陳英紅等

[摘要] 目的 研究膽囊炎合劑與其功能主治相關(guān)的主要藥效學(xué)。 方法 采用石膽酸引起的豚鼠急性膽囊炎模型觀察膽囊炎合劑對(duì)膽囊炎的作用；采用四氯化碳及α-萘異硫氰酸酯所致動(dòng)物急性肝損傷及黃疸型肝損傷模型觀察膽囊炎合劑對(duì)肝損傷的保護(hù)作用；采用二甲苯引起的小鼠耳水腫和酵母所致大鼠發(fā)熱方法觀察其消炎解熱作用。 結(jié)果 與石膽酸所致的急性膽囊炎模型組比較，豚鼠的肝臟、脾臟指數(shù)明顯降低（P < 0.05或P < 0.01）；與四氯化碳所致急性肝損傷模型組和α-萘異硫氰酸酯致黃疸型肝損傷模型組比較，血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、總膽紅素活性顯著降低（P < 0.05）；膽囊炎合劑對(duì)二甲苯引起的炎癥及酵母導(dǎo)致的發(fā)熱也有顯著的抑制作用（P < 0.05或P < 0.01）。 結(jié)論 膽囊炎合劑具有利膽、消炎、退黃及解熱作用。

[關(guān)鍵詞] 膽囊炎合劑；急性膽囊炎；肝損傷；藥效學(xué)

[中圖分類號(hào)] R285.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2015）06（c）-0008-05

Study on main pharmacodynamics of Cholecystitis Mixture

CHEN Yinghong1 XU Hong1 DONG Fang1 LUO Haoming2 LIU Wei1 JIANG Xiangzhi3▲

1.Institute of Chinese Materia Medica， Jilin Academy of Chinese Medical Sciences， Jilin Province， Changchun 130012， China； 2.College of Pharmacy， Changchun University of Chinese Medicine， Jilin Province， Changchun 130117， China； 3.Department of Pharmacy， Japan-China Union Hospital of Jilin University， Jilin Province， Changchun 130021， China

[Abstract] Objective To study the main pharmacodynamics of Cholecystitis Mixture related to its major functions. Methods The model of guinea pigs with acute cholecystitis caused by lithocholic acid was used to observe the function of Cholecystitis Mixture for cholecystitis； the models of animals with acute liver injury and liver injury of jaundice type caused by carbon tetrachloride and α-naphthylisothiocyanate were used to observe the protective effect of Cholecystitis Mixture for liver injury； the methods of ear edema of mice caused by xylene and fever of rats caused by yeast were used to observe the anti-inflammatory and antipyretic functions. Results Compared with model of acute cholecystitis caused by lithocholic acid， the liver and spleen indexes of guinea pigs were decreased significantly （P < 0.05 or P < 0.01）； compared with the model of acute liver injury caused by carbon tetrachloride and the model of liver injury of jaundice type caused by α-naphthylisothiocyanate， the activity of alanine transaminase， glutamic oxalacetic transaminase， total bilirubin was decreased significantly （P < 0.05）； Cholecystitis Mixture had marked inhibition effects for inflammations caused by xylene and fever caused by yeast （P < 0.05 or P < 0.01）. Conclusion Cholecystitis Mixture has the effects of choleretic effect， anti-inflammation， removing jaundice and relieving fever.

[Key words] Cholecystitis Mixture； Acute cholecystitis； Liver injury； Pharmacodynamics

按照吉林省對(duì)口援疆規(guī)劃的總體安排和部署，為了充分發(fā)揮新疆阿勒泰地區(qū)珍貴藥材的資源優(yōu)勢(shì)，哈醫(yī)藥在疾病治療、預(yù)防保健等方面的傳統(tǒng)醫(yī)藥優(yōu)勢(shì)，對(duì)目前臨床使用安全可靠、療效確切、用量較大的處方做出篩選，幫助新疆人民研究開(kāi)發(fā)哈醫(yī)藥制劑，實(shí)現(xiàn)資源共享、互惠互利、共同發(fā)展的目標(biāo)。膽囊炎合劑由一枝蒿、茵陳、大黃、金絲桃、菊苣和綿馬貫眾六味藥制備而成。本方為新疆哈薩克名老中醫(yī)經(jīng)驗(yàn)方，臨床應(yīng)用多年，療效顯著?，F(xiàn)作為院內(nèi)制劑進(jìn)行開(kāi)發(fā)，根據(jù)其功能與主治對(duì)其進(jìn)行了藥效學(xué)的系統(tǒng)研究實(shí)驗(yàn)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 材料與方法

