潘敏文小燕曾池清梁曉誼
(1肇慶市第二人民醫(yī)院臨床藥學(xué)科,廣東 肇慶 526000;2廣東省腫瘤防治中心中藥房,廣州 510000;3肇慶市端州區(qū)華佗醫(yī)院檢驗(yàn)科,肇慶 526000)
利用最小抑菌濃度確定黃連液及麝香治療糖尿病足的最佳藥物濃度
潘敏1文小燕1曾池清2梁曉誼3
(1肇慶市第二人民醫(yī)院臨床藥學(xué)科,廣東 肇慶 526000;2廣東省腫瘤防治中心中藥房,廣州 510000;3肇慶市端州區(qū)華佗醫(yī)院檢驗(yàn)科,肇慶 526000)
目的:確定黃連液及麝香治療糖尿病足的最佳藥物濃度。方法:將實(shí)驗(yàn)菌種(產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)大腸埃希菌和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌)接種到不同濃度的中藥培養(yǎng)基上,35℃培養(yǎng)24 h,報(bào)告菌落數(shù),計(jì)算出不同濃度的中藥液對(duì)細(xì)菌的抑制效果,以驗(yàn)證黃連液和麝香對(duì)已知菌的抑菌效果。結(jié)果:?jiǎn)斡命S連液的濃度128 mg/mL時(shí)抑菌效果最佳;黃連液聯(lián)合麝香時(shí),黃連液32 mg/mL、麝香30 mg/mL的抑菌效果最佳。結(jié)論:最佳濃度的黃連液和麝香聯(lián)合應(yīng)用,能有效抑制針對(duì)糖尿病足所產(chǎn)生的多重耐藥細(xì)菌,臨床效果顯著。
最佳藥物濃度;抑菌濃度;黃連液;麝香;糖尿病足
糖尿病足是糖尿?。╠abetes mellitus,DM)常見的慢性并發(fā)癥之一。據(jù)報(bào)道,全球有1.5億糖尿病患者,有15%的糖尿病患者在其生活的某一階段會(huì)發(fā)生足潰瘍或壞疽[1]。糖尿病足是中晚期糖尿病患者致殘、致死的重要原因。與普通人群相比,糖尿病患者下肢截肢的機(jī)會(huì)要高出15~ 40倍,在老年人中的危險(xiǎn)性更高[2]。在我國(guó)糖尿病人群中15%~ 18%的患者有足部并發(fā)癥,截肢率高達(dá)20%~ 30%[3]?,F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)于糖尿病足主要是基礎(chǔ)治療和局部治療兩方面[3],治療上仍存在諸多的限制,療效也不甚理想。中醫(yī)藥治療糖尿病足不良反應(yīng)小,安全性高,改善臨床癥狀的作用明顯,可降低截肢率,其治療手段多種多樣,可以彌補(bǔ)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)不足之處。在臨床上應(yīng)用黃連液外敷治療糖尿病足,效果良好,在原有的基礎(chǔ)上研究發(fā)現(xiàn)黃連液聯(lián)合麝香外敷治療糖尿病足效果顯著。麝香具有促潰瘍面加快愈合的作用,在治療過(guò)程中發(fā)現(xiàn)黃連液聯(lián)合麝香對(duì)糖尿病足的多種耐藥細(xì)菌有強(qiáng)大的殺菌和抑菌作用,本試驗(yàn)通過(guò)藥敏試驗(yàn)篩選確定黃連液聯(lián)合麝香治療糖尿病足的最佳藥物濃度,在臨床上收到了顯著的療效,且安全性良好,現(xiàn)報(bào)道如下。
1.1 試驗(yàn)與設(shè)計(jì)
采用隨機(jī)、平衡對(duì)照試驗(yàn)設(shè)計(jì)。
1.2 藥品與制備
黃柏、黃連、黃芩、梔子、麝香(廣東和翔中藥飲片廠提供)。取黃柏、黃連、黃芩、梔子,煎煮濃縮后制備成黃連液,把黃連液濃縮成流浸膏劑,即每1 mL藥液相當(dāng)于1 g原生藥材;麝香分別用乙醇溶解成10,20,30 mg/mL 3個(gè)濃度。
1.3 耐藥菌株篩選
收集2012-2013年期間住院治療的糖尿病足患者,取足部潰瘍、腐爛標(biāo)本經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)、鑒定為細(xì)菌性感染的病原菌138株,其中104例(產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)大腸埃希菌48株和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)56株)作療效觀察組,34例作對(duì)照組。各菌株固體瓊脂穿刺培養(yǎng),石臘封存。
1.4 試驗(yàn)方案
1.4.1 將黃連液進(jìn)行濃度遞減稀釋,稀釋后的藥物濃度分別為 1 280,640,320,160,80,40,20,10,5,2.5 mg/mL,分裝成 4組試管,每組 20管,A組是黃連液,并在B、C、D組試管中分別加入相當(dāng)于 10,20,30 g麝香溶解物,充分混勻。然后以1∶9的比例將已倍比稀釋的不同濃度藥液加入M-H瓊脂中,充分混勻后傾入無(wú)菌平皿中,此時(shí)A組含藥瓊脂的含藥濃度為128,64,32,16,8,4,2,1,0.5,0.25 mg/mL,B組為 128/1,64/1,32/1,16/1,8/1,4/1,2/1,1/1,0.5/1,0.25/1 mg/mL,C組為128/2,64/2,32/2,16/2,8/2,4/2,2/2,1/2,0.5/2,0.25/2 mg/mL,D組為 128/3,64/3,32/3,16/3,8/3,4/3,2/3,1/3,0.5/3,0.25/3 mg/mL。
1.4.2 藥敏試驗(yàn) 將4組含不同濃度抗菌藥物的瓊脂平板和一個(gè)不含藥物作空白對(duì)照用的瓊脂平板的底部分別用筆畫出放射狀小格并編號(hào)。吸取制備好的菌液1~ 2l點(diǎn)種于含藥瓊脂平板表面相應(yīng)的小格內(nèi),每點(diǎn)菌落數(shù)約1×104cfu直徑5~ 8 mm的菌斑。置35℃ 18~ 24 h,觀察結(jié)果。一個(gè)平板接種12個(gè)菌株,可同時(shí)測(cè)定12個(gè)菌株的最小抑菌濃度(MIC)。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間比較用單因素方差分析,P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1 最佳藥物濃度確定
