張 婧，王 軍

(1.大連醫(yī)科大學(xué) 研究生院，遼寧 大連116044;2.大連醫(yī)科大學(xué) 病理生理學(xué)教研室，遼寧 大連116044)

絲氨酸蛋白酶抑制因子Kazal 1 型(serine protease inhibitor Kazal type 1，SPINK1)屬SPINK 家族，SPINK 家族成員在機(jī)體的諸多生理和病理過程中起到了重要的作用，參與了多種炎癥和腫瘤的發(fā)生發(fā)展且與多種人類疾病有關(guān)［1］。

SPINK1 由人的胰腺腺泡細(xì)胞分泌合成，絲氨酸蛋白酶抑制因子Kazal 3 型(serine protease inhibitor Kazal type 3，spink3)是SPINK1 的小鼠同源基因，SPINK1/Spink3 同時(shí)也被稱為胰腺分泌性胰酶抑制因子(pancreatic secretory trypsin inhibitor，PSTI)和腫瘤相關(guān)性胰酶抑制因子(tumor associated trypsin inhibitor，TATI)［2-3］。近些年來，SPINK1/Spink3 的基因突變，其與自噬、表皮生長(zhǎng)因子、胰腺炎的發(fā)病機(jī)制、腫瘤的發(fā)生和預(yù)后的關(guān)系，以及其信號(hào)傳導(dǎo)通路等方面的研究出現(xiàn)了很多新的報(bào)道，提示SPINK1/Spink3 不但是胰蛋白酶的抑制因子，而且還具有生長(zhǎng)因子和自噬的負(fù)調(diào)節(jié)因子的生物學(xué)特性［2-5］，在機(jī)體內(nèi)的諸多生理功能和病理狀態(tài)下起到了重要作用，本文就近年來對(duì)SPINK1/Spink3 最新的研究進(jìn)展進(jìn)行簡(jiǎn)要闡述。

1 SPINK1 與基因突變

1.1 基因突變

SPINK1 基因(包括內(nèi)含子、外顯子和信號(hào)多肽)突變和SPINK1 啟動(dòng)子變異［6］可能引起其功能喪失或增強(qiáng)，也有可能不產(chǎn)生任何影響。啟動(dòng)子c.87 +1G ＞A 的剪接變異會(huì)引起SPINK1 功能的喪失［7］;基因內(nèi)IVS3 +2T ＞C 突變會(huì)影響外顯子3 的剪接從而起功能喪失［8］;SPINK1 多肽中三個(gè)信號(hào)肽的變異和15 個(gè)錯(cuò)義突變(但不包括Q68R、S10N、N37S、L12F、N34S 和P55S)會(huì)引起SPINK1 不表達(dá)［9-12］;Q68R 突變會(huì)增加SPINK1 表達(dá)［11］，但其是引起功能增加還是功能喪失仍須進(jìn)一步研究。目前，最常見的是外顯子3 的101A ＞G 的改變，此改變導(dǎo)致了SPINK1 基因N34S 突變［13］。

1.2 SPINK1 基因突變與胰腺炎的關(guān)系

在胰腺組織中，SPINK1 被認(rèn)為是抑制胰蛋白酶原激活的“第一道防線”，其能抑制總胰蛋白酶20%的活性，當(dāng)SPINK1 的抑制能力減弱時(shí)，可能會(huì)導(dǎo)致胰腺炎的發(fā)生［3］;也有人認(rèn)為SPINK1 在維持胰腺腺泡細(xì)胞的完整性和再生能力的過程中起著重要的作用，所以SPINK1 的基因突變可能會(huì)導(dǎo)致其功能減退或喪失，這可能是胰腺炎發(fā)生發(fā)展過程中的一個(gè)重要的危險(xiǎn)因素［2-3，14-15］。