1.1 試藥

膽囊炎合劑由新疆阿勒泰地區(qū)哈薩克醫(yī)院提供，為棕褐色液體，規(guī)格：每瓶100 mL，批號(hào)：20131204，臨床用量：口服，25 mL/次，2次/d。消炎利膽片由廣州白云山和記黃埔中藥有限公司生產(chǎn)，規(guī)格：薄膜衣小片（0.26 g，相當(dāng)于飲片2.6 g），產(chǎn)品批號(hào)：G2A009，功能主治：清熱、祛濕、利膽，用于肝膽濕熱所致的脅痛、口苦、急性膽囊炎、膽管炎見(jiàn)上述證候者，用法用量：口服，6片/次，3次/d。

1.2 動(dòng)物

昆明種大鼠，體重160～200 g，雄性，小鼠，體重22～25 g，均購(gòu)自吉林大學(xué)白求恩醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，合格證號(hào)：SCXK（吉）2008-0005；豚鼠，自由攝食飲水。豚鼠，體重250～350 g，雄性，購(gòu)自長(zhǎng)春生物制品研究所有限責(zé)任公司，合格證號(hào)：SCXK（吉）2008-0003。

1.3 方法

1.3.1 對(duì)石膽酸所致豚鼠急性膽囊炎的影響[1-3] 取60只豚鼠隨機(jī)分成6組，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性藥對(duì)照組（消炎利膽片0.8 g/kg）、膽囊炎合劑高、中、低劑量組（12、6、3 mL/kg），每組10只。除正常對(duì)照組外，每組按100 mg/kg腹腔給予豚鼠膽石酸（LCA），每日1次，連續(xù)16 d，正常對(duì)照組等容量灌服常水，自由采食和飲水，供給充足青菜。造模后每組給予相應(yīng)藥物（正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予等容量常水），每日1次，連續(xù)給藥15 d，處死前1 d稱體重，禁食16 h。第15天，藥后1 h處死豚鼠，用注射器吸取膽囊膽汁計(jì)量，取肝臟稱重。膽囊組織用10%甲醛液（FAA）固定以備進(jìn)行組織病理學(xué)檢驗(yàn)。

1.3.2 對(duì)大鼠四氯化碳（CCl4）急性肝損傷模型的保護(hù)作用[4-13] 取60只大鼠隨機(jī)分為6組，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性藥對(duì)照組（消炎利膽片1 g/kg）、膽囊炎合劑高、中、低劑量組（14、7、3.5 mL/kg），每組10只，每天給藥1次，連續(xù)10 d。末次給藥后1 h，給大鼠（正常對(duì)照組除外）腹腔注射5 mL/kg、2% CCl4花生油，20 h后斷頭取血，分離血清，測(cè)定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）及血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）含量。

1.3.3 對(duì)α-萘異硫氰酸酯（ANIT）致黃疸型肝損傷小鼠的保護(hù)作用[14-18] 將60只小鼠隨機(jī)分成6組，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性藥對(duì)照組（消炎利膽片1.4 g/kg）、膽囊炎合劑高、中、低劑量組（20、10、5 mL/kg），每組10只，每天給藥1次，連續(xù)10 d。末次藥后1 h，正常對(duì)照組灌胃給予花生油，其余各組灌胃給予ANIT 40 mg/kg（花生油配制），造成小鼠急性肝損傷模型，16 h（禁食不禁水）后摘眼球采血，分離血清，檢測(cè)血清ALT、AST、總膽紅素（TB）。

1.3.4 對(duì)二甲苯所致小鼠耳水腫的影響[19-22] 取50只雄性小鼠隨機(jī)分為5組，分別為正常對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照藥組（消炎利膽片1.4 g/kg）、膽囊炎合劑高、中、低劑量組（20、10、5 mL/kg），每組10只，每天給藥1次，連續(xù)10 d。末次給藥40 min后，于小鼠左耳涂二甲苯20 μL，20 min后處死小鼠，利用9 mm鐵沖下動(dòng)物左右耳，以動(dòng)物左右耳片重之差值作為腫脹度。

