陳皖京，湯 銅，錢 波，李 佳，田 多，鄭 璐

羅格列酮對(duì)耐藥乳腺癌細(xì)胞影響的研究

陳皖京，湯 銅，錢 波，李 佳，田 多，鄭 璐

目的探討羅格列酮（ROS）對(duì)耐他莫西芬（TAM）的乳腺癌細(xì)胞MCF-7／TAM體外生長(zhǎng)的影響，及對(duì)其耐藥性的逆轉(zhuǎn)效果和作用機(jī)制方法采用四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）比色分析法測(cè)定ROS作用于MCF-7／TAM細(xì)胞后的抑制率及逆轉(zhuǎn)耐藥的效果；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ROS作用MCF-7／TAM細(xì)胞后的凋亡率；采用實(shí)時(shí)定量熒光PCR技術(shù)檢測(cè)ROS作用MCF-7／TAM細(xì)胞后對(duì)FOXA1、ERα、ErbB-2和P53基因表達(dá)的影響結(jié)果ROS干預(yù)MCF-7／TAM細(xì)胞后，呈量－效和時(shí)－效關(guān)系抑制其增殖。半數(shù)抑制濃度（136 μmol／L）的ROS對(duì)MCF-7／TAM細(xì)胞具有明顯的逆轉(zhuǎn)耐藥效果，逆轉(zhuǎn)耐藥倍數(shù)為2．05倍。高濃度可誘導(dǎo)MCF-7／TAM細(xì)胞凋亡。半數(shù)抑制濃度（136 μmol／L）的ROS作用MCF-7／TAM細(xì)胞后，能夠上調(diào)FOXA1、ERα和P53基因表達(dá)水平（P＜0．05），下調(diào)ErbB-2基因表達(dá)水平（P＜0．05）結(jié)論ROS可抑制MCF-7／TAM細(xì)胞增殖，高濃度ROS可誘導(dǎo)其凋亡，其機(jī)制可能與上調(diào)P53基因表達(dá)有關(guān)。ROS可逆轉(zhuǎn)MCF-7／TAM細(xì)胞的耐藥性，逆轉(zhuǎn)機(jī)制可能與上調(diào)FOXA1和ERα基因表達(dá)，下調(diào)ErbB-2基因表達(dá)有關(guān)。

羅格列酮；他莫西芬；乳腺癌細(xì)胞；FOXA1；ERα；ErbB-2；P53

他莫西芬（tamoxifen，TAM）是作為雌激素受體（estrogen receptor，ER）陽(yáng)性乳腺癌患者內(nèi)分泌治療的主要藥物，可有效降低患者的死亡率和復(fù)發(fā)率，但長(zhǎng)期使用會(huì)產(chǎn)生耐藥繼而限制其療效。羅格列酮（rosiglitazone，ROS）作為胰島素增敏劑廣泛應(yīng)用于糖尿病的臨床治療，最近研究［1］顯示ROS可抑制乳腺癌細(xì)胞增殖，但其對(duì)TAM耐藥的乳腺癌細(xì)胞MCF-7／TAM的增殖和耐藥性的影響尚無(wú)報(bào)道。該研究觀測(cè)了ROS在體外對(duì)MCF-7／TAM細(xì)胞的增殖、凋亡和耐藥性的影響，以探索ROS在抑制耐藥細(xì)胞增殖和恢復(fù)耐藥細(xì)胞對(duì)TAM敏感性中的作用，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1．1 細(xì)胞系人乳腺癌細(xì)胞系（MCF-7）和耐TAM乳腺癌細(xì)胞系（MCF-7／TAM）由安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室饋贈(zèng)，MCF-7／TAM細(xì)胞株已用濃度為10－6mol／L的TAM維持1年，實(shí)驗(yàn)前撤藥1周；上述兩種細(xì)胞分別培養(yǎng)于含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中和含10%胎牛血清的改良型RPMI-1640培養(yǎng)基中。

