王宇丹等

[摘要] 目的 探討神經(jīng)內(nèi)分泌以及免疫學(xué)部分指標(biāo)在EV71感染所致手足口病患兒病情評(píng)估中的價(jià)值。 方法 將我院收治的210例EV71感染所致小兒手足口病分為普通患兒112例（A組）、重癥患兒57例（B組）和危重型患兒41例（C組）；另選擇同期在我院檢查的健康患兒80例作為對(duì)照組；分別檢測(cè)各組患兒皮質(zhì)醇（COR）、β-內(nèi)啡肽（β-EP）、免疫球蛋白、淋巴細(xì)胞亞群、B淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）、白細(xì)胞介素-13（IL-13）、干擾素-γ（IFN-γ）水平。 結(jié)果 A、B、C三組COR、β-EP、IL-13、IFN-γ、NK細(xì)胞（CD19+）水平顯著高于對(duì)照組（P<0.05）；B組、C組IgG、IgA、IgM水平顯著高于對(duì)照組（P<0.05）；隨著病情的加重，各指標(biāo)水平逐漸升高。B組、C組CD3+、CD4+、CD8+等T細(xì)胞亞群及B淋巴細(xì)胞（CD16+ CD56+）水平顯著低于對(duì)照組，隨著疾病的加重，CD3+、CD4+、CD8+、CD16+ CD56+顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 EV71感染所致手足口病伴有細(xì)胞免疫、體液免疫等免疫功能紊亂，并與疾病進(jìn)展密切相關(guān)；對(duì)患兒進(jìn)行免疫指標(biāo)和神經(jīng)內(nèi)分泌指標(biāo)監(jiān)測(cè)，有助于評(píng)估患兒的病情。

[關(guān)鍵詞] 神經(jīng)內(nèi)分泌指標(biāo)；免疫學(xué)指標(biāo)；腸道病毒71型；手足口病

[中圖分類號(hào)] R725.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701（2015）09-0016-03

Value of neuroendocrine indices in the diagnosis of hand-foot-mouth disease infected by EV71

WANG Yudan1 ZHAO Shiyong2 WU Ye1

1.Department of Pediatrics， Huzhou Central Hospital in Zhejiang Province， Huzhou 313000，China；2.Department of Pediatrics， the Sixth People's Hospital of Hangzhou City， Hangzhou 310023，China

[Abstract] Objective To explore the value of neuroendocrine indices and some immune indices in the assessment of conditions for children patients with hand-foot-mouth disease infected by EV71. Methods All 210 children patients with hand-food-mouth disease infected by EV71 who were admitted to our hospital were divided into three groups， 112 normal patients （group A）， 57 severe patients （group B） and 41 critical patients （group C）； 80 healthy children who received examination in our hospital during the same period of time were selected as control group； levels of COR， β-EP， immune globulin， lymphocyte subpopulation， B lymphocytes， natural killer cells （NK cells）， IL-13， and IFN-γ were tested in each group. Results Levels of COR， β-EP， IL-13， IFN-γ and NK cells（CD19+） in group A， B and C were significantly higher than those in control group（P<0.05）； levels of IgG， IgA and IgM in group B and C were significantly higher than those in control group（P<0.05）； With the conditions became severe， the level of each index gradually rose. Levels of subpopulation of T cells such as CD3+， CD4+， and CD8+ and B lymphocytes（CD16+ CD56+） in group B and C were significantly lower than those in control group， and those levels declined with the condition went severe. The differences between groups were statistically significant（P<0.05）. Conclusion Hand-foot-mouth disease infected by EV71 are complicated with immune dysfunction such as cell-mediated immunity and humoral immunity， which are closely related to disease progress. Therefore， the supervision on immune indices and neuroendocrine indices for children patients is helpful in assessing patients' conditions.

[Key words] Neuroendocrine indices； Immunological indices； Enterovirus 71； Hand-foot-mouth disease

