張　創(chuàng)　陳藝杰　樂(lè)長(zhǎng)標(biāo)　楊文超

（福建農(nóng)林大學(xué)蜂學(xué)學(xué)院教育部蜂產(chǎn)品加工與應(yīng)用工程研究中心，福州350002）

蜂蜜中脯氨酸含量和蜂蜜成熟度的相關(guān)性研究

張創(chuàng)陳藝杰樂(lè)長(zhǎng)標(biāo)楊文超

（福建農(nóng)林大學(xué)蜂學(xué)學(xué)院教育部蜂產(chǎn)品加工與應(yīng)用工程研究中心，福州350002）

蜂蜜中脯氨酸含量是評(píng)價(jià)蜂蜜質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo)。在德國(guó)，蜂蜜中的脯氨酸含量和蜂蜜的成熟度存在相關(guān)性，認(rèn)為脯氨酸含量小于180 mg/kg的蜂蜜是未成熟蜂蜜。本文以封蓋與未封蓋蜂蜜為研究對(duì)象，采用紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定脯氨酸含量和阿貝折射儀測(cè)定相應(yīng)的水分含量。結(jié)果表明，部分封蓋蜜樣品的水分含量高于20%，所有蜂蜜樣品中脯氨酸含量都高于180 mg/kg，因此，中國(guó)的蜂蜜中脯氨酸含量和蜂蜜的成熟度沒(méi)有相關(guān)性。

蜂蜜；脯氨酸；水分；成熟度；相關(guān)性

蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，與自身分泌物融合后，經(jīng)充分釀造而成的天然甜物質(zhì)［1］。蜂蜜中的脯氨酸主要來(lái)源于蜜源植物的花蜜和蜜蜂自身的分泌物［2，3］。脯氨酸是蜂蜜中的主要的游離氨基酸［4］，脯氨酸的含量不僅可以作為衡量蜂蜜中總氨基酸含量的標(biāo)準(zhǔn)［5］，也可以作為蜂蜜成熟度［6］和糖摻假的判定標(biāo)準(zhǔn)［7］。蜂蜜中水分含量是衡量蜂蜜成熟度的一個(gè)重要指標(biāo)，成熟蜜的水分含量應(yīng)低于20%［8］。一般認(rèn)為水分含量越低越有利于蜂蜜的長(zhǎng)期儲(chǔ)存而不會(huì)變質(zhì)。

在德國(guó)，蜂蜜中的脯氨酸含量和蜂蜜的成熟度存在相關(guān)性，認(rèn)為脯氨酸含量小于180mg/kg的蜂蜜是未成熟蜂蜜［9］。本試驗(yàn)通過(guò)測(cè)定和分析國(guó)內(nèi)部分蜂蜜樣品中的脯氨酸含量和水分含量，探討我國(guó)蜂蜜中的脯氨酸含量和蜂蜜的成熟度是否存在相關(guān)性。

1　材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1樣本

3種非成熟蜂蜜樣品：枇杷原蜜、野桂花原蜜和荊條原蜜由福建省神蜂科技開(kāi)發(fā)有限公司提供。9種成熟（封蓋）蜂蜜樣品：洋槐原蜜（山東沂蒙與遼寧丹東鳳城）、荊條原蜜（山東鄔城與河北）、油菜原蜜（青海貴南）、棗花原蜜（河南三門(mén)峽與山東鄔城）、黃柏原蜜（吉林）和紅樹(shù)林原蜜（云南）由課題組在山東、遼寧等地收集。

1.1.2試劑及溶液配制

甲酸、異丙醇、脯氨酸、茚三酮和乙二醇甲醚（均為分析純?cè)噭?國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

異丙醇-水混合溶液：將異丙醇和蒸餾水按1∶1等量混溶。3%茚三酮乙二醇甲醚溶液：稱取3.0 g茚三酮定容于100 ml的乙二醇甲醚試劑中。脯氨酸貯備液：準(zhǔn)確稱取0.0250 g脯氨酸溶于少量蒸餾水中，定量移入100 ml容量瓶，用蒸餾水稀釋至刻度。25 μg/ml脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：移取1 ml脯氨酸貯備液于10 ml容量瓶中，用蒸餾水定容。樣液：稱取2.5 g（精確至0.001）試樣，定量移入50 ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度。

1.1.3儀器

ZWA型阿貝折光儀購(gòu)于石家莊化學(xué)儀器廠；UV-9100紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)購(gòu)于北京瑞利分析儀器公司；數(shù)顯恒溫水浴鍋HH6購(gòu)于國(guó)華電器有限公司；超級(jí)恒溫水浴器購(gòu)于上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；XY系列精密電子天平購(gòu)于常州市幸運(yùn)電子設(shè)備有限公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定蜂蜜中脯氨酸含量