1．2 主要試劑及器材胎牛血清（杭州四季青公司），改良型RPMI-1640培養(yǎng)基和DMEM培養(yǎng)基（美國(guó)Gibco公司）；TAM（天津希恩思公司），批號(hào)：T-00470，1 g裝；四甲基偶氮唑藍(lán)（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）、二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）及ROS（美國(guó)Sigma公司），DMSO批號(hào)：D5879，100 ml裝；ROS批號(hào)：R2408，10 mg裝；RNeasy Mini Kit和SYBR Green Mix（德國(guó)Qiagen公司）；反轉(zhuǎn)錄試劑盒（美國(guó)Promega公司）；青鏈霉素和含0．02% EDTA的0．25%胰蛋白酶（杭州吉諾公司）；FOXA1、ERα、ErbB-2、P53及甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成；Annexin V-FITC／PI雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（上海貝博公司）；酶標(biāo)儀（美國(guó)萊姆德公司），型號(hào)為PRA ELX800；梯度PCR儀（德國(guó)Biometra公司），型號(hào)為T-Gradient；熒光定量PCR儀（德國(guó)Qiagen公司），型號(hào)為Rotor-Gene 3000。

1．3 藥物制備MTT用PBS配制成濃度為5 mg／ml，過(guò)濾除菌于4℃保存。TAM用無(wú)水乙醇配制成濃度為10－3mol／L的儲(chǔ)存液，過(guò)濾除菌，－20℃分裝避光保存。ROS用DMSO配制成濃度為10－3mol／L的儲(chǔ)存液，過(guò)濾除菌，－20℃分裝避光保存。實(shí)驗(yàn)時(shí)按所需濃度用不含血清的改良型RPMI-1640培養(yǎng)液稀釋。

1．4 MTT實(shí)驗(yàn)取生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期的MCF-7／TAM細(xì)胞（5×104個(gè)／ml）接種于96孔板內(nèi)，每孔加細(xì)胞懸液100 μl，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)孵育24 h后更換培養(yǎng)液，實(shí)驗(yàn)組以等差稀釋的方法由低到高分別加入0、50、100、150、200、250 μmol／L 6個(gè)濃度，每個(gè)濃度設(shè)6個(gè)復(fù)孔；對(duì)照組加同等體積的培養(yǎng)液。繼續(xù)孵育24、48、72 h后，采用常規(guī)MTT方法檢測(cè)。吸出培養(yǎng)基，每孔加MTT（5 mg／ml）20 μl，4 h后吸出培養(yǎng)基，每孔加150 μl DMSO，震蕩10 min，使結(jié)晶物充分溶解，用酶標(biāo)儀（490 nm）測(cè)定各孔光密度（optical density，OD）值，計(jì)算細(xì)胞抑制率。細(xì)胞抑制率（%）＝（1－實(shí)驗(yàn)組OD值／對(duì)照組OD值）× 100%。

1．5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MCF-7／TAM細(xì)胞（25×104個(gè)／ml）接種于6孔板內(nèi)，每孔加細(xì)胞懸液2 ml，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)孵育24 h后更換含不同濃度ROS（150、200、250 μmol／L）的培養(yǎng)液，繼續(xù)孵育48 h后消化收集細(xì)胞，冰浴PBS洗2遍，用400 μl Annexin V結(jié)合緩沖液重懸細(xì)胞，加5 μl Annexin V-FITC染色液避光于冰上孵育15 min后，加10 μl Propidium Iodide染色液避光于冰上孵育5 min，細(xì)胞樣品逐一上機(jī)檢測(cè)，同一濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔，試驗(yàn)同時(shí)設(shè)置不加藥物的空白對(duì)照組。

1．6 耐藥倍數(shù)與逆轉(zhuǎn)耐藥倍數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)共分為3組：①濃度梯度的TAM作用于MCF-7組；②濃度梯度的TAM作用于MCF-7／TAM組；③ROS（136 μmol／L）預(yù)處理MCF-7／TAM 48 h后，濃度梯度的TAM作用于MCF-7／TAM組。48 h后用MTT法測(cè)定各組細(xì)胞抑制率，用SPSS 13．0統(tǒng)計(jì)軟件計(jì)算出各組TAM的IC50值。根據(jù)公式計(jì)算耐藥倍數(shù)和逆轉(zhuǎn)耐藥倍數(shù)。耐藥倍數(shù)＝耐藥細(xì)胞IC50／敏感細(xì)胞IC50；逆轉(zhuǎn)耐藥倍數(shù)＝耐藥細(xì)胞逆轉(zhuǎn)前IC50／耐藥細(xì)胞逆轉(zhuǎn)后IC50。

