周　霞, 張　浩, 賀恒鵬, 趙　娜

(中國醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院 檢驗(yàn)科, 遼寧 沈陽, 110032)

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缺血性腦血管病患者血清巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子與腫瘤壞死因子α水平的變化

周霞, 張浩, 賀恒鵬, 趙娜

(中國醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院 檢驗(yàn)科, 遼寧 沈陽, 110032)

摘要:目的探討缺血性腦血管病患者血清MIF與TNF-α水平的變化。方法檢測并比較140例缺血性腦血管病患者和20例健康人群的血清MIF、TNF-α的含量。結(jié)果缺血性腦血管病組患者血清MIF、TNF-α水平顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。急性腦梗死患者中，重度組血清MIF、TNF-α水平最高，輕度組最低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。血清MIF、TNF-α水平呈正相關(guān)性，并與缺血性腦血管病患者病情密切相關(guān)。ROC曲線分析顯示，血清MIF和TNF-α水平對(duì)患者病情有提示意義。結(jié)論血清MIF、TNF-α的含量變化與缺血性腦血管病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，檢測血清中MIF、TNF-α的含量對(duì)缺血性腦血管病的預(yù)防和診療有重要的臨床意義。

關(guān)鍵詞:缺血性腦血管病; 巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子; 腫瘤壞死因子-α

缺血性腦血管病(ICVD)是由于局部腦組織血液循環(huán)障礙導(dǎo)致缺血、缺氧而發(fā)生的軟化壞死，具有發(fā)病率高、致殘率高、病死率高的特點(diǎn)，嚴(yán)重影響患者的身心健康和生活質(zhì)量。缺血后腦神經(jīng)元損傷死亡歸因于多種分子參與的炎癥反應(yīng)。巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)是一種促炎因子，可抑制巨噬細(xì)胞的自由游走移動(dòng)，吸引其在炎性反應(yīng)局部的浸潤聚集，增強(qiáng)它的吞噬功能，還可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分泌多種細(xì)胞因子。有研究[1]表明, MIF可能參與ICVD的免疫炎癥調(diào)節(jié)過程并發(fā)揮重要作用。腫瘤壞死因子-α(TNF-α)參與了腦缺血后血腦屏障的破壞和炎癥反應(yīng)的啟動(dòng)，當(dāng)腦組織缺血缺氧時(shí)，TNF-α在顱內(nèi)大量表達(dá)，通過多種途徑發(fā)揮重要的神經(jīng)毒性作用。本研究結(jié)合患者臨床資料，分析血清MIF、TNF-α水平與病情程度之間的關(guān)系，并研究血清MIF與TNF-α水平之間的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1　一般資料

收集中國醫(yī)大四院2013年1月—2014年7月診斷明確的ICVD住院患者140例,按腦血管病分類及臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)分為: ① 急性腦梗死組(ACI組發(fā)病2周以內(nèi))88例,男62例,女26例,年齡(63.25±10.78)歲。符合全國第4屆腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議上修訂的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]: 經(jīng)CT或者磁共振成像(MRI)診斷確診; 未見任何影響神經(jīng)系統(tǒng)評(píng)分的殘疾。按美國國立衛(wèi)生研究所卒中量表(AIHSS評(píng)分)，進(jìn)行神經(jīng)功能缺損程度評(píng)估88例患者:重度梗死31例(男19例，女12例)，中度梗死26例(男20例，女6例)，輕度梗死31例(男23例，女8例); ② 短暫性腦缺血發(fā)作組(TIA組)12例,男5例,女7例,年齡(61.5±12.08)歲。臨床有明確TIA體征,并且CT/MRI未見腦梗死證據(jù); ③ 椎-基底動(dòng)脈供血不足組40例,男17例,女23例,年齡(58.12±12.47)歲?；颊呓?周內(nèi)間斷有明顯頭痛、頭昏、眩暈、耳鳴、惡心、嘔吐等癥狀,但沒有確切的可以診斷為TIA或腦梗死的證據(jù)和體征,取血時(shí)有明顯癥狀。同時(shí)，收集男女各10例健康體檢者作為對(duì)照組，年齡(59.9±10.08)歲。

1.2　方法

取所有對(duì)象于清晨空腹采集靜脈血3 mL，病例組為臨床治療前采集的標(biāo)本，并且無溶血、黃疸及乳糜血(室溫下靜置20 min, 3 500 r/min, 5 min離心后分離血清置于-80 ℃冰箱保存)。TNF-α測定：用R&D公司的Human TNF-α試劑盒，按說明書操作，結(jié)果用AT-FAME全自動(dòng)酶標(biāo)儀檢測。MIF測定：用RayBio公司的Human MIF試劑盒，按說明書操作，結(jié)果用AT-FAME全自動(dòng)酶標(biāo)儀檢測。