Aoun 等發(fā)現(xiàn)SPINK1 -N34S 點(diǎn)突變并不提高急性胰腺炎首次發(fā)病的概率，但SPINK1 -N34S 點(diǎn)突變的患者比SPINK1 基因正常的患者發(fā)生急性胰腺炎反復(fù)發(fā)作的概率高出19 倍，所以在急性胰腺炎首次發(fā)作時(shí)就鑒別出SPINK1 -N34S 點(diǎn)突變可以有效的預(yù)防急性胰腺炎的反復(fù)發(fā)作和其向慢性胰腺炎的轉(zhuǎn)化［16-18］。而在印度的急性胰腺炎患者調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，SPINK1 -N34S 點(diǎn)突變較為常見，且與較早的發(fā)病年齡有關(guān)，這表明SPINK1 -N34S 點(diǎn)突變可能降低了急性胰腺炎發(fā)病時(shí)間的閾值［19］。最近，Gao等［20］發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)的中醫(yī)治療可以通過降低SPINK1 和PRSS1 的表達(dá)來達(dá)到減輕急性胰腺炎癥狀的目的。

在慢性胰腺炎患者中，約有5.4%的患者發(fā)生SPINK1 -N34S 突變，且白種人發(fā)生SPINK1 -N34S突變的比例更高。SPINK1 -N34S 突變可能導(dǎo)致特發(fā)性胰腺炎發(fā)病時(shí)間提前，且頻繁的胰腺炎發(fā)作最終可導(dǎo)致胰腺功能不全。所以，Sandhu 等［21］認(rèn)為患有特發(fā)性胰腺炎且伴飲酒史的病人應(yīng)該做SPINK1基因突變的檢測(cè)。事實(shí)上，Cichoz -Lach 等［22］在比較了慢性酒精性胰腺炎、慢性非酒精性胰腺炎和正常對(duì)照組的基因后發(fā)現(xiàn)，SPINK1 -N34S 基因突變可能與慢性酒精性胰腺炎有密切的關(guān)系。

SPINK1 -P55S 在健康人群和胰腺炎患者中的突變發(fā)生率分別為0.5%～3%和0.9%～7.3%，這表明SPINK1 -P55S 突變可能與胰腺疾病有關(guān)［23］。但同時(shí)也有人認(rèn)為D50E、Y54H、R67C 突變導(dǎo)致SPINK1 蛋白錯(cuò)誤折疊使其分泌減少或不分泌，從而增加了胰腺炎發(fā)生的危險(xiǎn)性［23］。

2 SPINK1/Spink3 與自噬

2.1 自 噬

自噬常被稱作“細(xì)胞管家”，其不僅可以清除細(xì)胞內(nèi)的堆積物質(zhì)和損傷物質(zhì)，還可以構(gòu)建一個(gè)細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)和體內(nèi)平衡的動(dòng)態(tài)循環(huán)系統(tǒng);此外自噬還參與細(xì)胞分化，組織重建，生長(zhǎng)抑制和細(xì)胞對(duì)外環(huán)境的適應(yīng)與防御等多種生理功能的過程［24］。

2.2 SPINK1/Spink3 胰腺自噬負(fù)調(diào)節(jié)因子

Ohmuraya 等［25］發(fā)現(xiàn)胰腺腺泡細(xì)胞的Spink3 基因敲除(Spink3-/-)小鼠，其胰腺組織會(huì)發(fā)生明顯的自噬作用。Spink3-/-小鼠與正常的小鼠相比較，Spink3-/--/-小鼠出生后出現(xiàn)嚴(yán)重的發(fā)育遲緩、胰腺逐漸萎縮消失、脾臟較小。在Spink3-/-小鼠的胰腺腺泡細(xì)胞中檢測(cè)到高表達(dá)的自噬體(LC3 -Ⅱ)，且在電子顯微鏡下觀察到Spink3-/-的GFP -LC3小鼠的胰腺腺泡細(xì)胞的胞漿中出現(xiàn)了許多熒光點(diǎn)，在排除了凋亡和壞死的因素后，確認(rèn)小鼠的胰腺腺泡細(xì)胞發(fā)了生明顯的自噬現(xiàn)象，這表明SPINK1/Spink3 對(duì)抑制自噬和對(duì)保持胰腺腺泡細(xì)胞的完整性及再生性起著重要的作用。

同樣，Chera 等［26］報(bào)道對(duì)水蛭行基因沉默的結(jié)果提示，絲氨酸蛋白酶抑制劑Kazal Ι 基因是防止水蛭過度自噬和截肢后行使細(xì)胞保護(hù)功能所必需的。