1．7 Real time PCR技術(shù)檢測(cè)FOXA1、ERα、ErbB-2和P53基因表達(dá)實(shí)驗(yàn)共分為3組：①M(fèi)CF-7組；②MCF-7／TAM組；③ROS（136 μmol／L）預(yù)處理48 h后的MCF-7／TAM組。3組細(xì)胞分別培養(yǎng)48 h，用Qiagen公司的RNeasy Mini Kit提取RNA，測(cè)A260和A280的吸光度，計(jì)算出RNA濃度，采用Promega公司的逆轉(zhuǎn)錄酶按20 μl體系將5 μl RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。反應(yīng)體系為：10×Buffer 2 μl、dNTPs 2 μl、Olifol（dT）1 μl、MgCl24 μl、RNA inhibitor 0．5 μl、RT酶0．7 μl、RNA模板5 μl、H2O 5 μl，逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件：42℃30 min，95℃5 min，0℃5 min。FOXA1的上游引物序列：5′-CGCTTCGCACAGGGCTGGAT-3′，下游序列為：5′-TGCTGACCGGGACGGAGGAG-3′，擴(kuò)增長(zhǎng)度為144 bp。ERα的上游引物序列為：5′-CCACCAACCAGTGCACCATT-3′，下游序列為：5′-GGTCTTTTCGTATCCCACCTTTC-3′，擴(kuò)增長(zhǎng)度為108 bp。ErbB-2的上游引物序列為：5′-AAACCTGGAACTCACCTA-3′，下游序列為：5′-ATAGTTGTCCTCAAAGAGC-3′，擴(kuò)增長(zhǎng)度為163 bp。P53的上游引物序列為：5′-GGCCCACTTCACCGTACAA-3′，下游序列為：5′-GTGGTTTCAAGG CCAGATGT-3′，擴(kuò)增長(zhǎng)度為156 bp。GAPDH的上游引物序列為5′-TCAACGGATTTGGTCGTATTGGGC-3′，下游序列為：5′-TCCTGGAAGATGGTGATGGGATTT-3′，擴(kuò)增長(zhǎng)度為209 bp。實(shí)時(shí)定量熒光PCR反應(yīng)體系為：2×QuantiFast SYBR Green PCR Master Mix 5 μl，RNase-free water 3．5 μl，F(xiàn)OXA1、ERα、ErbB-2、P53及GAPDH（10 μmol／L）上下游引物各0．25 μl，cDNA 1 μl。在熒光定量PCR儀上進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)條件為：95℃5min，95℃30 s，60℃15 s，共40個(gè)循環(huán)，溶解曲線按照Rotor-gene 3000機(jī)器SYBR Green染料方案設(shè)置。將目的基因在敏感細(xì)胞和藥物處理過(guò)后的耐藥細(xì)胞內(nèi)，相對(duì)于耐藥細(xì)胞的表達(dá)差異倍數(shù)用2－ΔΔCt方法計(jì)算來(lái)表示［2］。ΔCt＝Ct（目的基因）－Ct（GAPDH基因），－ΔΔCt＝－（ΔCt敏感細(xì)胞／ROS處理的耐藥細(xì)胞－ΔCt耐藥細(xì)胞）。當(dāng)2－ΔΔCt＞1，目的基因表達(dá)上調(diào)，反之下調(diào)。

1．8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 13．0統(tǒng)計(jì)軟件，兩組數(shù)據(jù)比較時(shí)采用t檢驗(yàn)，多組間比較時(shí)用方差分析。

2 結(jié)果

2．1 ROS抑制MCF-7／TAM細(xì)胞增殖的作用將ROS從250 μmol／L等差稀釋至0 μmol／L，由低濃度到高濃度分別作用于MCF-7／TAM細(xì)胞24、48和72 h，作用24 h后其增殖抑制率從14．2%升為62．1%，作用48 h后其抑制率從21．7%升為64．4%，作用72 h后其抑制率從33．7%升為74．4%，ROS對(duì)MCF-7／TAM細(xì)胞的抑制作用與濃度和時(shí)間呈正相關(guān)。依據(jù)酶標(biāo)儀的數(shù)據(jù)結(jié)果，采用SPSS 13．0軟件計(jì)算出ROS作用MCF-7／TAM細(xì)胞48 h后的50%抑制率（IC50）濃度為136 μmol／L。見(jiàn)圖1。