1.3.5 對(duì)酵母所致大鼠發(fā)熱的影響[23-26] 取肛溫正常的雄性大鼠60只，隨機(jī)分為6組，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性藥對(duì)照組（消炎利膽片1 g/kg）、膽囊炎合劑高、中、低劑量組（14、7、3.5 mL/kg），每組10只，每天給藥1次，連續(xù)10 d。末次給藥前4 h以15 mL/kg皮下注射20%干酵母，于注射前測(cè)量正常肛溫2次，取其均值作為正常體溫，并于給藥后1、2、3 h各測(cè)動(dòng)物肛溫1次，測(cè)量值與正常值之差為發(fā)熱度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)石膽酸所致豚鼠急性膽囊炎的影響

結(jié)果表明，模型對(duì)照組膽囊壁明顯增厚，多數(shù)黏膜增生，甚或增生的黏膜連接成網(wǎng)，少數(shù)黏膜下血管擴(kuò)張充血明顯，伴不同程度水腫及大量以淋巴細(xì)胞為主的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，炎性反應(yīng)重者膽囊內(nèi)看見(jiàn)紅染的絮狀物質(zhì)和脫落壞死的黏膜上皮，見(jiàn)圖1A。正常對(duì)照組豚鼠膽囊可見(jiàn)四層結(jié)構(gòu)，黏膜層上皮規(guī)整，為單層立方狀，黏膜下層、肌層及外膜未見(jiàn)明顯炎細(xì)胞浸潤(rùn)及血管擴(kuò)張充血及出血改變，為豚鼠正常膽囊組織結(jié)構(gòu)，見(jiàn)圖1B。模型復(fù)制成功，膽囊壁增厚，黏膜上皮增生伴黏膜下血管擴(kuò)張充血及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)符合膽囊炎改變，試驗(yàn)藥的高劑量對(duì)膽囊炎有明顯的改善作用，陽(yáng)性藥和試驗(yàn)藥的中劑量對(duì)膽囊炎改善作用次之，試驗(yàn)藥的低劑量組效果最差，見(jiàn)圖1C～F。

與模型對(duì)照組比較，膽囊炎合劑高、中劑量組可明顯降低由石膽酸所致的急性膽囊炎，豚鼠的肝臟指數(shù)明顯降低，膽汁量也明顯減少，表明膽囊炎合劑具有明顯的利膽作用，見(jiàn)表1。與模型對(duì)照組比較，膽囊炎合劑高劑量組對(duì)石膽酸引起的豚鼠膽囊炎有較好的治療作用，見(jiàn)表2。

2.2 對(duì)大鼠四氯化碳急性肝損傷模型的保護(hù)作用

CCl4致小鼠急性肝損傷模型是經(jīng)典化學(xué)性肝損傷動(dòng)物模型。CCl4在肝細(xì)胞內(nèi)經(jīng)細(xì)胞色素P450激活生成大量自由基，破壞肝細(xì)胞膜，導(dǎo)致轉(zhuǎn)氨酶釋放入血。AST、ALT是反映肝損傷最早的、最敏感的指標(biāo)[5]。當(dāng)肝受到損害時(shí)AST、ALT從肝細(xì)胞內(nèi)逸出而進(jìn)入血液，致使血清中兩者含量升高，其升高程度與肝損傷程度呈正相關(guān)。由表3結(jié)果可見(jiàn)，給予CCl4后，模型對(duì)照組大鼠血清ALT、AST明顯升高，膽囊炎合劑能明顯對(duì)抗這種改變，且以高劑量尤為顯著，說(shuō)明其對(duì)CCl4造成的大鼠急性肝損傷具有明顯的保護(hù)作用。

2.3 對(duì)α-萘異硫氰酸酯所致小鼠黃疸型肝損傷的影響

ANIT是一種造成膽汁瘀積的毒物。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，ANIT于小鼠中毒后48～72 h肝損傷明顯，肝細(xì)胞變性壞死，小葉間膽管增生，膽管上皮細(xì)胞腫脹，部分壞死的上皮細(xì)胞脫落后阻塞膽管，導(dǎo)致血清AST、ALT、TB顯著升高，可作為退黃藥物研究的模型[15]。由表4結(jié)果可見(jiàn)，給予ANIT后，模型組小鼠血清ALT、AST、TB明顯升高，而膽囊炎合劑能明顯對(duì)抗這種改變，且以高劑量表現(xiàn)最佳，說(shuō)明其對(duì)ANIT造成的黃疸型急性肝損傷有明顯的保護(hù)作用，具有一定退黃作用。