2.3 SPINK1/Spink3 作為自噬負(fù)調(diào)節(jié)因子與急性胰腺炎的關(guān)系

很久以來，急性胰腺炎被認(rèn)為是胰腺腺泡細(xì)胞內(nèi)胰蛋白酶原不恰當(dāng)?shù)募せ钏?，但是最新的研究表明自噬與急性胰腺炎之間具有一定的聯(lián)系［27］。Hashimoto 等［27］在蛙皮素誘導(dǎo)的急性胰腺炎模型中發(fā)現(xiàn)，隨著急性胰腺炎嚴(yán)重程度的增加，經(jīng)檢測(cè)LC3 -Ⅱ/LC3 -I 比例增大(LC3 -I 蛋白位于細(xì)胞質(zhì)并可以轉(zhuǎn)化為L(zhǎng)C3 -Ⅱ，而LC3 -II 是自噬體膜中的磷脂酰乙醇胺共軛的一種形式，所以LC3 -II/LC3 -Ⅰ比值與自噬體的數(shù)量成正相關(guān))，且電子顯微鏡下觀察到的LC3 的綠色蛋白熒光點(diǎn)也隨之增多，這證實(shí)了自噬與小鼠急性胰腺炎的發(fā)病有關(guān)［27］。同時(shí)，Hashimoto 等［27］在另一個(gè)胰腺腺泡細(xì)胞Atg5 基因(Atg5 基因是自噬體形成的重要基因)敲除的小鼠模型的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，注射蛙皮素后，除了輕微水腫外，既沒有發(fā)現(xiàn)胰蛋白酶原被激活，也沒有觀察到腺泡細(xì)胞嚴(yán)重變性、結(jié)締組織水腫、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等急性胰腺炎發(fā)作的病理征象。這一結(jié)果提示，急性胰腺炎的發(fā)生可能由過度自噬誘導(dǎo)。因此，SPINK1/Spink3 對(duì)胰腺可能具有雙重保護(hù)作用，一是作為胰蛋白酶抑制劑，抑制胰蛋白酶的活性，二是通過自噬的負(fù)調(diào)節(jié)來抑制胰蛋白酶原的激活，從而阻止急性胰腺炎的發(fā)生［27］。

同時(shí)，也有學(xué)者認(rèn)為胰腺腺泡細(xì)胞內(nèi)的自噬通量受損是導(dǎo)致腺泡細(xì)胞的空泡形成和胰蛋白酶原激活的主要原因。Mareninova 等［28］發(fā)現(xiàn)在嚙齒類動(dòng)物的急性胰腺炎模型中，介導(dǎo)胰腺腺泡細(xì)胞空泡形成的自噬通量受損，組織蛋白酶L (CatL)和組織蛋白酶B(CatB)之間的加工能力平衡失調(diào)，導(dǎo)致溶酶體降解功能缺陷，使自噬發(fā)展過程遲緩。

2.4 SPINK1/Spink3 作為自噬負(fù)調(diào)節(jié)因子的信號(hào)傳導(dǎo)通路

因SPINK1/Spink3 與EGF 的結(jié)構(gòu)相似且能與EGFR 結(jié)合，研究者推測(cè)SPINK1/Spink3 作為自噬的負(fù)調(diào)節(jié)因子可能通過激活EGFR 信號(hào)傳導(dǎo)通路行使其作用［29］。但是在特定性胰腺腺泡細(xì)胞EGFR缺失(EGFR-/-)的小鼠中，并未發(fā)現(xiàn)胰腺發(fā)育異常，也未發(fā)現(xiàn)腺泡細(xì)胞出現(xiàn)自噬現(xiàn)象;而且在EGFR-/-小鼠蛙皮素誘導(dǎo)的急性胰腺炎模型中，也未發(fā)現(xiàn)胰腺腺泡細(xì)胞出現(xiàn)自噬現(xiàn)象;同時(shí)Her2 和Her3 蛋白表達(dá)與對(duì)照相比無(wú)明顯變化，提示ERBB家族的其他成員未參與EGFR-/-缺失可能產(chǎn)生自噬后的代償機(jī)制，上述結(jié)果表明SPINK1/Spink3 作為自噬負(fù)調(diào)節(jié)因子的信號(hào)傳導(dǎo)獨(dú)立于EGFR 信號(hào)傳導(dǎo)通路，且很有可能存在其他的信號(hào)傳導(dǎo)途徑［30］。