由腸道病毒71型（EV71）感染所致小兒手足口病臨床上較為常見，其臨床表現(xiàn)也呈多樣性[1]。研究顯示[2]EV71病毒存在嗜神經(jīng)性，因此部分患兒合并有神經(jīng)系統(tǒng)損害癥狀；且患兒病情變化迅速，在短時(shí)間內(nèi)會(huì)引起肺水腫，嚴(yán)重時(shí)甚至導(dǎo)致死亡。因此評(píng)估手足口病患兒的病情并采用積極的干預(yù)措施對(duì)提高患兒的預(yù)后有重要意義。田健美[3]研究證實(shí)，手足口病患兒發(fā)生病毒感染后會(huì)引起機(jī)體免疫系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)反應(yīng)，因此我們推測(cè)神經(jīng)內(nèi)分泌指標(biāo)和免疫學(xué)指標(biāo)在患者的病情預(yù)測(cè)、評(píng)估中有重要作用。為證實(shí)上述猜想，本研究對(duì)手足口病患兒的各指標(biāo)進(jìn)行分析，以期探討患兒病情和預(yù)后評(píng)價(jià)的可靠指標(biāo)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2012年7月～2013年7月在我院門診及住院就診210例手足口病患兒作為研究組，男113例，女97例；年齡5個(gè)月～7歲，平均（2.7±0.8）歲；所有患者均經(jīng)核酸檢測(cè)為EV71陽性。按照臨床表現(xiàn)及病情發(fā)展，將210患兒分為普通患兒112例（A組）、重癥患兒57例（B組）、危重型患兒41例（C組）。其中A組表現(xiàn)為手、口、足有皮疹出現(xiàn)，伴或不伴有發(fā)熱癥狀。B組表現(xiàn)為患者伴有精神系統(tǒng)受累癥，包括譫妄、驚厥、嗜睡、嘔吐、共濟(jì)失調(diào)、眼球震顫等；同時(shí)患兒出現(xiàn)腦膜刺激征，肌腱反射消失或明顯減弱。C組表現(xiàn)為①循環(huán)功能不全者，如休克；②出現(xiàn)昏迷、抽搐、腦疝等；③呼吸困難、肺部啰音、紫紺等；當(dāng)出現(xiàn)以上情形之一者則認(rèn)為是危重型手足口病。另選擇同期在我院檢查的健康患兒80例作為對(duì)照組，男47例，女33例；年齡6個(gè)月～6歲，平均（2.5±0.7）歲。兩組性別、年齡等一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 EV71 RNA檢測(cè) 所有患兒在入院24 h進(jìn)行EV71 RNA檢測(cè)：取患兒外周血3 mL，采用逆轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)，熒光定量PCR儀由Applied Biosystems公司提供，試劑盒由上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司提供。

1.2.2 神經(jīng)內(nèi)分泌指標(biāo)檢測(cè) 神經(jīng)內(nèi)分泌指標(biāo)包括皮質(zhì)醇（COR）和β-內(nèi)啡肽（β-EP），其中COR采用化學(xué)發(fā)光分析法進(jìn)行檢測(cè)，試劑盒購(gòu)至上海研域生物科技有限公司；β-EP采用放射免疫吸附法檢測(cè)，試劑盒購(gòu)至上海信然生物科技有限公司；所有操作均參考試劑盒說明書。

1.2.3 免疫學(xué)指標(biāo)檢測(cè) 免疫學(xué)指標(biāo)包括免疫球蛋白、淋巴細(xì)胞亞群、B淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）、白細(xì)胞介素-13（IL-13）、干擾素-γ（IFN-γ）；其中IL-13、IFN-γ采用化學(xué)發(fā)光分析法進(jìn)行檢測(cè)，試劑盒購(gòu)至上海研域生物科技有限公司；免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）采用單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)，試劑盒由上海源葉生物科技有限公司提供；外周血T細(xì)胞亞群、B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞用BD FACSAria II流式細(xì)胞儀（BD公司）進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)量資料用（x±s）表示，若方差齊采用方差分析，方差不齊采用秩和檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組神經(jīng)內(nèi)分泌指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果比較

A、B、C三組COR、β-EP水平顯著高于對(duì)照組，隨著病情的加重，COR、β-EP水平逐漸升高，組間相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

表1 各組神經(jīng)內(nèi)分泌指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果比較（x±s）

2.2 各組免疫球蛋白水平比較

B組、C組IgG、IgA、IgM水平顯著高于對(duì)照組；而A組與對(duì)照組各免疫球蛋白水平相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；隨著病情的加重，IgG、IgA、IgM水平顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

表2 各組免疫球蛋白水平比較（x±s，g/L）

2.3 各組外周血T細(xì)胞亞群、B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞水平比較

B組、C組CD3+、CD4+、CD8+等T細(xì)胞亞群及B淋巴細(xì)胞（CD16+ CD56+）水平顯著低于對(duì)照組，而A組與對(duì)照組T細(xì)胞亞群水平相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；隨著疾病的加重，CD3+、CD4+、CD8+、CD16+ CD56+顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；A組、B組、C組NK細(xì)胞（CD19+）水平均顯著高于對(duì)照組，隨著病情的加重，NK細(xì)胞水平顯著升高，差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表3。

2.4 各組IL-13、IFN-γ免疫指標(biāo)水平比較

A、B、C三組IL-13、IFN-γ水平顯著高于對(duì)照組，隨著病情的加重，IL-13、IFN-γ水平逐漸升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表4。

3 討論

手足口病是由腸道內(nèi)病毒感染所導(dǎo)致的傳染性疾病，好發(fā)于7歲以下的小兒；手足口病病原主要以柯薩奇病毒A和腸道病毒71型（EV71）為主[4]，其中EV71病毒存在嗜神經(jīng)性，多數(shù)患兒合并有神經(jīng)系統(tǒng)損害癥狀?；純涸谠缙谥饕憩F(xiàn)為咽痛、高熱、水皰等，均屬于普通感染；少數(shù)患兒繼發(fā)性出現(xiàn)意識(shí)障礙、昏迷、腦膜刺激征時(shí)則屬于重癥手足口病。由于重癥手足口病的危害較大，因此及時(shí)評(píng)估患者的病情并采取積極的治療措施對(duì)提高患兒的療效、改善預(yù)后具有重要的意義。

