鄭 軍，黃秀霞

(中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院檢驗科,沈陽 110001)

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·論 著·

乙二胺四乙酸依賴性假性血小板減少癥簡易糾正方案

鄭 軍，黃秀霞

(中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院檢驗科,沈陽 110001)

目的 乙二胺四乙酸(EDTA)依賴性假性血小板減少癥標本通過肝素鋰、枸櫞酸鈉及改良方案進行糾正，對血小板測定結(jié)果進行評估，建立一個簡單、實用、且不延長結(jié)果報告時間(TAT)的方法。方法 征集EDTA依賴性假性血小板減少癥志愿者120例，同時收集肝素鋰、枸櫞酸鈉、EDTA-K3抗凝標本各一份，其中EDTA-K3標本采用改良方法處理后再檢測，三組檢測結(jié)果與參考方法的測定結(jié)果進行比較。評估差異有無統(tǒng)計學意義。結(jié)果 肝素鋰、枸櫞酸鈉、改良方案的糾正率分別為80.5%、39.2%、100.0%；與參考方法比較，P值分別0.129、0.013、0.051。TAT分別為(2.03±0.29)、(1.8±0.35)、(0.47±0.19)h。結(jié)論 肝素鋰組的結(jié)果與參考方法測定結(jié)果相關(guān)性最好，可比性最好。其次是改良組和枸櫞酸鈉組。改良方案對TAT影響最小、不用進行患者的二次采血，并且結(jié)果與枸櫞酸鈉相似，因此該改良方案可以用于臨床上對PTCP標本的糾正。

EDTA依賴性假性血小板減少癥； 肝素鋰； 枸櫞酸鈉

抗凝劑引起的假性血小板減少癥(PTCP)隨著真空采血系統(tǒng)的使用而不斷增加。全血細胞分析通常以乙二胺四乙酸(EDTA)-K3作為全血的抗凝劑，引起血小板聚集也最為常見，導致EDTA依賴性假性血小板減少癥(EDTA-PTCP)的發(fā)生。但在日常工作中，幾乎所有的抗凝劑均會引起不同程度的血小板聚集。雖然沒有證據(jù)證明PTCP可引發(fā)出血，但是作為臨床第二大血小板減少的原因，如果診斷不及時，會導致對患者的無效治療[1]；因血小板減少而被迫停止患者的一些其他疾病的治療，如心臟瓣膜置換術(shù)后停用抗血小板藥物等，可能給患者造成不可彌補的傷害。將EDTA-K3(采用改良方法測定)、肝素鋰、枸櫞酸鈉抗凝全血檢測后結(jié)果與參考方法進行比較，評估其統(tǒng)計學意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2011～2013年醫(yī)院就診者中存在PTCP的志愿者120例，分別收集EDTA-K3、枸櫞酸鈉、肝素鋰抗凝標本。另外對2010～2011年135例PTCP患者中枸櫞酸鈉糾正80例，肝素鋰方法糾正55例，統(tǒng)計結(jié)果報告時間(TAT)。

1.2 儀器與試劑 Sysmex XE-5000全自動血細胞分析儀； BD FACSCalibur 流式細胞儀；Sysmex F820單通道血細胞計數(shù)儀。試劑均為原廠配套試劑。采血管(EDTA-K3、肝素、枸櫞酸鈉)購于美國BD公司。

1.3 方法

1．3．1 常規(guī)檢測 空腹8 h，靜息狀態(tài)抽取靜脈全血于EDTA-K3管、枸櫞酸鈉管、肝素鋰管內(nèi)立即混勻，EDTA-K3標本通過糾正方案后檢測。為了除去小紅細胞或紅細胞碎片對血小板測定的影響。均采用全血細胞計數(shù)(CBC)+網(wǎng)織紅細胞計數(shù)(RET)模式進行，依次分為枸櫞酸鈉組、肝素鋰組及改良組，結(jié)果分別與參考方法結(jié)果進行比較。

1．3．2 改良方案檢測 將標本混勻后，吸取0.5 mL于微量離心管中，連續(xù)擊打20 s后測定。血小板參考方法參照2005年衛(wèi)生部頒布的行業(yè)標準《WS/T244-2005血小板計數(shù)參考方法》進行。

2 結(jié) 果

2．1 不同方法的糾正率 枸櫞酸鈉、肝素、改良法糾正率分別 為39.2%、80.5%、100.0%。與參考方法比較P值分別為0.013、0.129、0.051。只有枸櫞酸鈉差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),其他方法差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。但三種方法均臨床可接受(Bias%<12.5%)。

2．2 不同方法的TAT 枸櫞酸鈉、肝素及改良法TAT分別為(1.8±0.35)、(2.03±0.29)、(0.47±0.19)h。

注：橫坐標為參考方法測定的結(jié)果，縱坐標為肝素鋰測定結(jié)果。

圖1 肝素鋰抗凝結(jié)果

注：橫坐標為參考方法測定的結(jié)果，縱坐標為改良的測定結(jié)果。

圖2 改良方法測定結(jié)果

注：橫坐標為參考方法測定的結(jié)果，縱坐標為枸櫞酸鈉管標本測定結(jié)果。

圖3 枸櫞酸鈉抗凝結(jié)果

2．3 相關(guān)性分析 肝素鋰與參考方法相關(guān)性分析的回歸方程是Y=0.965 8X+10.443，R2=0.9757，兩種方法相關(guān)性好，見圖1。改良方法與參考方法相關(guān)性分析的回歸方程是Y=0.919 5X+15.393，R2=0.9554，兩種方法相關(guān)性好，見圖2。枸櫞酸鈉與參考方法相關(guān)性分析的回歸方程是Y=0.925 8X-1.653 5，R2=0.887 8，兩種方法相關(guān)性有偏差，見圖3。