1.3　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。對(duì)于實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)首先用Kolmogorov-Smirnov方法作正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。應(yīng)用Spearman相關(guān)系數(shù)判斷MIF和TNF-α之間的相關(guān)性,并分析其與疾病相關(guān)性。并應(yīng)用ROC曲線分析血清MIF和TNF-α水平對(duì)患者病情的提示意義。設(shè)置檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2結(jié)果

2.1　缺血性腦血管病患者血清MIF、TNF-α含量和各組間的比較

應(yīng)用單因素方差分析結(jié)果顯示，缺血性腦血管病組與對(duì)照組之間血清MIF、TNF-α含量有顯著差異(P<0.05), 而且急性腦梗死組的輕度、中度、重度組之間，兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

表1　缺血性腦血管病患者血清TNF-α與

與對(duì)照組比較，*P<0.05; 與急性腦梗死組比較，#P<0.05;

與輕度組比較，△△P<0.01; 與中度組比較，▲▲P<0.01。

2.2　Spearman相關(guān)分析

血清MIF與TNF-α水平成正相關(guān)(r=0.913,P=0.000); 血清MIF與缺血性腦血管病患者病情呈正相關(guān)(r=0.554,P=0.000); TNF-α水平與缺血性腦血管病患者病情明顯正相關(guān)(r=0.561,P=0.000)。

采用t檢驗(yàn)對(duì)缺血性腦血管病患者的常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)與對(duì)照組進(jìn)行簡單比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 見表2。同時(shí)應(yīng)用ROC曲線分析將有差異的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)與MIF、 TNF-α水平進(jìn)行分析, MIF(AUC: 0.895, 95%CI: 0.839～0.951), TNF-α(AUC: 0.869, 95%CI: 0.814～0.923), 糖化(AUC: 0.968, 95%CI: 0.939～0.996), 同型(AUC: 0.959, 95%CI: 0.927～0.990), 血小板(AUC: 0.220, 95%CI: 0.021～0.418), 空腹血糖(AUC: 0.755, 95%CI: 0.616～0.895), 高密(AUC: 0.297, 95%CI: 0.170～0.425)。

表2　缺血性腦血管病患者實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)與對(duì)照組比較

與對(duì)照組比較, *P<0.05。

3討論

在ICVD中[1], 過度的炎癥反應(yīng)和內(nèi)源性免疫反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致腦缺血、缺氧之后周圍白細(xì)胞進(jìn)入腦實(shí)質(zhì)，引起免疫反應(yīng)，炎細(xì)胞激活、浸潤。而再灌注時(shí)，缺血神經(jīng)元會(huì)釋放多種炎癥介質(zhì)以及一系列毒性物質(zhì)，引起血腦屏障和胞外基質(zhì)受損、低灌注，而且缺血后炎癥能夠促使腦神經(jīng)功能惡化，是使患者病情加重和預(yù)后不良的主要因素之一。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,缺血性腦血管病組與對(duì)照組血清MIF含量有顯著差異(P<0.05), 急性腦梗死的輕度、中度、重度組之間，兩兩比較差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。血清MIF與ICVD患者病情呈正相關(guān)。由此可見血清MIF含量與患者腦缺氧程度有密切關(guān)系。

MIF可由免疫細(xì)胞如單核/巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞，以及非免疫細(xì)胞如內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)分泌細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞等合成并儲(chǔ)存與胞質(zhì)中，甚至在下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸中都有儲(chǔ)存，在受到信號(hào)刺激時(shí)快速釋放入血。有研究[3-4]表明，缺氧狀態(tài)下腦組織細(xì)胞的MIF的mRNA 表達(dá)上調(diào)，是腦組織缺氧的重要信號(hào)，并且缺氧促進(jìn)MIF基因的轉(zhuǎn)錄，使血清中MIF含量升高。MIF 能抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化及巨噬細(xì)胞浸潤，減小出血性損傷體積、減少組織水腫及減低神經(jīng)損傷程度并保護(hù)腦神經(jīng)細(xì)胞的功能。這與本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致。Lue H等[5]發(fā)現(xiàn)在缺血狀態(tài)下, MIF作為可調(diào)節(jié)細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)的炎癥因子，可以通過下調(diào)心肌細(xì)胞下調(diào)JNK通路活性，進(jìn)而下調(diào)bcl-2的表達(dá)，從而阻止心肌細(xì)胞凋亡，保護(hù)受損心肌。由此可見, ICVD患者血清MIF水平的升高可能與腦組織細(xì)胞的自身保護(hù)機(jī)制有關(guān)，但MIF具體機(jī)制需要進(jìn)一步研究。