2．2 MCF-7／TAM細(xì)胞的耐藥倍數(shù)及ROS逆轉(zhuǎn)耐藥倍數(shù)濃度梯度TAM單獨(dú)作用于MCF-7細(xì)胞，48 h的IC50值為（6．81±0．02）μmol／L；濃度梯度TAM單獨(dú)作用于MCF-7／TAM細(xì)胞，48 h的IC50值為（17．92±0．03）μmol／L，耐藥倍數(shù)為2．63（t＝51．20，P＜0．05）。半數(shù)抑制濃度的ROS（136 μmol／L）預(yù)處理MCF-7／TAM細(xì)胞48 h后，濃度梯度TAM單獨(dú)作用于MCF-7／TAM細(xì)胞，48 h的IC50值為（8．76±0．01）μmol／L，逆轉(zhuǎn)耐藥倍數(shù)為2．05（t＝65．32，P＜0．05）。表明半數(shù)抑制濃度的ROS可以部分恢復(fù)MCF-7／TAM細(xì)胞對(duì)TAM的敏感性。見(jiàn)圖2。

2．3 ROS誘導(dǎo)MCF-7／TAM細(xì)胞凋亡將ROS以濃度為150、200、250 μmol／L分別作用MCF-7／TAM細(xì)胞48 h后，細(xì)胞凋亡率分別為（16．20± 0．30）%、（22．53±0．15）%和（27．53±0．35）%，與對(duì)照組的（3．23±0．04）%相比，凋亡率增加（F＝5559，P＜0．05）。見(jiàn)圖3。

2．4 ROS對(duì)基因表達(dá)的影響從擴(kuò)增曲線和溶解曲線可見(jiàn)待測(cè)基因均已進(jìn)入擴(kuò)增的平臺(tái)期，產(chǎn)物特異性較好，說(shuō)明反應(yīng)條件設(shè)定準(zhǔn)確。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示：①FOXA1基因在敏感細(xì)胞MCF-7中的表達(dá)是耐藥細(xì)胞MCF-7／TAM的（2．66±0．84）倍（t＝5．52，P＜0．05），F(xiàn)OXA1基因在ROS處理后的耐藥細(xì)胞中的表達(dá)是未做處理的耐藥細(xì)胞的（3．16±0．14）倍（t＝37．79，P＜0．05）。②雌激素受體ERα基因在敏感細(xì)胞MCF-7中的表達(dá)是耐藥細(xì)胞MCF-7／TAM的（8．68±0．54）倍（t＝27．75，P＜0．05），ERα基因在ROS處理后的耐藥細(xì)胞中的表達(dá)是未做處理的耐藥細(xì)胞的（5．01±0．90）倍（t＝9．63，P＜0．05）。③表皮生長(zhǎng)因子受體ErbB-2基因在敏感細(xì)胞MCF-7中的表達(dá)是耐藥細(xì)胞MCF-7／TAM的（0．06±0．01）倍（t＝9．50，P＜0．05），ErbB-2基因在ROS處理后的耐藥細(xì)胞中的表達(dá)是未做處理的耐藥細(xì)胞的（0．52±0．07）倍（t＝11．87，P＜0．05）。④P53基因在細(xì)胞MCF-7中的表達(dá)是耐藥細(xì)胞MCF-7／TAM的（4．42±1．76）倍（t＝5．85，P＜0．05），P53基因在ROS處理后的耐藥細(xì)胞中的表達(dá)是未做處理的耐藥細(xì)胞的（1．76±0．51）倍（t＝5．91，P＜0．05）。見(jiàn)圖4。

3 討論

乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，發(fā)病率占全身各種惡性腫瘤的7%～10%，嚴(yán)重影響女性身心健康。有研究［2－3］顯示單獨(dú)服用TAM 5年可使ER陽(yáng)性的早期乳腺癌患者年死亡率降低31%，復(fù)發(fā)率降低47%。但是，近年來(lái)臨床上TAM耐藥的出現(xiàn)嚴(yán)重限制了其療效。目前耐藥機(jī)制的研究［4－5］以ERα缺失和表皮生長(zhǎng)因子通路上調(diào)為主，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)先鋒因子FOXA1也參與耐藥機(jī)制的發(fā)生［6］。然而針對(duì)TAM耐藥的問(wèn)題，目前臨床的處理主要為不同抗雌激素藥物的交替使用、異常信號(hào)通路的靶向阻斷、新靶點(diǎn)及多藥聯(lián)合治療，但療效有限，且有一定的副作用［7］。

劉朝俊等［8］報(bào)道稱2型糖尿病與乳腺癌密切相關(guān)。一項(xiàng)乳腺癌內(nèi)分泌治療的回顧性分析提示，接受內(nèi)分泌治療的患者較未接受者其糖尿病發(fā)生率明顯升高［9］。