3 SPINK1/Spink3 與表皮生長(zhǎng)因子

3.1 SPINK1/Spink3 與表皮生長(zhǎng)因子在結(jié)構(gòu)和功能上的關(guān)系

現(xiàn)已證實(shí)，SPINK1/Spink3 與表皮生長(zhǎng)因子(EGF)在結(jié)構(gòu)上約有50%的同源相似性，二者的氨基酸殘基的數(shù)目相似，分子量均約為6kDa［3，23，29］，且SPINK1/Spink3 可以促進(jìn)多種細(xì)胞系的增長(zhǎng)，有人認(rèn)為其在某些細(xì)胞中可能起生長(zhǎng)因子的作用［23，29］。

Ozaki 等［29］發(fā)現(xiàn)SPINK1 可促進(jìn)NIH3T3 成纖維細(xì)胞和人胰腺癌細(xì)胞增生，并與表皮生長(zhǎng)因子受體(EGER)結(jié)合，且SPINK1 與EGFR 結(jié)合的親和力是EGF 的一半，在添加EGFR 抑制劑AG1478 后，EGF 和SPINK1 促進(jìn)AsPC-1 細(xì)胞增生的能力完全被抑制;另有報(bào)道發(fā)現(xiàn)SPINK1/Spink3 可增強(qiáng)潰瘍后細(xì)胞再生和上皮細(xì)胞的遷移過程，且這種遷移可被EGFR 抗體所抑制［3］。

但是SPINK1/Spink3 受體的確定一直存在爭(zhēng)議，有人認(rèn)為PSTI 與分子量為140kD 的細(xì)胞膜多肽相關(guān)聯(lián)，而此分子量明顯區(qū)別于EGFR［3］。

3.2 SPINK1/Spink3 作為生長(zhǎng)因子的信號(hào)傳導(dǎo)通路

SPINK1/Spink3 與EGF 結(jié)構(gòu)相似［3］，且可促使某些細(xì)胞系增生，這種增生作用可能是通過SPINK1/Spink3 與EGFR 結(jié)合，啟動(dòng)EGFR 信號(hào)傳導(dǎo)通路，從而激活其下游信號(hào)傳導(dǎo)分子完成的［29］。Ozaki 等人發(fā)現(xiàn)SPINK1/Spink3 和EGF 可促使MAPK、PI3K/AKT、JAK/STAT 信號(hào)傳導(dǎo)通路下游靶分子磷酸化，促進(jìn)細(xì)胞增生，其中MAPK/ERK 激酶抑制劑U0126 可完全阻斷胰腺腫瘤細(xì)胞增生，所以MAPK 信號(hào)傳導(dǎo)通路可能起主要作用［3，29］。同時(shí)，Ateeq 等人發(fā)現(xiàn)在前列腺癌細(xì)胞中SPINK1 能與EGFR 結(jié)合，且抑制SPINK1 會(huì)減弱EGFR 信號(hào)通路所介導(dǎo)的下游通路，但他們發(fā)現(xiàn)SPINK1 作為生長(zhǎng)因子的促癌作用存在EGFR 依賴性和EGFR 非依賴性兩條途徑，提示SPINK1 在細(xì)胞膜表面或胞漿中可能存在著不同的受體［23，31］。

