苗策禹，趙文普，劉喜綱，劉翠哲，劉 沛

(河北省中藥研究與開發(fā)重點實驗室/承德醫(yī)學院中藥研究所，河北承德 067000)

(基礎(chǔ)醫(yī)學欄目編輯:陳志宏)

生脈飲由人參、麥冬、五味子組成，人參總皂苷和麥冬總皂苷是其有效部位[1]。文獻中多為單味人參和麥冬藥材中總皂苷含量測定方法[2-3]，只有許敏等[4]對生脈飲中麥冬總皂苷的含量進行了測定。經(jīng)多次驗證，生脈飲樣品液香草醛法顯色后，395nm處沒有典型麥冬總皂苷吸收峰;高氯酸法顯色后，人參總皂苷與麥冬總皂苷均在390nm左右有最大吸收峰，無法單獨測定其中的一種。為此，本研究建立了分別測定生脈飲中人參總皂苷和麥冬總皂苷含量的方法。

1 儀器與試藥

HP-8453紫外可見分光光度計(美國惠普)。人參、麥冬、五味子(同仁堂承德分公司);人參皂苷Re、魯斯考皂苷元對照品(成都曼斯特生物科技有限公司，批號MUST-11041201、110725)。

2 方法、結(jié)果與分析

2.1 香草醛法測定生脈飲中人參總皂苷的含量[2]

2.1.1 對照品液制備:精稱人參皂苷Re對照品12.54mg于10ml量瓶中，甲醇溶解定容，即得。

2.1.2 供試品液制備:取人參1g、麥冬2g、五味子1g于具塞三角瓶中，8倍量65%乙醇超聲提取3次，每次1h，過濾，濾液濃縮至稠膏狀，用水飽和的正丁醇萃取4次，每次10ml，合并正丁醇液，水層棄去，用0.1mol/L的NaOH溶液洗正丁醇層2次，每次10ml，棄去NaOH層，回收正丁醇，殘渣用甲醇溶解定容至10ml。同法制備不含人參的陰性供試品液。

2.1.3 檢測波長確定:精取對照品、供試品和陰性供試品液各100μl至比色管中，揮干溶劑，分別精密加入新配的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，60℃水浴15min，冰浴5min，加入5ml冰醋酸。以隨行試劑為空白，在200-700nm處掃描。結(jié)果顯示，對照品與供試品在545nm處有最大吸收，且陰性供試品無干擾。

2.1.4 標準曲線的制備:分別吸取人參皂苷Re對照品溶液60、80、100、120、140、160μl于比色管中，按2.1.3的方法在545nm處測定。以吸光度為縱坐標，人參皂苷Re含量為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程:y=4.3314x+0.0054，r=0.9993，線性范圍是0.0752-0.2006mg。

2.1.5 方法學考察:精密度、重復(fù)性良好，RSD分別為0.31%、2.41%。供試品液在8h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為2.07%;供試品液顯色后在30min內(nèi)穩(wěn)定，RSD為2.90%。取已知含量的供試品溶液6份，分別精密加入一定量的人參皂苷Re對照品后進行含量測定，計算回收率，結(jié)果人參皂苷Re平均回收率為100.64%，RSD為2.88%。

2.1.6 生脈飲中人參總皂苷的含量測定:取人參1g、麥冬2g、五味子1g，平行制備3份，按2.1.2和2.1.3的方法測定吸光度，計算人參總皂苷的含量。結(jié)果顯示，3批樣品人參總皂苷的平均含量為18.1448mg/g。

2.2 高氯酸法測定生脈飲中總皂苷含量

2.2.1 對照品液制備:精稱魯斯考皂苷元對照品11.96mg于10ml量瓶中，甲醇溶解定容。人參皂苷Re對照品溶液制備方法同2.1.1。

2.2.2 供試品液制備:方法同2.1.2，同法制備不含人參、麥冬的陰性供試品溶液。

2.2.3 檢測波長確定:精密吸取魯斯考皂苷元、人參皂苷Re對照品溶液各200μl，供試品和陰性供試品液各300μl于比色管中，揮干溶劑，精密加入高氯酸5ml，65℃水浴15min，冰浴5min，以隨行試劑為空白，200-700nm掃描，結(jié)果魯斯考皂苷元在397nm處有最大吸收、人參皂苷Re在386nm處有最大吸收，供試品在384nm處有最大吸收，陰性樣品無干擾，故確定以人參皂苷Re為對照品在386nm處測定。