ROS屬于噻唑烷二酮類降糖藥物，主要通過(guò)結(jié)合并激動(dòng)過(guò)氧化物酶體增殖活化受體γ（peroxisome proliferator activated receptor-γ，PPARγ）發(fā)揮作用。研究［10］顯示PPARγ在乳腺癌、卵巢癌、胃癌等多種腫瘤細(xì)胞中均有表達(dá)。有報(bào)道［1］稱ROS可抑制乳腺癌MCF－7細(xì)胞的增殖。P53基因是重要的抑癌基因之一，與乳腺癌的生長(zhǎng)、凋亡密切相關(guān)，Moon et al［11］發(fā)現(xiàn)ROS可促進(jìn)P53基因表達(dá)。Talbert et al［12］卻發(fā)現(xiàn)小劑量（10 μmol／L）ROS可促進(jìn)MCF-7細(xì)胞增殖，與小劑量ROS通過(guò)ERa途徑和ERKMAPK途徑激活雌激素受體反應(yīng)元件（estrogen receptor response element，ERE），從而上調(diào)ERα表達(dá)有關(guān)。Elstner et al［13］發(fā)現(xiàn)PPARγ配體激動(dòng)劑曲格列酮可顯著抑制表皮生長(zhǎng)因子受體ErbB-2蛋白表達(dá)。Varley et al［14］發(fā)現(xiàn)FOXA1的表達(dá)調(diào)控受PPARγ的調(diào)節(jié)。

以上研究結(jié)果為ROS抑制耐TAM乳腺癌細(xì)胞MCF-7／TAM的增殖，恢復(fù)其對(duì)TAM的敏感性提供了可能。本研究結(jié)果顯示ROS可抑制MCF-7／TAM細(xì)胞增殖，且高濃度可誘導(dǎo)其凋亡。經(jīng)ROS處理后，P53基因表達(dá)上調(diào)，與抑制耐藥細(xì)胞的增殖相關(guān)。對(duì)比MCF-7／TAM細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞的基因表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)MCF-7／TAM的耐藥機(jī)制與ERα和FOXA1基因表達(dá)下調(diào)、ErbB-2基因表達(dá)上調(diào)相關(guān)。MCF-7／TAM細(xì)胞經(jīng)ROS處理后，對(duì)比處理前其ERα、FOXA1基因表達(dá)上調(diào)，ErbB-2基因表達(dá)下調(diào)，逆轉(zhuǎn)耐藥倍數(shù)為2．05倍，提示ROS可通過(guò)改變耐藥相關(guān)基因的表達(dá)來(lái)恢復(fù)乳腺癌耐藥細(xì)胞對(duì)TAM的敏感性。

綜上所述，ROS以其抑制耐藥乳腺癌細(xì)胞MCF-7／TAM增殖，恢復(fù)耐藥細(xì)胞對(duì)TAM的敏感性，避免乳腺癌向ER功能缺失的不良表型發(fā)展，降低乳腺癌合并糖尿病患者的血糖，降低內(nèi)分泌治療所引起血糖升高的風(fēng)險(xiǎn)，臨床副作用小等優(yōu)勢(shì)，為臨床治療耐TAM乳腺癌提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和新的思路。至于ROS逆轉(zhuǎn)耐藥的其他途徑及其誘導(dǎo)耐藥細(xì)胞凋亡的具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

［1］ 鐘 紅，許永華，馬斌林，等．雷帕霉素和羅格列酮對(duì)人乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響［J］．中國(guó)腫瘤臨床，2010，37（11）：611－4．

［2］ Chung E Y，Liu J，Homma Y，et al．Interleukin-10 expression in macrophages during phagocytosis of apoptotic cells is mediated by homeodomain proteins Pbx1 and Prep-1［J］．Immunity，2007，27（6）：952－64．

［3］ Chung E Y，Liu J，Zhang Y，et al．Differential expression in lupusassociated IL-10 promoter single-nucleotide polymorphisms is mediated by poly（ADP-ribose）polymerase-1［J］．Genes Immun，2007，8（7）：577－89．

［4］ Li G，Zhang J，Jin K，et al．Estrogen receptor-α36 is involved in development of acquired tamoxifen resistance via regulating the growth status switch in breast cancer cells［J］．Mol Oncol，2013，7（3）：611－24．