4 SPINK1/Spink3 作為腫瘤相關(guān)性胰酶抑制因子(TATI)與腫瘤

4.1 TATI 與多種腫瘤之間的關(guān)系

自1982年Stenman 等［32］在一名卵巢癌患者的尿液中發(fā)現(xiàn)了TATI 后，TATI 在腫瘤中的表達(dá)得以廣泛研究。目前有數(shù)據(jù)顯示，體外培養(yǎng)的前列腺癌、十二指腸癌、結(jié)腸癌和膽囊癌細(xì)胞均向培養(yǎng)基中分泌TATI［6，33-34］;血清中TATI 高表達(dá)是不良預(yù)后的標(biāo)志［23］，在部分研究中發(fā)現(xiàn)TATI 的高表達(dá)與前列腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、膀胱癌、上皮卵巢癌、肺癌和雌激素受體陽(yáng)性乳腺癌的不良預(yù)后有關(guān)［35-37］，特別是TATI 可用于鑒別是否發(fā)生結(jié)腸癌的肝轉(zhuǎn)移［38］;血清中的TATI 可作為癌癥診斷的標(biāo)記物［23，39-40］，與其它血清腫瘤標(biāo)記物相比，TATI 在診斷胰腺癌、卵巢癌、食管癌和膀胱癌時(shí)，其診斷效果更加明顯［23］。

Ateeq 等［31］已經(jīng)證明TATI 的過表達(dá)是前列腺癌的致癌原因之一，TATI 可以通過自分泌和旁分泌信號(hào)促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的增殖和侵襲，且其在體內(nèi)可以促進(jìn)前列腺癌的血管內(nèi)滲作用和異種移植腫瘤的生長(zhǎng);并提出可通過TATI 的RNA 干擾和封閉抗體來治療前列腺癌。Lippolis 等［35］最近發(fā)現(xiàn)在前列腺癌中，ERG(一種癌蛋白)和TATI 不能在相同的癌癥細(xì)胞中共同表達(dá)，二者只能表達(dá)其中之一，所以對(duì)于接受根治性前列腺切除術(shù)治療的患者來說，ERG 或TATI 都不是一個(gè)有用的預(yù)測(cè)指標(biāo);Lippolis認(rèn)為可將ERG 和TATI 結(jié)合來消除腫瘤細(xì)胞內(nèi)的基因融合和腫瘤相關(guān)抗原，以達(dá)到治療前列腺癌的目的。

膀胱癌患者血清中的TATI 濃度可用來判斷對(duì)化療的反應(yīng)［23］;但是在接受根治性膀胱癌切除術(shù)的膀胱移行細(xì)胞癌的患者中約有超過一半的患者的血清中不表達(dá)TATI，盡管此時(shí)TATI 已經(jīng)不是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后指標(biāo)，但其仍可做為腫瘤分期的生物標(biāo)志物來輔助臨床的決策［41］。

在乳腺癌中，TATI 不但可抑制乳腺癌細(xì)胞凋亡，影響其生存、侵襲、轉(zhuǎn)移能力，而且還可通過降低caspase 3 和提高bcl2 的水平對(duì)多種抗腫瘤藥物產(chǎn)生耐藥性［36］，影響化療的效果，但TATI 的作用可以被中和抗體抑制，因此有人提出這可能會(huì)是一個(gè)潛在的治療靶點(diǎn)［23，42］。

Koskensalo 等［43］第一次在大腸癌中發(fā)現(xiàn)EGFR與TATI 的聯(lián)合表達(dá)是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后良好的指標(biāo)，EGFR 與TATI 的聯(lián)合表達(dá)作為檢測(cè)大腸癌預(yù)后效果更佳，但其機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

也有人擔(dān)心TATI 可以抑制胰蛋白酶原過早的激活來抑制胰腺炎的發(fā)生，如果人為地干擾這種機(jī)制，則可能會(huì)增加胰腺炎發(fā)生的危險(xiǎn)性［44］。不過，TATI 做為癌癥治療的潛在治療靶點(diǎn)，很可能會(huì)成為未來癌癥治療的熱點(diǎn)。

4.2 TATI 的信號(hào)傳導(dǎo)通路

在腫瘤中TATI 高表達(dá)與其較差預(yù)后之間的關(guān)系，可用TATI 作為生長(zhǎng)因子發(fā)揮作用來解釋［29，31］，所以TATI 可能通過EGFR 信號(hào)傳導(dǎo)通路引起腫瘤的侵襲作用［33，45］。最近，Wang 等［46］在前列腺癌中發(fā)現(xiàn)，SPINK1(TATI)可以通過EGFR 信號(hào)傳導(dǎo)通路(包括MAPK、MEK、ERK 途徑)來促進(jìn)間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)，且可作為體內(nèi)新的預(yù)后標(biāo)志物;同時(shí)Chen等［47］在大腸癌的研究中發(fā)現(xiàn)SPINK1 蛋白可能通過EGFR 信號(hào)傳導(dǎo)通路在腫瘤的增殖和惡性轉(zhuǎn)化方面起著重要的作用。