根據(jù)試驗(yàn)確定了黃連液聯(lián)合麝香治療糖尿病足時(shí)黃連液的最佳濃度為:原配方中藥的總生藥量是60 g(黃連,黃柏,黃芩,梔子各15 g),煎取藥液250 mL,中藥藥液按照1 g/mL生藥量[5]計(jì)算濃度是24 mg/mL,按照實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)把生藥量增加至 80 g(黃連,黃柏,黃芩,梔子各20 g),煎取藥液250 mL,才可達(dá)到32 mg/mL的要求,麝香的濃度為30 mg/mL。4個(gè)實(shí)驗(yàn)組對(duì)產(chǎn)ESBLs的大腸埃希菌和MRSA的MIC見表1~4。結(jié)果判定以實(shí)驗(yàn)菌株在最低濃度即被抑制表示對(duì)該組方敏感。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:A、B、C、D組均能對(duì)產(chǎn)ESBLs的大腸埃希菌和MRSA產(chǎn)生抑菌效果,A、B、C組間無(wú)顯著差異 (A、B組間比較,P=0.976 3;A、C組間比較,P=0.928 6;B、C組間比較,P=0.952 3)。D組在最低濃度時(shí)抑菌作用明顯高于A、B、C組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(A、D組間比較,P=0.000 0;B、D組間比較,P=0.000 0;C、D組間比較,P= 0.000 0),表明黃連液聯(lián)合麝香治療糖尿病足療效確切,且麝香的濃度直接影響產(chǎn) ESBLs的大腸埃希菌和MRSA的抑菌效果。
2.2 初步臨床效果
實(shí)驗(yàn)治療組方法:清洗創(chuàng)面后,用熬制的黃連液(黃連、黃柏、黃芩、梔子)浸泡20 min,使?jié)兠娉浞纸菰谒?,保持水溫?5~ 40℃;浸泡完畢用無(wú)菌紗布拭干;在創(chuàng)面上均勻涂布用乙醇混合的麝香粉劑 (廣東和翔中藥飲片廠提供,0.2 g/支)。蓋無(wú)菌紗布,用膠布固定,每1~ 3天換藥1次。
實(shí)驗(yàn)對(duì)照組方法:清創(chuàng)祛除壞死組織。先用雙
表1 A組對(duì)兩種細(xì)菌MIC (mg/mL)
表2 B組對(duì)兩種細(xì)菌MIC (mg/mL)
表3 C組對(duì)兩種細(xì)菌MIC (mg/mL)
表4 D組對(duì)兩種細(xì)菌MIC (mg/mL)
氧水清洗創(chuàng)面,然后用生理氯化鈉溶液沖洗。再將慶大霉素注射液20萬(wàn)U,山莨菪堿注射液20 mg,普通胰島素10 U 3藥混合,用上述混合液浸透無(wú)菌紗布濕敷于創(chuàng)面,15 min后換用生理氯化鈉溶液+利凡諾混合制成0.3%的溶液濕敷;20 min后換無(wú)菌紗布覆蓋固定。每天換藥1~ 2次。
Determination of Optimal Drug Concentration of Coptis Chinensis Liquid and Musk in the Treatment of Diabetic Foot Using Minimum Inhibitory Concentration
Pan Min1,Wen Xiaoyan1,Zeng Chiqing2,Liang Xiaoyi3(1 Clinical Pharmacy of The Second People’s Hospital of Zhaoqing City,Guangdong Zhaoqing 526000,China;2 Pharmacy of Cancer Center of Guangdong Province,Guangzhou 510000;3 Clinical Laboratory of Huatuo Hospital of Duanzhou District of Zhaoqing City, Zhaoqing 526000)
Objective:To determine the optimal drug concentration of coptis chinensis liquid and musk in the treatment of diabetic foot.Methods:The experimental strains(Escherichia coli and Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA)which can produce the extended-spectrum β-lactamases (ESBLs))were inoculated into the culture medium of traditional Chinese medicine at different concentrations,at 35℃ for 24 hours, reporting the number of colony forming unit and calculating the bacteriostatic effect of different concentrations of traditional Chinese medicine to verify the bacteriostatic effect of coptis chinensis liquid and musk to the known bacteria.Results: The best bacteriostatic effect was obtained when simply using the coptis chinensis liquid at the concentration of 128 mg/mL.The best bacteriostatic effect was found when combined use of coptis chinensis liquid at the concentration of 32 mg/mL and musk at the weight of 30 mg/mL.Conclusion:The optimal concentration of the combined use of coptis chinensis liquid and musk can effectively inhibit the multiple drug-resistant bacteria produced by diabetic foot,and a remarkable clinical effect was showed.
Optimal Drug Concentration;Inhibitory Concentration;Coptis Chinensis Liquid;Musk;Diabetic Foot
10.3969/j.issn.1672-5433.2015.11.004
潘敏,女,副主任藥師。研究方向:臨床藥學(xué)、藥劑學(xué)。通訊作者E-mail:amypm_2006@126.com