（1）實(shí)驗(yàn)原理

蜂蜜中脯氨酸在酸性條件下能與茚三酮反應(yīng)，生成紅色的可溶于異丙醇-水混合溶液的化合物。在510nm波長(zhǎng)下，以試劑空白為參比液，溶液吸光值大小與脯氨酸含量成正比。記下樣液的吸光值，根據(jù)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，可求出蜂蜜中的脯氨酸含量。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確量取脯氨酸溶液0；0.2；0.4；0.6；0.8；1.0 ml相當(dāng)于（0；5；10；15；20；25 μg脯氨酸），分別移入帶塞磨口試管中，移入適量蒸餾水，使各試管溶液均為1.0ml。分別加入0.25ml甲酸和3%茚三酮乙二醇甲醚溶液1.0ml，蓋緊瓶塞在沸水浴中加熱15min。取出，移入70℃恒溫水浴中保溫10 min，加入5 ml異丙醇-水混合溶液，待5 min后以不加脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的試劑空白為參比，在X=510 nm下測(cè)定吸光度并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線［10］。

（3）樣液的測(cè)定

分別移入0、0.5～1.0 min樣液于2個(gè)帶塞磨口試管中，移入蒸餾水至試管溶液體積為1 min后，按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制的操作，測(cè)定吸光度并記下吸光值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查測(cè)脯氨酸含量。

1.2.2阿貝折射儀測(cè)定蜂蜜中的水分含量

（1）實(shí)驗(yàn)原理

若光線從光密介質(zhì)進(jìn)入光疏介質(zhì)，入射角小于折射角，改變?nèi)肷浣?，可使折射角?0度，此時(shí)的入射角稱為臨界角，那條光線稱為臨界光線。阿貝折射儀測(cè)定折射率就是基于測(cè)定臨界角的原理。把明暗交界面調(diào)在鏡筒內(nèi)的十字形成發(fā)絲交叉處，阿貝折射儀刻度盤(pán)上所示的數(shù)值，就是已根據(jù)折射角之大小換算成的折射率。由折射率查表，可知蜂蜜的含水量［11］。

（2）蜂蜜樣品的測(cè)定

在測(cè)定蜜樣時(shí)，先將棱鏡及折射棱鏡換洗干凈，再用璃棒蘸1～2滴蜜樣，滴在下面的棱鏡上，迅速閉合棱鏡，靜置片刻，使蜜樣溫度達(dá)到40℃，對(duì)準(zhǔn)光源，用目鏡觀察，轉(zhuǎn)動(dòng)補(bǔ)償器螺旋，使明暗分界明晰，轉(zhuǎn)動(dòng)標(biāo)尺指針螺旋，使明暗分界線正好通過(guò)接物鏡上十字線的交點(diǎn)，同時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)棱鏡手輪，使視野中除黑白二色外無(wú)其他顏色。記下標(biāo)尺上的折光指數(shù)，同時(shí)校對(duì)溫度，應(yīng)恰為40℃。

2　數(shù)據(jù)處理方法

本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理應(yīng)用SPASS 18.0版數(shù)據(jù)處理和計(jì)算分析，結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差（±SD）表示。

3　實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

以不同質(zhì)量脯氨酸對(duì)吸光度作標(biāo)準(zhǔn)曲線。采用紫外-可見(jiàn)分光光度法定量，脯氨酸質(zhì)量分別為5 μg，10 μg，15 μg，20 μg和25 μg測(cè)定其對(duì)應(yīng)的吸光度，結(jié)果如圖1所示。標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.0189x+0.0231，R2= 0.9925。

圖1　脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

在相同的條件下測(cè)定所有蜂蜜樣品的吸光值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到脯氨酸含量。每種蜂蜜樣品執(zhí)行三個(gè)平行實(shí)驗(yàn)。每種蜂蜜中脯氨酸含量和水分含量如表1所示。從表1可以看出，所測(cè)未封蓋蜜樣品的含水量均高于20%，枇杷蜜含水量高達(dá)28.82%。封蓋蜜的含水量從17.69%到20.75%不等。按照水分含量低于20%為成熟蜜的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)看，2個(gè)洋槐蜜樣品、1個(gè)油菜花蜜樣品、1個(gè)黃柏蜜樣品和1個(gè)紅樹(shù)林蜜樣品的含水量超出限額，大約56%的封蓋蜜樣品為非成熟蜜，所以成熟蜜與其中水分含量沒(méi)有直接相關(guān)性。封蓋蜜的水分含量也不是一成不變的，它與地理位置、蜜蜂群勢(shì)、土壤、氣候、季節(jié)和蜜源植物等多種因素有關(guān)［14］。

