張小兵，陳小婉，侯 赟，馬 毅，席克虎，桂 巖，王有虎，張福宏，馬春霞，洪 浩，江 英，董 明

(蘭州大學(xué)第一醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，甘肅 蘭州 730000)

長期口服18β-甘草次酸對大鼠血糖、血脂的影響*

張小兵，陳小婉，侯 赟，馬 毅，席克虎，桂 巖，王有虎，張福宏，馬春霞，洪 浩，江 英，董 明

(蘭州大學(xué)第一醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，甘肅 蘭州 730000)

目的：探討長期口服不同劑量的18β-甘草次酸(glycyrrhetinic acid，GA)對大鼠血糖及血脂中三酰甘油、總膽固醇的影響。方法：將120只Wistar大鼠隨機(jī)分成空白對照組30只，低(25 μg/g )、中(50 μg/g )、高(100 μg/g )劑量甘草次酸組各30只，于18β-甘草次酸灌胃第43,99,155,211天及停藥后第29天心臟采血，分別測其血糖、三酰甘油、總膽固醇的含量。結(jié)果：灌胃第43,99,155,211天及停藥后第29天，與同時(shí)間點(diǎn)的空白對照組對比，低、中、高劑量組的血糖有下降趨勢，但差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。灌胃第43,99,155,211天及停藥后第29天，低、中、高劑量組的三酰甘油和總膽固醇與同時(shí)間點(diǎn)的空白對照組對比，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論：長期口服不同劑量的18β-甘草次酸有降低大鼠血糖的趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；對大鼠的三酰甘油和總膽固醇無明顯影響。

18β-甘草次酸；動(dòng)物；大鼠；血糖；三酰甘油；總膽固醇

甘草次酸是甘草的有效成分之一，化學(xué)結(jié)構(gòu)類似于甾體激素，因此具有腎上腺皮質(zhì)激素樣作用。藥理學(xué)研究表明：18β-甘草次酸是一種具有多種療效的化合物，具有抗炎、抗?jié)儭⒖惯^敏、鎮(zhèn)咳、平喘、祛痰等主要作用。由于其具有較好的生理活性、生物相容性和較低的不良反應(yīng)，因而成為重要的醫(yī)藥中間體，具有廣闊的開發(fā)前景[1]。關(guān)于甘草次酸副作用的報(bào)道主要包括長期或大量服用甘草酸制劑產(chǎn)生的類腎上腺鹽皮質(zhì)激素樣作用[2],而其腎上腺皮質(zhì)激素樣的副作用，尤其對血糖、血脂的影響鮮有報(bào)道。有學(xué)者[3-4]研究了短期口服甘草次酸對大鼠血脂的影響，但長期口服甘草次酸對大鼠血脂中三酰甘油、總膽固醇的影響未見報(bào)道。本研究通過觀察長期口服18β-甘草次酸對大鼠血糖及血脂中三酰甘油、總膽固醇的變化，探討其對大鼠血糖、三酰甘油、總膽固醇的影響。

1 材料與方法

1.1 動(dòng) 物

健康Wistar大鼠96只,雌雄各半，質(zhì)量200～300 g，由甘肅中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供，SPF級別動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室符合國家標(biāo)準(zhǔn)，注冊許可證號：SCXK(甘)2011-0001。

1.2 試 劑

18β-甘草次酸，500 g/袋，AR級，甘肅泛植生物科技有限公司產(chǎn)品，批號12081603。

1.3 動(dòng)物分組與給藥

隨機(jī)分為空白對照組30只、低劑量組(25 μg/g)30只、中劑量組(50 μg/g )30只、高劑量組(100 μg/g )30只。按照體表面積法[4]計(jì)算給藥劑量。本實(shí)驗(yàn)中所用大鼠的平均體質(zhì)量為200 g，計(jì)算可得大鼠的體表面積約為0.031 1m2。甘草次酸組參照甘草酸苷片，低、中、高劑量分別為正常給藥量的5倍、10倍及20倍，即25 μg/g 、50 μg/g 、100 μg/g 灌胃，1 d 1次；空白對照組給予等體積的質(zhì)量分?jǐn)?shù)9 g/L的氯化鈉溶液灌胃。每周稱量各組大鼠體質(zhì)量，并以各組大鼠體質(zhì)量的平均值為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算給藥量。動(dòng)物體表面積轉(zhuǎn)換計(jì)算公式[5]如下：

