th2輔助細(xì)胞可能剛好保持著平衡狀態(tài)[12]。

分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，Th1細(xì)胞亞群是鼻息肉組織里的主要細(xì)胞群體，其Th1細(xì)胞亞群比正常的中鼻甲黏膜要高，表示感染因素與鼻息肉的發(fā)生密切相關(guān)；同時Th2輔助細(xì)胞百分率也高于正常的中鼻甲黏膜，表示由Th2 輔助細(xì)胞介導(dǎo)產(chǎn)生的變態(tài)反應(yīng)因素與鼻息肉的發(fā)生也有關(guān)聯(lián)[13-15]。加強(qiáng)對Th細(xì)胞亞群的觀察和研究，有助于進(jìn)一步探討鼻息肉組織的T細(xì)胞活化程度和組織免疫狀態(tài)，觀察Th1與Th2細(xì)胞反應(yīng)的具體特征，并了解鼻息肉組織里的Th細(xì)胞亞群及其免疫類型等存在的明顯差異。Th1輔助細(xì)胞可分泌 IL-2和IFN-γ，對于抵抗細(xì)菌、病毒和寄生蟲等方面發(fā)揮著極其重要的作用；Th1輔助細(xì)胞可分泌 IL-4、IL-5、IL-6 與IL- 10，對B細(xì)胞增殖有刺激作用，產(chǎn)生抗體，與人體的體液免疫有著密切關(guān)系[16-17]。目前已有學(xué)者借助流式細(xì)胞儀探究發(fā)現(xiàn)鼻息肉患者的Th1與Th2細(xì)胞均要高于正常人；并且Th1與Th2輔助細(xì)胞百分率存在的差別也比較明顯，一般情況下，前者百分率要高于后者。還有研究發(fā)現(xiàn)關(guān)于T細(xì)胞亞群，鼻息肉組織同外周血存在著一定的差別，有分析認(rèn)為鼻息肉組織里的淋巴細(xì)胞不僅是由外周血的淋巴細(xì)胞遷移而來，而且可能與局部黏膜的免疫系統(tǒng)存在著緊密聯(lián)系。

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Expression of Th cell differentiation inducing factors IL-12 and IL-4 in nasal polyps and clinical significance

WANG Yan1ZHANG Jian2
1.Department of Otorhinolaryngology, Jilin People's Hospital, Jilin 132001, China; 2.Department of Thoracic External Breast Thyroid, Jilin Central Hospital, Jilin 132011, China

[Abstract]Objective To analyze Th1 and Th2 cells in nasal polyps tissue and expression of differentiation inducing factors IL-12 and IL-4 to further research activation degree and tissue immune status of T cell in nasal polyps tissue. Methods 41 patients with nasal polyps who were admitted to our hospital from February 2011 to December 2014 were randomly selected as the experimental group and 41 patients who were received nasal correction surgery in the same period were set as the control group. Specific characteristics of Th1 and Th2 cells reaction of patients in two groups were analyzed. Results The mean percentage of Th1 and Th2 auxiliary cells, IL-12 and IL-4 levels of the experimental group were higher than those of the control group which had statistical significance when compared (P＜0.05). In cases of nasal polyps, IL-12 interleukin had a positive correlation with the mean percentage of Th1 auxiliary cells. And IL-14 interleukin had a positive correlation with the mean percentage of Th2 auxiliary cells. But IL-12 interleukin had a negative correlation with IL-14 interleukin. Conclusion Th1 cell subsets are main cell population in nasal polyp tissue. Infection factors are closely related to the occurrence of nasal polyps. At the same time, allergic reaction factors mediated by Th2 auxiliary cells have correlation with the occurrence of nasal polyps.

[Key words]Nasal polyp tissue; Th cells; IL-12; IL-4; Expression

收稿日期：（2015-08-09）

[中圖分類號]R765.25

[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]B

[文章編號]2095-0616（2015）20-191-03