5 結(jié)語(yǔ)與展望

越來越多的研究者在研究SPINK1/Spink3 多重的生物學(xué)特性，并致力于更清楚地闡明其中的機(jī)制。但是，筆者認(rèn)為目前仍存在一些問題亟待解決:SPINK1/Spink3 的突變與各種類型的胰腺炎之間是否存在必然的聯(lián)系;SPINK1/Spink3 除了作為生長(zhǎng)因子與EGFR 相結(jié)合發(fā)揮作用外，是否存在其他機(jī)制;SPINK1/Spink3 作為自噬的的負(fù)調(diào)節(jié)因子，與其在部分類型腫瘤內(nèi)高度表達(dá)有無(wú)重要聯(lián)系，它們的分子信號(hào)傳導(dǎo)通路有無(wú)關(guān)聯(lián);SPINK1/Spink3 在很多類型腫瘤內(nèi)高度表達(dá)，其在腫瘤發(fā)生發(fā)展的過程中是如何作用的，且其主要機(jī)制和分子信號(hào)傳導(dǎo)通路是怎樣的。

隨著研究的深入，人們會(huì)更清楚地認(rèn)識(shí)到SPINK1/Spink3 與胰腺炎及胰腺癌之間的聯(lián)系，為胰腺疾病的預(yù)防和治療提供一個(gè)新的思路;SPINK1/Spink3 作為某些腫瘤診斷和預(yù)后評(píng)估的標(biāo)志物，會(huì)為腫瘤的病情監(jiān)測(cè)和臨床靶向治療提供一個(gè)新的方向。

［1］ 李海深，曹云，錢朝南.SPINK 家族與人類疾病［J］.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2010，30(5):550 -553.

［2］ Ohmuraya M，Ozaki N，Hirota M，et al. Serine Protease inhibitor kazal type1(SPINK1):Beyond the trypsin inhibitor［J］.Curr Enzyme Inhib，2009，5(2):110 -116.

［3］ Ohmuraya M，Yamamura K.The roles of serine protease inhibitor kazal type1(SPINK1)in pancreatic disease［J］.Exp Anim，2011，60(5):433 -444.

［4］ Masamune A. Recent advances in pancreatology［J］. Front Physiol，2014，5:300.

［5］ Sakata K，Ohmuraya M，Araki K，et al.Generation and analysis of serine protease inhibitor kazal type 3 - Cre driver mice［J］.Exp Anim，2014，63(1):45 -53.

［6］ Boulling A，Witt H，Chandak GR，et al.Assessing the pathological relevance of SPINK1 promoter variants［J］. Eur J Hum Genet，2011，19:1066 -1073.

［7］ Le Marechal C，Chen JM，Le Gall C，et al.Two novel severe mutations in the pancreatic secretory trypsin inhibitor gene(SPINK1)cause familial and/or hereditary pancreatitis［J］.Hum Mutat，2004，23(2):205.

［8］ Kume K，Masamune A，Shimosegawa T，et al.215G N A;IVS3 +2T N Cmutation in the SPINK1 gene causes exon 3 skipping and loss of the trypsin binding site［J］.Gut，2006，55:1214.

［9］ Kiraly O，Wartmann T，Sahin-Toth M.Missense mutations in pancreatic secretory trypsin inhibitor(SPINK1)cause intracellular retention and degradation［J］. Gut，2007，56(10):1433 -1438.

［10］ Boulling A，Le Marechal C，F(xiàn)erec C，et al.Functional analysis of pancreatitis -associated missense mutations in the pancreatic secretory rypsin inhibitor(SPINK1)gene［J］.Eur J Hum Genet，2007，15:936 -942.