1.4 檢測指標(biāo)

分別于甘草次酸灌胃第43,99,155,211天及停藥后第29天，以100 g/L 水合氯醛麻醉大鼠，心臟取血。采用奧林巴斯AU2700全自動(dòng)生化分析儀檢測不同時(shí)間點(diǎn)大鼠血糖、三酰甘油、總膽固醇。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 各時(shí)間點(diǎn)各組大鼠血糖對比

灌胃第43,99,155,211天及停藥后第29天，與同時(shí)間點(diǎn)的空白對照組對比，低、中、高劑量組的血糖有下降趨勢，但差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

組 別灌胃第43天灌胃第99天灌胃第155天灌胃第211天停藥后第29天空白對照組5.41±1.349.15±1.149.12±2.0211.56±1.328.97±0.23低劑量組4.17±0.17*8.04±0.01*8.07±1.01*10.89±3.20*8.78±0.97*中劑量組4.55±0.83*8.24±0.13*8.30±0.34*11.17±1.48*8.92±1.63*高劑量組4.82±2.23*8.36±0.91*8.62±1.05*11.32±0.98*8.94±1.67*

注：與空白對照組對比，*P>0.05。

2.2 各時(shí)間點(diǎn)各組大鼠三酰甘油和總膽固醇對比

灌胃第43,99,155,211天及停藥后第29天，低、中、高劑量組大鼠的三酰甘油和總膽固醇與同時(shí)間點(diǎn)的空白對照組對比，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2、表3。

組 別灌胃第43天灌胃第99天灌胃第155天灌胃第211天停藥后第29天空白對照組0.42±0.310.63±0.160.71±0.430.79±0.340.49±0.81低劑量組0.45±0.05*0.69±0.19*0.75±0.09*0.81±0.22*0.43±0.21*中劑量組0.41±0.07*0.65±0.43*0.73±0.24*0.83±0.44*0.47±0.15*高劑量組(mmol/L)0.40±0.28*0.66±0.26*0.77±0.25*0.77±0.92*0.44±0.20*

注：與空白對照組對比，*P>0.05。

組 別灌胃第43天灌胃第99天灌胃第155天灌胃第211天停藥后第29天空白對照組1.68±0.221.70±0.211.63±0.171.81±0.341.94±0.07低劑量組1.72±0.32*1.78±0.19*1.65±0.21*1.75±0.37*1.94±0.37*中劑量組1.79±0.12*1.71±0.17*1.59±0.27*1.87±0.23*1.97±0.11*高劑量組1.83±0.24*#1.75±0.19*1.68±0.23*#1.84±0.16*1.95±0.42*#

注：與空白對照組對比，*P>0.05。

3 討 論

甘草次酸分子結(jié)構(gòu)與氫化可的松相似，是甾體激素代謝失活酶(尤其是11β-OHSD2)抑制劑，可提高內(nèi)源性和外源性皮質(zhì)激素的活性。甘草次酸又可作為配體，與皮質(zhì)激素受體結(jié)合呈現(xiàn)出腎上腺皮質(zhì)激素樣作用。研究[6]發(fā)現(xiàn)：長期大劑量攝入甘草次酸，可引起高血壓、鈉潴留、低血鉀，并抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)，即為假醛固酮增多癥,亦稱之為鹽皮質(zhì)激素樣作用；而其所具有的糖皮質(zhì)激素樣作用的副作用的研究較少，尤其對血糖及血脂的影響。