表1　蜂蜜中脯氨酸含量和水分含量

所測(cè)蜂蜜樣品的脯氨酸含量存在顯著差異，所有樣品的脯氨酸含量均大于180 mg/kg，這與德國(guó)［9］認(rèn)為未成熟蜂蜜的脯氨酸含量小于180 mg/kg的觀點(diǎn)不符。因此，我國(guó)蜂蜜中脯氨酸含量與其成熟度沒(méi)有相關(guān)性。

不同產(chǎn)地的同種封蓋蜜的脯氨酸含量不同，遼寧丹東鳳城洋槐蜜的脯氨酸含量明顯高于山東沂蒙洋槐蜜，山東鄔城成熟荊條蜜的脯氨酸含量也明顯高于河北荊條蜜。脯氨酸含量存在明顯的差異，這可能與蜜源植物生長(zhǎng)的地理環(huán)境不同、蜂蜜釀制過(guò)程中的變化等多種因素有關(guān)［12，13］。

4　結(jié)論

通過(guò)比較國(guó)內(nèi)部分蜂蜜樣品中脯氨酸含量和水分含量可知，中國(guó)的蜂蜜中脯氨酸含量和蜂蜜的成熟度沒(méi)有相關(guān)性。

［1］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.GB/14963-2011食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)—蜂蜜［S］.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社.2011.

［2］趙瑞雪，朱慧森，程鈺宏，等.植物脯氨酸及其合成酶系研究進(jìn)展［J］.草業(yè)科學(xué)，2008，25（2）:90-97.

［3］Berger B，Crailsheim K，Leonhard B.Proline，leucine and phenylalanine metabolism in adult honeybee drones（Apis mellifica carnica Pollm）［J］.Insect Biochemistry and Molecular Biology，1997，27（6）: 587-593.

［4］Hermosin，I，Chicon，R.M.，&Dolores Cabezudo，M.Free amino acid composition and botanical origin of honey.Food Chemistry，2003.83，263-268

［5］Pawlowska M，ArmstrongDW.Evaluation ofenantiomeric purityof selected aminoacids in honey［J］.Chirality，1994，6（4）:270-276.

［6］W.Von der Ohe，J.H.Dustmann，K.von der Ohe.Prolinalskriteriumderreife des honigsDeutsche LebensmittelRundschau，87（1991），pp.383-386.

［7］Bogdanov S，Martin P.Honey authenticity［J］.MitteilungenausLebensmitteluntersuchungund Hygiene，2002，93（3）:232-254.

［8］陳崇羔.蜜蜂產(chǎn)品學(xué)［M］.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2010:14-15.

［9］吳世宗，龔薇，楊建存.歐盟蜂蜜標(biāo)準(zhǔn)及分析方法介紹［J］.養(yǎng)蜂科技，2004（1）:40-43.

［10］鄭士榮.蜂蜜中脯氨酸含量的測(cè)定［J］.養(yǎng)蜂科技，1991（4）:20.

［11］慶易微，楊林.蜂蜜中水分的測(cè)定［J］.青海師范大學(xué)學(xué)報(bào)，2001（2）:39-40.

［12］陳杰，楊玉杉，胡月婷，徐瑞晗，程妮.油菜花和棗花中脯氨酸含量的測(cè)定［J］.中國(guó)蜂業(yè)，2010，61（10）:11-13.

［13］Cotte JF，Casabianca H，Giroud B，Albert M，Lheritier J and Grenier-Loustalot MF，Characterization ofhoneyaminoacid profiles using high-pressure liquid chromatography to control authenticity.Anal Bioanal Chem，2004，78:1342-1350.

［14］Nanda，V，Sarkar，B.C.，Sharma，H.K，&Bawa，A.S.Physicochemical properties and estimation of mineral content in honey produced from dierent plants in Northern India.Journal of Food Composition and Analysis，2003.16，613-619.

The Correlation between the Proline Content in honey and its Maturity

Zhang ChuangChen YijieLe ChangbiaoYang Wenchao
（College of Bee Science，F(xiàn)ujian Agriculture and Forestry University；Bee Products Processing and Application Engineering Research Center of the Ministry of Education，F(xiàn)uzhou 350002，China）

Proline content is an important criteria of honey quality.If proline content in honey sample is less than180 mg/kg，this honey will be considered as immaturity in Germany.In this paper，their proline content and the water content of several honey samples（12）from China were determined by UV-visible spectrophotometry and abbe refractometer，respectively.These samples consisted of 3 unsealed honeys and 9 sealded honeys.The results showed that the water content in some of sealded honeys samples were more than 20%，and the proline content in all of the honey samples were more than 180 mg/kg.There is no correlationship between the proline content in honey and its maturity.

honey；proline；water content；maturity；correlation

國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)（蜂）產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目（CARS-45-KXJ19）

張創(chuàng)，（1993-），在讀本科生，研究方向：蜂產(chǎn)品

楊文超（1980-），男，講師，博士，研究方向:蜂產(chǎn)品加工與應(yīng)用。