［11］ Boulling A，Keiles S，F(xiàn)erec C，et al.Functional analysis of eight missense mutations in the SPINK1 gene［J］.Pancreas，2012，41(2):329 -330.

［12］ Kume K，Masamune A，Ariga H，et al.Do genetic variants in the SPINK1 gene affect the level of serum PSTI?［J］.J Gastroenterol，2012，47(11):1267 -1274.

［13］ Witt H，Luck W，Hennies HC，et al.Mutations in the gene encoding the serine protease inhibitor，Kazal type 1 are associated with chronic pancreatitis［J］.Nat Genet，2000，25(2):213 -216.

［14］ Ling S，F(xiàn)eng T，Jia K，et al. Inflammation to cancer:the molecular biology in the pancreas［J］.Oncol Lett，2014，7(6):1747 -1754.

［15］ Ravi Kanth V，Nageshwar Reddy D.Genetics of acute and chronic pancreatitis:An update［J］. World J Gastrointest Pathophysiol，2014，5(4):427 -437.

［16］ Aoun E，Muddana V，Papachrisyou G，et al.SPINK1 N34S is strongly associated with recurrent acute pancreatitis but is not a risk factor for the first or sentinel acute pancreatitis event［J］. Am J Gastroenterol，2010，105(2):446 -451.

［17］ Pelaez -Luna M，Robles -Diaz G，Canizales -Quinteros S，et al.PRSS1 and SPINK1 mutations in idiopathic chronic and recurrent acute pancreatitis［J］.World J Gastroenterol，2014，20(33):11788 -11792.

［18］ LaRusch J，Whitcomb DC. Genetics of pancreatitis［J］.Curr Opin Gastroenterol，2011，27(5):467 -474.

［19］ Ankur G，Praveer R，Rakesh A，et al. Frequency of SPINK1 N34S mutation in acute and recurrent acute pancreatitis［J］.J Gastroenterol Hepatol，2013，28(3):16.

［20］ Gao Q，Liang N.Integrated traditional Chinese medicine improves acute pancreatitis via the downregulation of PRSS1 and SPINK1［J］.Exp Ther Med，2015，9:947-954.

［21］ Sandhu B，Vitazka P，F(xiàn)erreira - Gonzalez A，et al. Presence of SPINK-1 variant alters the course of chronic pancreatitis［J］.J Gastroenterol Hepatol，2011，26(6):963 -969.

［22］ Cichoz-Lach H，Michalak M，Lis E，et al.The N34S mutation of the SPINK1 gene and alcoholic chronic pancreatitis［J］.Pol Arch Med Wewn，2012，122(6):277 -283.

［23］ Itkonen O，Stenman UH.TATI as a biomarker［J］.Clinica Chimica Acta，2014，20(421):260 -269.

［24］ Mizushima N，Komatsu M. Autophagy:renovation of cells and tissues［J］.Cell，2011，147(4):728 -741.

［25］ Ohmuraya M，Hirota M，Araki M，et al. Autophagic Cell Death of Pancreatic Acinar Cells in Serinen Protease Inhibitor Kazal Type 3 -Deficient Mice［J］.Gastroenterology，2005，129(2):696 -705.

［26］ Chera S，de Rosa R，Galliot B，et al.Silencing of the hydra serine protease inhibitor Kazal1 gene mimics the human SPINK1 pancreatic phenotype［J］. J Cell Sci，2006，119(5):846 -857.

［27］ Hashimoto D，Ohmuraya M，Hirota M，et al.Involvement of autophagy in trypsinogen activation within the pancreatic acinar cells［J］.J Cell Biol，2008，181(7):1065 -1072.

［28］ Mareninova OA，Hermann K，F(xiàn)rench SW，et al. Impaired autophagic flux mediates acinar cell vacuole formation and trypsinogen activation in rodent models of acute pancreatitis［J］.J Clin Invest，2013，123(4):1844.

［29］ Ozaki N，Ohmuraya M，Hirota M，et al.Serine ptotease inhibitor Kazal type 1 promotes proliferation of pancreatic cancer cells through the epidermal growth factor receptor［J］.Mol Cancer Res，2009，7(9):1572 -1581.