趙海燕等[7]研究發(fā)現(xiàn)：18β-甘草次酸能有效降低2型糖尿病大鼠的血糖和血脂，改善胰島素抵抗。Zakirov UB等[8]研究發(fā)現(xiàn)：甘草次酸有降低實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化性兔的總膽固醇的作用。Eu CH等[9]研究發(fā)現(xiàn)：肥胖大鼠口服甘草次酸100 μg/g 28 d后，血糖下降，三酰甘油和總膽固醇降低。Chandramouli C等[10]研究發(fā)現(xiàn)：高蔗糖喂養(yǎng)的大鼠口服甘草次酸100 μg/g 28d，血糖明顯降低，血脂有所改善。但甘草次酸對正常大鼠血糖、血脂的影響，尤其是長時(shí)間服用的觀察未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)觀察了不同時(shí)間點(diǎn)18β-甘草次酸對大鼠血糖及血脂中三酰甘油、總膽固醇的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：階梯樣灌胃18β-甘草次酸后，隨著用藥時(shí)間的延長，3個(gè)劑量組大鼠的血糖呈逐漸降低的趨勢，但與空白對照組對比，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。有研究發(fā)現(xiàn)[11-13]：隨著大鼠年齡的增長，大鼠血糖會增高，這與本實(shí)驗(yàn)中隨著大鼠年齡的增長血糖會增高相一致，而經(jīng)18β-甘草次酸灌胃后血糖有下降的趨勢，此與之前所報(bào)道的甘草次酸具有降血糖的作用相符合。研究[9]表明：甘草次酸可以恢復(fù)胰腺β細(xì)胞上的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2和葡萄糖激酶的表達(dá)，從而提高胰島素分泌的糖閾閾值。這與糖皮質(zhì)激素促進(jìn)糖原異生、增加肝糖原、肌糖原含量及影響機(jī)體對胰島素的敏感性，從而使血糖升高的機(jī)制不同。這可能說明甘草次酸對血糖的影響不具有糖皮質(zhì)激素樣作用。

本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)：隨著18β-甘草次酸劑量的增加及給藥時(shí)間的延長，其對大鼠血脂中三酰甘油和總膽固醇無顯著影響，與空白對照組對比，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。但孟富敏等[3]研究發(fā)現(xiàn)：灌胃大鼠80 μg/g甘草次酸4 d,大鼠的總膽固醇無明顯升高；而以低劑量的甘草次酸10 μg/g、40 μg/g灌胃，其總膽固醇明顯降低；此外，無論給藥劑量高低，18β-甘草次酸對三酰甘油均有降低作用。Chia Yoke Yin等[14]研究發(fā)現(xiàn)：給予大鼠甘草次酸100 μg/g，24h后胰島素的敏感性有所提高，降低了血糖、三酰甘油、總膽固醇。這與本實(shí)驗(yàn)長時(shí)間口服甘草次酸對大鼠的三酰甘油無影響有所不同(大鼠長時(shí)間口服18β-甘草次酸后，三酰甘油、總膽固醇沒有升高和降低的趨勢)，這說明甘草次酸對血脂的影響可能不僅與其劑量相關(guān)，還與口服時(shí)間的長短相關(guān)。

徐道華等[15]研究發(fā)現(xiàn)：大鼠長期口服糖皮質(zhì)激素，其三酰甘油和總膽固醇顯著升高，而高密度脂蛋白膽固醇降低。這可能是糖皮質(zhì)激素抑制肝細(xì)胞攝入低密度脂蛋白(LDL),減少血漿中LDL向肝內(nèi)轉(zhuǎn)移代謝有關(guān),從而導(dǎo)致總膽固醇升高[16]。此外,長期應(yīng)用糖皮質(zhì)激素可引起胰島素抵抗[17],胰島素抵抗還可導(dǎo)致脂蛋白脂酶活性下降,三酰甘油分解代謝減弱,血液中三酰甘油升高[18]。而Moon MH等[19]研究發(fā)現(xiàn)：18β-甘草次酸能增加甘油釋放，上調(diào)三酰甘油脂肪酶的表達(dá)，降低三酰甘油。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：長期口服18β-甘草次酸對大鼠的總膽固醇和三酰甘油無明顯影響。這與上述觀察到的有所不同，其具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

綜上所述，長期口服不同劑量的18β-甘草次酸有降低大鼠血糖的趨勢，而對大鼠的三酰甘油和總膽固醇無明顯影響。此為18β-甘草次酸的運(yùn)用提供了實(shí)驗(yàn)支持。

[1]Salvi M, Fiore C, Armanini D, et al.Glycyrrhetinic acid-induced permeability transition in rat liver mitochondria[J].Biochem Pharmacol, 2003, 66(12): 2375-2379.