本研究結(jié)果表明，血清TNF-α含量在ICVD患者發(fā)病后即明顯增高，并與疾病嚴(yán)重程度密切相關(guān)，這與目前國外部分研究結(jié)果相同[6-8]。TNF-α可由單核巨噬細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞等產(chǎn)生，是機(jī)體炎癥與免疫應(yīng)答的最重要的炎癥介質(zhì)之一，參與失血、凝血、炎癥及免疫防疫等過程。國內(nèi)有研究[9-10]表明，血清TNF-α的濃度與腦梗死的面積呈正相關(guān)，這與本次結(jié)果相符。TNF-α在神經(jīng)組織損傷病理過程中起重要作用，機(jī)制可能是其介導(dǎo)炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)、誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡、促進(jìn)腦水腫、破壞血腦屏障等方式加重腦缺血性損傷，通過檢測血清TNF-α的含量，可在一定程度上反映腦水腫的嚴(yán)重程度，以利于判斷缺血性患者的預(yù)后，阻斷TNF-α的生成和表達(dá)對(duì)改善缺血性患者的預(yù)后可能具有潛在的臨床價(jià)值。

本研究結(jié)果顯示，血清MIF與TNF-α正相關(guān)，這與劉雙喜等[11]結(jié)果相同。血清MIF 可激活血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞表達(dá)豐富的致炎因子和細(xì)胞介質(zhì)，如TNF-α、IL-1、IL-2、IL-6、IL-8、一氧化氮等多種制炎因子，而TNF-α高表達(dá)又可刺激白細(xì)胞表達(dá)組織因子、黏附分子、NO等并放大炎癥反應(yīng)過程，加重腦組織損傷[12-13]。

ROC曲線下的面積( AUC)被認(rèn)為是評(píng)估一個(gè)試驗(yàn)診斷價(jià)值的最好的指標(biāo)，當(dāng)AUC<0.5時(shí)無診斷價(jià)值，AUC在0.5～0.7時(shí)有較低準(zhǔn)確性，AUC在0.7～0.9時(shí)有一定準(zhǔn)確性, AUC>0.9時(shí)有較高的準(zhǔn)確性。本研究通過ROC 曲線對(duì)缺血性腦血管病患者的常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)[14]進(jìn)行分析，結(jié)果表明MIF 和TNF-α對(duì)ICVD均有較高診斷效能, MIF略高于TNF-α, 同時(shí)糖化血紅蛋白、同型半胱氨酸、空腹血糖對(duì)缺血性腦血管病也有較高診斷效能。因此，在對(duì)ICVD進(jìn)行臨床診療時(shí)可以結(jié)合MIF、TNF-α、糖化血紅蛋白、同型半胱氨酸、空腹血糖等實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，特別是對(duì)于CT/MRI未見明顯改變、沒有明顯神經(jīng)功能損傷體征的疑難病例診斷。

ICVD患者血清MIF含量反映了腦組織的缺氧程度，MIF對(duì)組織缺氧后的TNF-α等炎癥因子的分泌升高起著重要的介導(dǎo)作用。MIF對(duì)腦組織神經(jīng)有一定保護(hù)作用，但其促進(jìn)TNF-α的分泌又增加了腦神經(jīng)的損傷，因此，血清MIF、TNF-α在ICVD的致病機(jī)制還需進(jìn)一步研究，進(jìn)而擴(kuò)大MIF的保護(hù)作用，阻斷TNF-α對(duì)腦神經(jīng)的損傷作用，為ICVD的治療開辟新途徑。對(duì)高危人群血清MIF、TNF-α水平監(jiān)測對(duì)ICVD的早期診斷、早期干預(yù)治療、防止嚴(yán)重并發(fā)癥的發(fā)生具有臨床意義。

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Change of relationship between serum MIF、TNF-α and ischemic cerebrovascular disease

ZHOU Xia，ZHANG Hao，HE Hengpeng, ZHAO Na

(TheFourthAffiliatedHospitalofChinaMedicalUniversity,Shenyang,Liaoning, 110032)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore the change of serum TNF-α and MIF levels in patients with ischemic cerebrovascular disease. MethodsLevels of TNF-α and MIF in 140 patients with ischemic cerebrovascular disease and 20 healthy people were detected and compared. ResultsSerum MIF, TNF-α levels of patients with ischemic cerebrovascular disease were significantly higher than those of the control group (P<0.01). In patients with acute cerebral infarction, the levels of MIF and TNF-α were the highest in severe group and the lowest in mild group, and there were significant differences among groups (P<0.05). There was a positive correlation between MIF and TNF-α, and were correlated with ischemic cerebrovascular disease severity. ROC curve analysis showed that serum levels of MIF and TNF-α were able to reflect the clinical severity of ischemic cerebrovascular disease. ConclusionThe variation in contents of serum MIF and TNF-α is closely related to the occurrence and development of ischemic cerebrovascular disease. The detection of serum MIF and TNF-α has the important clinical significance for prevention and treatment of ischemic cerebrovascular disease.

KEYWORDS:ischemic cerebrovascular disease; macrophage migration inhibitory factor; tumor necrosis factor-α

收稿日期:2015-01-09

中圖分類號(hào):R 743

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號(hào):1672-2353(2015)17-024-04

DOI:10.7619/jcmp.201517008