［30］ Ozaki N，F(xiàn)ukuchi Y，Tomiyoshi SR，et al.Autophagy regulation in pancreatic acinar cells is independent of epidermal growth factor receptor signaling［J］.Biochem Biophys Res Commun，2014，446(1):224 -230.

［31］ Ateeq B，Tomlins SA，Laxman B，et al. Therapeutic targeting of SPINK1 - positive prostate cancer［J］. Sci Transl Med，2011，3(72):72 ra17.

［32］ Paju A，Stenman UH. Biochemistry and clinical role of trypsinogens and pancreatic secretory trypsin inhibitor［J］.Crit Rev Clin Lab Sci，2006，43(2):103 -142.

［33］ Gouyer V，F(xiàn)ontaine D，Dumont P，et al. Autocrine induction of invasion and metastasis by tumor-associated trypsin inhibitor in human colon cancer cells［J］. Oncogene，2008，27(29):4024 -4033.

［34］ Ogawa M，Yamaguchi N，Mori T，et al.Secretion of pancreatic secretory trypsin inhibitor by cultured human carcinoma cells［J］.J Med，1988，19(1):13 -19.

［35］ Lippolis G，Edsjo A，Stenman UH，et al. A high -density tissue microarray from patients with clinically localized prostate cancer reveals ERG and TATI exclusivity in tumor cells［J］.Prostate Cancer，2013，16(2):145 -150.

［36］ Soon WW，Miller LD，Black MA，et al.Combined genomic and phenotype screening reveals secretory factor SPINK1 as an invasion and survival factor associated with patient prognosis in breast cancer［J］. EMBO Mol Med，2011，3(8):451 -464.

［37］ Grupp K，Diebel F，Sirma H，et al. SPINK1 expression is tightly linked to 6q15 -and 5q21 -deleted ERG -fusion negative prostate cancers but unrelated to PSA recurrence［J］.Prostate，2013，73(15):1690 - 1698.

［38］ Gaber A，Johansson M，Stenman U-H，et al.High expression of tumour-associated trypsin inhibitor correlates with liver metastasis and poor prognosis in colorectal cancer［J］.Br Dent J，2009，100(10):1540 -1548.

［39］ Marshall A，Lukk M，Kutter C，et al.Global Gene Expression profiling reveals SPINK1 as a potential hepatocellular carcinoma marker［J］.PLoS One，2013，8(3):e59459.

［40］ Terry S，Nicolaiew N，Basset V，et al. Clinical value of ERG，TFF3，and SPINK1 for molecular subtyping of prostate cancer［J］.Cancer，2015，121(9):1422 -1430.

［41］ Rink M，Park K，Volkmer BG，et al. Loss of SPINK1 expression is associated with unfavorable outcomes in urothelial carcinoma of the bladder after radical cystectomy［J］.Urol Oncol，2013，31(8):1716 -1724.

［42］ Wendy S，Lance M，Micheal A，et al. Combined genomic and phenotype screening reveals secretory factor SPINK1 as an invasion and survival factor associated with patient prognosis in breast cancer［J］. EMBO Mol Med，2011，3(8):451 -464.

［43］ Koskensalo S，Louhimo J，Hagstrom J，et al. Concomitant tumor expression of EGFR and TATI/SPINK1 associates with better prognosis in colorectal cancer［J］. PLoS One，2013，8(10):e76906.

［44］ Stenman UH. SPINK1:a new therapeutic target in cancer［J］. Clin Chem，2011，57(11):1474 -1475.

［45］ Tomlins SA，Rhodes DR，Yu J，et al. The role of SPINK1 in ETS rearrangement - negative prostate cancers［J］.Cancer Cell，2008，13(6):519 -528.

［46］ Wang C，Wang L，Su B，et al.Serine protease inhibitor kazal type 1 promotes epithelial - mesenchymal transition through EGFR signaling pathway in prostate cancer［J］.Prostate，2014，74(7):689 -701.

［47］ Chen YT，Tsao SC，Yuan SS，et al.Serine protease inhibitor kazal type 1(SPINK1)promotes proliferation of colorectal cancer through the epidermal growth factor as a prognostic marker［J］.Pathol Oncol Res，2015，3.