3 討 論

EDTA-PTCP是一種由常規(guī)誘導劑在體外引發(fā)的血小板的弱聚集現(xiàn)象，能夠引發(fā)這種聚集的抗凝劑不局限于EDTA，其他抗凝劑如枸櫞酸鈉、肝素均可引起[2]。EDTA-PTCP在無癥狀的人群中的發(fā)病率不到0.2‰，然而在住院患者中的發(fā)病率可高達0.8‰左右，平均為0.5‰，與國外的報道相符合[3]。目前EDTA-PTCP的發(fā)生機制不清楚，它的存在是否會加重或改變其他疾病的血栓或血液學狀態(tài)也沒有得到臨床研究的驗證。國內(nèi)外相關(guān)文獻報道，EDTA-PTCP均為散發(fā)，無年齡、性別、藥物及個體特征的區(qū)別，無出血傾向及家庭史，其他血液與血栓學檢查均提示無出血及血栓性疾病的可能。EDTA-PTCP常在自身免疫性疾病(系統(tǒng)性紅斑狼瘡)、長期重癥疾病(如腫瘤、心血管疾病、肝臟疾病、格林巴利綜合征)、手術(shù)治療后、燒傷、某些炎癥感染(肝炎、腮腺炎、風疹巨細胞病毒等)，某些藥物(如美西律、阿昔單抗、抗菌藥物等)應用后發(fā)生[4-6]。也有文獻報道1例EDTA-PTCP母親所生的孩子也曾在一段時間內(nèi)表現(xiàn)出EDTA-PTCP[7]。目前報道的可引起血小板凝集的免疫球蛋白主要是IgG、IgM和IgA，同時存在IgG與IgM或者IgG和IgA也有報道，其中主要以IgG與IgM為主。

針對PTCP，糾正方案包括手工采血鏡檢，硫酸阿米卡星糾正等[8]，國內(nèi)也有相關(guān)報道使用阿米卡星糾正失敗的案例報道[9]。此外國內(nèi)同行嘗試使用多種藥物(阿米卡星和塞氯匹定)研究不同藥物對PTCP糾正的可能與相關(guān)性[10]。也有部分關(guān)于氟化鈉糾正的相關(guān)報道[11]。目前，國內(nèi)推薦方法是3.8%枸櫞酸鈉抗凝管進行復檢，由于枸櫞酸鈉是一種液體抗凝劑并且以1∶9的抗凝比例添加，測定后會出現(xiàn)10%的稀釋誤差，導致3種糾正方案中，枸櫞酸鈉的相關(guān)性最差。肝素鋰抗凝120例僅有39例不能糾正，但是其引起白細胞的聚集和染色背景偏藍，不適合進行常規(guī)血細胞分析。簡易糾正方案是基于PTCP血小板的弱聚集的基礎上，這種聚集在體外雖然不可逆，但是卻很不牢固，適度震蕩可以使血小板重新分散，并且不再聚集[12]。測定結(jié)果優(yōu)于枸櫞酸鈉糾正的結(jié)果，而且可以達到100.0%的糾正率，由于這種糾正方案是對原始采樣標本的處理，而且糾正方法簡單，又不會延長標本的TAT。其與參考方法的偏差小于1/2CLIA′88的臨床可接受限。

可見，相對于枸櫞酸鈉和肝素方案，糾正方案更加有效、合理，可以大大縮短TAT并減少患者的等待，也不會增加患者二次采樣的經(jīng)濟與心理成本。

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Simple correcting scheme of EDTA-dependent pseudothrombocytopenia

ZHENGJun,HUANGXiu-xia

(DepartmentofClinicalLaboratory,FirstAffiliatedHospitalofChinaMedicalUniversity,Shenyang,Liaoning110001,China)

Objective To correct the specimens of EDTA-dependent pseudothrombocytopenia(PTCT) by adopting heparin lithium,sodium sitrate and the improved corrective solution and to evaluate the platelet detection results for establishing a simple,practical method without extending the results report time.Methods 120 volunteer of EDTA-dependent PTCT and each anti-coagulation specimen with EDTA-K3,heparin lithium and sodium citrate were collected,in which the specimens of EDTA-K3was treated by the improved method and then the detection was conducted.The detection results in 3 groups were compared with the detection results by the reference method and whether having the statistical significance was evaluated.Results The corrective rates of heparin lithium,sodium citrate and improved corrective solution were 80.5%,39.2% and 100.0%.TheirPvalues were 0.129,0.013 and 0.051 respectively.Their result report time(TAT) were(2.03±0.29),(1.8±0.35),(0.47±0.19) h respectively.Conclusion The results of the heparin lithium group has the best correlation and the detection results by the reference method and the best comparability,followed by the improved group and the sodium citrate group.The improved corrective scheme has the minimal influence on TAT and without needing to collect blood specimen twice,its detection results are close to those detected by the sodium citrate method.Therefore the improved corrective scheme can be used to correct the PTCP specimens in clinic.

EDTA-dependent PTCP; heparin lithium; sodium citrate

鄭軍，男，主管檢驗師，學士學位，研究方向為臨床血液學檢驗，血栓與止血。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.02.015

A

1672-9455(2015)02-0177-02

2014-04-22

2014-09-13)