[2]張明發(fā),沈雅琴.甘草酸及其苷元甘草次酸的鹽皮質(zhì)激素樣作用研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代藥物與臨床,2011,26(6)：448-452.

[3]孟富敏,李新芳,崔志剛.甘草次酸鈉的調(diào)血脂及急性毒性作用[J].蘭州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1994,20(4):225-227.

[4]黃能慧,李誠秀,任光友,等.甘草酸降血脂作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1994,19(4):333-335.

[5]徐平.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理與使用操作技術(shù)規(guī)程[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2007：201-204.

[6]楊錦南,朱明.甘草次酸及其衍生物藥理作用研究進(jìn)展[J].中國藥理學(xué)通報(bào), 1997,13(2):110-114.

[7]趙海燕,王彥芳.18β- 甘草次酸對2 型糖尿病大鼠血糖和血脂的影響[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2013,23(24):1-4.

[8]Zakirov UB, Abdullaev AKh.The hypolipidemic and antiatherosclerotic properties of the ammonium salt of glycyrrhetic acid and of 18-dehydroglycyrrhetic acid[J].Eksp Klin Farmakol, 1996, 59(5):53-55.

[9]Eu CH, Lim WY, Ton SH, et al.Glycyrrhizic acid improved lipoprotein lipase expression, insulin sensitivity serum lipid and lipid deposition in high-fat diet-induced obese rats[J].Lipids Health Dis, 2010,9(10):81.

[10]Chandramouli C, Yong ST, Lam YL, et al.Glycyrrhizic acid improves lipid andglucose metabolism in high-sucrose-fed rats[J].Journal of Endocrinology and Metabolism, 2011(1):125-141.

[11]黃小瓊，鄺少松.不同性別、年齡Wistar大鼠常規(guī)血液生化值測定[J].實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué),2006, 26(4)：245-246.

[12]徐秀梅 范英昌.六味地黃丸對糖尿病大鼠影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].現(xiàn)代中醫(yī)藥,2008,28(1)：45-47.

[14]Yoke Yin C, So Ha T, Abdul Kadir K.Effects of Glycyrrhizic Acid on Peroxisome Proliferator-Activated Receptor Gamma(PPARgamma), Lipoprotein Lipase (LPL), Serum Lipid and HOMA-IR in Rats[J].PPAR Res, 2010：530265.

[15]徐道華,周晨慧,劉鈺瑜，等.小檗堿對糖皮質(zhì)激素大鼠血脂異常的調(diào)節(jié)作用[J].時(shí)珍國醫(yī)藥, 2010, 21(5):1033-1034.

[16]Hazra A, Pyszczynski NA, DuBois DC, et al. Modeling of corticosteroid effects on hepatic low-density lipoprotein receptors and plasma lipid dynamics in rats[J].Pharm Res, 2008, 25(4): 769.

[17]徐沖,徐國恒.糖皮質(zhì)激素與脂肪代謝和胰島素抵抗[J].生理科學(xué)進(jìn)展, 2009, 40(1): 19.

[18]Panarotto D remillard P, Bouffard L, et al.Insulin resistance affects the regulation of lipoprotein lipase in the postprandial period and in an adipose tissue-specificmanner[J].Eur J Clin Inves, 2002, 32(2):84.

[19]Moon MH, Jeong JK, Lee YJ, et al.18β-Glycyrrhetinic acid inhibits adipogenic different-tiation and stimulates lipolysis[J].Biochemical and Biophysical Research Communications, 2012, 420(4): 805-810.

(編輯 陶 珠)

1001-6910(2015)07-0048-04 ·實(shí)驗(yàn)研究·

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.07.25

張小兵(1961-),男(漢族)，甘肅蘭州人，主任醫(yī)師，博士，研究方向：鼻黏膜生理方向。

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81160449)；甘肅省衛(wèi)生廳行業(yè)科技計(jì)劃項(xiàng)目(GSWST2011-06)；甘肅省中醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)研究課題(GZK-2011-22)

2015-01-24；

2015-05-28

R22

B