［5］ Morrison G，F(xiàn)u X，Shea M，et al．Therapeutic potential of the dual EGFR／HER2 inhibitor AZD8931 in circumventing endocrine resistance［J］．Breast Cancer Res Treat，2014，144（2）：263－72．

［6］ Ross-Innes C S，Stark R，Teschendorff A E，et al．Differential oestrogen receptor binding is associated with clinical outcome in breast cancer［J］．Nature，2012，481（7381）：389－93．

［7］ 何 倩，潘躍銀．乳腺癌內(nèi)分泌治療的耐藥機(jī)制及對(duì)策［J］．臨床腫瘤學(xué)雜志，2011，16（5）：463－7．

［8］ 劉朝俊，李軍濤，劉 慧．2型糖尿病與乳腺癌關(guān)系的研究進(jìn)展［J］．中華腫瘤防治雜志，2013，20（12）：958－62．

［9］ Lipcombe L L，F(xiàn)ischer H D，Yun L，et al．Association between tamoxifen treatment and diabetes：apopulation-based study［J］．Cancer，2012，118（10）：2615－22．

［10］Michalik L，Desvergne B，Wahli W．Peroxisome proliferation activated receptors and cancers complex stories［J］．Nat Rev Cancer，2004，4（1）：61－70．

［11］Moon H S，Guo D D，Lee H G，et al．Alpha-eleostearic acid suppresses proliferation of MCF-7 breast cancer cells via activation of PPARgamma and inhibition of ERK 1－2［J］．Cancer Sci，2010，101（2）：396－402．

［12］Talbert D R，Allred C D，Zaytseva Y Y，et al．Transactivation of ERalpha by rosiglitazone induces proliferation in breast cancer cells［J］．Breast Cancer Res Treat，2008，108（1）：23－33．

［13］Elstner E，Williamson E A，Zang C，et al．Novel therapeutic approach：ligands for PPAR-γ and retinoid receptors induce apoptosis in bcl-2-positivehuman breast cancer cells［J］．Breast Cancer Res Treat，2002，74（2）：155－65．

［14］Varley C L，Bacon E J，Holder J C，et al．FOXA1 and IRF-1 intermediary transcriptional regulators of PPARgamma-induced urothelial cytodifferentiation［J］．Cell Death and Differ，2009，16（1）：103－14．

Effects of rosiglitazone on the drug-resistant breast cancer

Chen Wanjing，Tang Tong，Qian Bo，et al
（Dept of General Surgery，The Second Affiliated Hospital of Anhui Medical University，Hefei 230601）

ObjectiveTo investigate the proliferation inhibition and the reverse effects as well as the mechanisms of rosiglitazone（ROS）on human breast cancer cells resistant to tamoxifen（MCF-7／TAM）in vitro．Methods The inhibitive rate and reverse effects of ROS on MCF-7／TAM cells were detected by MTT assay．The apoptotic rate of ROS on MCF-7／TAM cells were detected by flow cytometry．The expression changes of FOXA1，ERα，ErbB-2 and P53 of MCF-7／TAM cells which dealed with ROS were detected by real-time quantitative PCR．Results ROS could inhibit the proliferations of MCF-7／TAM cells through dose-effect and time-effect relationships．ROS had a significant reversal of drug resistance of MCF-7／TAM cells．The dose of 50%inhibitory concentration（136 μmol／L）reversed the resistance by 2．05 folds．High concentration of ROS could induce the MCF-7／TAM cells apoptosis．The expressions of FOXA1，ERα and P53 were increased after ROS effected on MCF-7／TAM cells at the dose of 50%inhibitory concentration（136 μmol／L）（P＜0．05）．While，the expressions of ErbB-2 were induced by ROS with the same concentration（P＜0．05）．Conclusion The effects of proliferation inhibition and apoptosis of ROS on MCF-7／TAM cells may be related to down-regulating P53 expression．ROS can reverse the drug resistance of MCF-7／TAM cells，and the reverse mechanisms maybe relate to up-regulating FOXA1 and ERα expression as well as down-regulating ErbB-2．

rosiglitazone；tamoxifen；human breast cancer cells；FOXA1；ERα；ErbB-2；P53

R 737．9

A

1000－1492（2015）03－0285－05

2014－11－12接收

安徽省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（編號(hào)：1308085QH152）

安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院普通外科，合肥 230601

陳皖京，男，碩士研究生；湯 銅，男，教授，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，責(zé)任作者，E-mail：tt20164＠126．com