2.4 對(duì)二甲苯所致小鼠耳水腫的影響

二甲苯致小鼠耳腫脹是用于研究炎癥的常見(jiàn)動(dòng)物模型[19]。表5結(jié)果表明，與正常對(duì)照組比較，膽囊炎合劑對(duì)二甲苯引起的小鼠耳水腫具有明顯的抑制作用，且以高、中劑量最為顯著。

2.5 對(duì)酵母所致大鼠發(fā)熱的影響

酵母致大鼠發(fā)熱模型是一種常用的發(fā)熱模型，由其所致發(fā)熱的動(dòng)物全身表現(xiàn)與臨床常見(jiàn)明顯炎癥的里熱證類似，常用于考察清熱類中藥的解熱作用[23]。表6結(jié)果表明，膽囊炎合劑具有一定的解熱作用，且以高、中劑量作用最好。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用石膽酸所致急性膽囊炎模型，模型對(duì)照組與正常對(duì)照組比較膽囊壁明顯增厚，多數(shù)黏膜增生，甚或增生的黏膜連接成網(wǎng)，少數(shù)黏膜下血管擴(kuò)張充血明顯，伴不同程度水腫及大量以淋巴細(xì)胞為主的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，炎性反應(yīng)重者膽囊內(nèi)看見(jiàn)紅染的絮狀物質(zhì)和脫落壞死的黏膜上皮。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明膽囊炎合劑能明顯降低由石膽酸所致的急性膽囊炎，豚鼠的肝臟指數(shù)明顯降低，膽汁量也明顯減少。

采用CCl4致大鼠急性肝損傷模型，在本研究中，模型組小鼠血清生化指標(biāo)ALT、AST活性明顯增強(qiáng)，膽囊炎合劑可明顯降低CCl4所致肝損傷模型大鼠血清中ALT和AST的活性水平，減輕病理改變，表明膽囊炎合劑對(duì)CCl4誘導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用。

采用ANIT灌胃給藥誘發(fā)大鼠黃疸型急性肝損傷模型。結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組大鼠毛發(fā)凌亂、無(wú)光澤，活動(dòng)量及進(jìn)食均減少，小便呈深黃色，體重下降顯著，而肝重、肝指數(shù)均顯著升高，膽囊炎合劑能有效降低血清轉(zhuǎn)氨酶、膽管酶及膽紅素水平。表明膽囊炎合劑對(duì)ANIT造成的黃疸型急性肝損傷有明顯的保護(hù)作用。

上述結(jié)果顯示，膽囊炎合劑對(duì)急性和慢性膽囊炎、急性黃疸型肝炎有很好的治療作用。本研究?jī)?nèi)容為下一步的開(kāi)發(fā)利用提供了詳實(shí)的研究數(shù)據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 余成浩，文昌凡，張宏，等.清膽顆粒利膽作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].四川動(dòng)物，2005，24（4）：628-630.

[2] Staudinger JL，Goodwin B，Jones SA，et al. The nuclear receptor PXR is a lithocholic acid sensor that protects against liver toxicity [J]. Proc Natl Acad Sci USA，2001，98（6）：3369-3374.

[3] Xie W，Radominska-Pandya A，Shi Y，et al. An essential role for nuclear receptors SXR/PXR in detoxification of cholestatic bile acids [J]. Proc Natl Acad Sci USA，2001， 98（6）：3375-3380.

[4] 張海燕，溫韜，盧靜，等.四氯化碳誘導(dǎo)大鼠慢性肝損傷模型方法的探討[J].實(shí)用肝臟病雜志，2009，1（30）：161-163.

[5] 周瓊，劉芳萍，劉穎姝，等.四氯化碳致小鼠急性肝損傷動(dòng)物模型建立方法的研究[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2012， 43（6）：77-81.

[6] 黎旸，李瑾翡，蔣忠軍，等.CCl4致小鼠急性肝損傷模型的研究[J].熱帶醫(yī)學(xué)雜志，2010，10（6）：657-659.