大量研究顯示[5，6]，感染EV71病毒所致手足口病會(huì)使患兒的應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)，其中一個(gè)重要的表現(xiàn)是介導(dǎo)COR的分泌。本研究中隨著病情的加重，COR水平逐漸升高，危重型患兒體內(nèi)COR水平高出正常值的15倍。這是因?yàn)椋珻OR能有效增強(qiáng)機(jī)體對(duì)外界刺激的防御作用，但是當(dāng)病情沒有得到有效控制，應(yīng)激反應(yīng)過度時(shí)會(huì)導(dǎo)致COR過度分泌，進(jìn)而引起血糖升高、腦組織缺血、神經(jīng)病變等[7]。由于EV71病毒具有一定的嗜神經(jīng)性，因此患兒的神經(jīng)系統(tǒng)會(huì)出現(xiàn)損害；當(dāng)神經(jīng)系統(tǒng)損害時(shí)會(huì)刺激腦垂體釋放大量的β-EP[8]，部分β-EP會(huì)進(jìn)入血液，病情越重血漿β-EP水平越高。本研究中危重患兒血漿β-EP水平最高，普通型最低，但均顯著高于對(duì)照組。因此我們推測(cè)手足口病患者呼吸抑制、肺水腫等均是由β-EP升高所致，這也證實(shí)β-EP可以作為評(píng)價(jià)病情的指標(biāo)之一。

許紅梅[9]對(duì)EV71感染后患兒的免疫功能進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn)，免疫性損傷是導(dǎo)致手足口病的主要原因之一。在感染初期，機(jī)體原有的免疫系統(tǒng)對(duì)EV71病毒起到抵抗作用；隨著病情的加重，患兒T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞發(fā)生變化，導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)出現(xiàn)大量炎癥因子和抗體。本研究中，B組、C組IgG、IgA、IgM水平顯著高于對(duì)照組；而A組與對(duì)照組各免疫球蛋白水平相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；隨著病情的加重，IgG、IgA、IgM水平顯著升高，說明感染重癥期患兒體內(nèi)體液免疫功能亢進(jìn)，產(chǎn)生大量免疫球蛋白保護(hù)機(jī)體；但是免疫亢進(jìn)又會(huì)在一定程度上引起免疫損傷，致使患兒病情進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為危重癥。國(guó)外研究亦證實(shí)手足口病是一種自身免疫性疾病，本研究結(jié)果也證實(shí)此結(jié)論。這一結(jié)果也提示免疫球蛋白對(duì)重型和危重型手足口病患兒的檢測(cè)價(jià)值更高。另外B組、C組T細(xì)胞亞群、B淋巴細(xì)胞水平顯著低于對(duì)照組，A組與對(duì)照組無明顯差異；A組、B組、C組NK細(xì)胞水平均顯著低于對(duì)照組，隨著病情的加重NK細(xì)胞水平顯著升高。曾慧慧[10]報(bào)道稱手足口病患兒在病毒感染下激活體液免疫和細(xì)胞免疫，其中體液免疫被過度激活，而細(xì)胞免疫則激活不足。這一結(jié)論被上述結(jié)果證實(shí)，提示手足口病患兒存在細(xì)胞免疫功能低下，可以將細(xì)胞免疫指標(biāo)作為診斷病情的參考指標(biāo)之一；其中B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞可以作為手足口病的評(píng)價(jià)指標(biāo)，而T細(xì)胞亞群對(duì)重癥型患兒評(píng)價(jià)的價(jià)值更高；與劉亞敏[11]報(bào)道結(jié)論一致。

正常情況下，機(jī)體內(nèi)多種細(xì)胞因子相互發(fā)生制約，共同維持機(jī)體免疫的平衡；當(dāng)EV71病毒感染后，機(jī)體免疫功能被激活，從而釋放大量細(xì)胞因子[12]。細(xì)胞因子主要體現(xiàn)在兩個(gè)方面：免疫防護(hù)需要細(xì)胞因子參與，細(xì)胞因子也會(huì)刺激免疫損傷。IL-13主要由Th2細(xì)胞分泌，促進(jìn)B細(xì)胞活化，介導(dǎo)體液免疫。IFN-γ由Th1細(xì)胞分泌，介導(dǎo)機(jī)體的細(xì)胞免疫反應(yīng)。本研究A、B、C三組IL-13、IFN-γ水平顯著高于對(duì)照組，隨著病情的加重，IL-13、IFN-γ水平逐漸升高，這提示病情跟炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，兩種因子分別增高，體液免疫和細(xì)胞免疫相互拮抗，共同促進(jìn)了疾病的進(jìn)展。

綜上所述，EV71感染所致手足口病伴有細(xì)胞免疫、體液免疫等免疫功能紊亂，并與疾病進(jìn)展密切相關(guān)；對(duì)患兒進(jìn)行免疫指標(biāo)和神經(jīng)內(nèi)分泌指標(biāo)監(jiān)測(cè)，有助于評(píng)估患兒的病情。

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（收稿日期：2014-11-27）