2.2.4 標準曲線制備:精密吸取人參皂苷Re對照品 溶 液150、250、350、450、550、650μl于 比 色 管 中，按2.2.3的方法在386nm處測定。以吸光度為縱坐標，人參皂苷Re含量為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方 程:y=1.1866x+0.0112，r=0.9996，線 性 范 圍 是0.1881-0.8151mg。

2.2.5 方法學考察:精密度、重復(fù)性良好，RSD分別為0.53%、2.18%。供試品液在8h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為0.67%;供試品液顯色后在30min內(nèi)穩(wěn)定，RSD為0.50%。取已知含量的供試品溶液6份，分別精密加入一定量的人參皂苷Re對照品后進行含量測定，計算回收率，結(jié)果人參皂苷Re平均回收率為100.33%，RSD為2.01%。

2.2.6 生脈飲中總皂苷的含量測定:取人參1g、麥冬2g、五味子1g，平行制備3份，按2.2.2和2.2.3的方法測定吸光度，計算總皂苷的含量。結(jié)果顯示，3批樣品總皂苷的平均含量為39.1208mg/g。

2.3 生脈飲中麥冬總皂苷的含量測定

2.3.1 確定換算系數(shù):由于香草醛法顯色后未發(fā)現(xiàn)典型麥冬總皂苷吸收峰，高氯酸法無法單獨測定麥冬總皂苷的含量，因此考慮以高氯酸法測得的總皂苷含量減去香草醛法測得的人參總皂苷的含量，得到麥冬總皂苷的含量。預(yù)實驗發(fā)現(xiàn)，高氯酸法生脈飲中人參總皂苷含量的測定值是香草醛法的1.82倍;2010年版《中國藥典》中，麥冬藥材麥冬總皂苷的含量以魯斯考皂苷元為對照品計，而本研究麥冬總皂苷以人參皂苷Re為對照品測定，預(yù)實驗確定以人參皂苷Re為對照品測得的麥冬總皂苷含量是以魯斯考皂苷元為對照品測得值的4.16倍。

因此，本研究確定以魯斯考皂苷元為對照品計麥冬總皂苷含量的換算公式為:C=(A-1.82B)/4.16。式中:A-以人參皂苷Re為對照品，高氯酸法測定生脈飲中總皂苷的含量;B-香草醛法測定生脈飲中人參總皂苷的含量;C-生脈飲中以魯斯考皂苷元為對照品計麥冬總皂苷的含量。

2.3.2 生脈飲中麥冬總皂苷的含量:取人參1g、麥冬2g、五味子1g，平行制備3份，按2.1.2的方法制備樣品溶液，按2.2、2.3.1的方法測定生脈飲中麥冬總皂苷的含量，結(jié)果麥冬總皂苷平均含量為1.4657mg/g。

3 討論

高氯酸法是測定麥冬中麥冬總皂苷含量的常用方法，但以高氯酸法檢測時，生脈飲中人參皂苷與麥冬皂苷的最大吸收波長相近，無法單獨測定麥冬總皂苷的含量。香草醛法只能測定人參皂苷而無法測定麥冬皂苷的含量。本研究前期曾考慮以茴香醛法測定生脈飲中麥冬總皂苷，但顯色后吸收峰不明顯，重復(fù)性差，測定結(jié)果不準確。因此，本研究建立換算系數(shù)法計算得到生脈飲中的麥冬總皂苷含量，可作為生脈制劑以及其它含人參、麥冬制劑中麥冬總皂苷含量的測定方法。

[1] 嚴永清.生脈散口服液的綜合研究[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，1990.1-7.

[2] 桂雙英，周亞球.比色法測定人參中人參總皂苷的含量[J].安徽中醫(yī)學院學報，2003，22(4):51-52.

[3] 許敏，高英，李衛(wèi)民.麥冬總皂苷含量測定方法的研究[J].臨床醫(yī)藥實踐，2010，19(5B):596-597.

[4] 許敏.生脈飲復(fù)方有效部位純化工藝初探及麥冬藥材的質(zhì)量標準研究[D].廣州:廣州中醫(yī)藥大學，2010.