[7] 陳壯，肖剛.救必應(yīng)對(duì)小鼠急性化學(xué)性肝損傷的保護(hù)作用[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，9（26）：15-17.

[8] 龐文蕭，李勇軍，李勇文，等.蟬翼藤中甲基阿魏酸對(duì)CCl4致急性肝損傷小鼠模型的影響[J].中國(guó)藥房，2015， 26（1）：21-24.

[9] 黃鐵軍，余瓊?cè)A，戴列軍.蝦青素對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的慢性肝損傷大鼠的保護(hù)作用[J].實(shí)用肝臟病雜志，2014，17（4）：404-407.

[10] 童方念，羅超，羅丹，等.山奈酚對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用[J].西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，35（6）：816-819.

[11] 阮浩瀾，陳琪，黎旸，等.清開(kāi)靈注射液護(hù)肝藥效限值測(cè)定法的建立[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，10（27）：98-100.

[12] Jiang W，Gao M，Sun S. Protective effect of L-theanine on carbon tetrachloride-induced acute liver injury in mice [J]. Biochem Biochem Biophys Res Commun，2012， 422（2）：344-350.

[13] Liong EC，Xiao J，Lau YH. Cyclooxygenase inhibitors protect d-galactosamine /lipopolysaccharide induced acute hepatic injury in experimental mice model [J]. Food Chem Toxicol，2012，50（3）：861-866.

[14] 尤梅桂，陳同，倪遠(yuǎn)寧，等.復(fù)方熊去氧膽酸口服液對(duì)大鼠淤膽型肝炎的影響[J].中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，45（1）：102-105.

[15] 曹璐，李俊，黃成，等.梔子柏皮湯對(duì)α-萘異硫氰酸酯酯誘導(dǎo)的肝內(nèi)膽汁淤積大鼠的保護(hù)作用[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，48（3）：257-262.

[16] 雷揚(yáng)，周愛(ài)民，郭濤.一種改良的ANIT急性肝損傷方法及痰熱清注射液的保護(hù)作用[J].中藥藥理與臨床，2014， 30（2）：179-181.

[17] Cullen JM，F(xiàn)alola B，Melich DH，et al. Effects of Kufpper cell depletion on acute alpha-naphthylisothioncyanate-induced liver toxicity in male mice [J]. Toxicol Pathol，2013， 41（1）：7-17.

[18] Wu T，Chang MJ，Xu YJ，et al. Protective effect of calculus bovis sativus on intrahepatic cholestasis in rats induced by α-naphthylisothiocyanate [J]. Am J Chin Med，2013，41（6）：1393-1405.

[19] 歐陽(yáng)芳，薛敏菲，吳聲振.咽一方對(duì)小鼠耳腫脹及腹腔毛細(xì)血管通透性的影響[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2014，9（19）：6-7.

[20] 徐富翠，劉明華，孫玉紅，等.青果抗炎鎮(zhèn)痛活性部位的篩選研究[J].中藥藥理與臨床，2014，30（6）：121-123.

[21] 鐘璐，紀(jì)宏宇，王樹(shù)圓，等.乳癖消顆?？寡祖?zhèn)痛作用實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)藥師，2015，18（1）：149-151.

[22] 陶小軍，閆宇輝，徐志立，等.薏苡仁油抗炎消腫作用研究[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，17（1）：45-46.

[23] 萬(wàn)紅葉，孔祥英，李曉敏，等.不同寒熱藥性中藥對(duì)酵母致熱大鼠體溫調(diào)節(jié)及溫度敏感瞬時(shí)感受器電位離子通道（TRPs）蛋白的影響[J].中國(guó)中藥雜志，2014，39（19）：3813-3817.

[24] Habib M，Waheed I. Evaluation of anti-nociceptive，anti-inflammatory and antipyretic activities of Artemisia scoparia hydromethanolic extract [J]. J Ethnopharmacol，2013，145（1）：18-24.

[25] 劉沛，馬樂(lè)，王瓊，等.三黃顆粒中黃芩素代替黃芩苷素的藥理比較[J].中成藥，2015，37（2）：265-268.

[26] 閆同建，閆萌.青銀湯解熱、鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2015，21（1）：4-6.

（收稿日期：2015-02-06 本文編輯：張瑜杰）