袁杰清，束 軍，王丹平，沈繼龍

TXNIP和CEA聯(lián)合檢測(cè)對(duì)良惡性胸腔積液的診斷價(jià)值

袁杰清1，束 軍1，王丹平1，沈繼龍2

目的探討硫氧還蛋白結(jié)合蛋白（TXNIP）、癌胚抗原（CEA）聯(lián)合檢測(cè)在良、惡性胸腔積液鑒別診斷中價(jià)值方法收集57例胸腔積液患者（良性32例，惡性25例）的臨床資料，采用ELISA法測(cè)定血清和胸腔積液中TXNIP和CEA濃度水平結(jié)果惡性胸腔積液中TXNIP濃度明顯低于良性胸腔積液中的含量；良惡性胸腔積液患者的血清中TXNIP濃度水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TXNIP濃度89．57 μg／L為最佳臨界值，惡性胸腔積液的診斷靈敏度76%，特異度87．5%，符合率86．96%；CEA濃度5．285 μg／L為最佳臨界值，惡性胸腔積液的診斷靈敏度88%，特異度90．6%，符合率91．23%。聯(lián)合試驗(yàn)，并聯(lián)診斷的靈敏度為97．12%，特異度為79．28%；串聯(lián)診斷靈敏度為66．88%，特異度98．83%結(jié)論TXNIP對(duì)惡性胸腔積液的診斷具有一定價(jià)值，與CEA聯(lián)合檢測(cè)可以提高診斷靈敏度與特異度。但是TXNIP對(duì)惡性胸腔積液的診斷價(jià)值并不優(yōu)于CEA。

硫氧還蛋白結(jié)合蛋白；癌胚抗原；胸腔積液；診斷

硫氧還蛋白結(jié)合蛋白（thioredoxin-interacting protein，TXNIP）基因是一種新型的腫瘤相關(guān)抑制基因，在乳腺癌、肺癌、胃癌等人體實(shí)體腫瘤組織中呈低表達(dá)［1］，并且與腫瘤細(xì)胞增殖、分化、凋亡等過程密切相關(guān)［2］。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)TXNIP的研究主要在腫瘤發(fā)生機(jī)制或組織學(xué)等方面，對(duì)其在良、惡性胸腔積液中的濃度變化研究尚未見報(bào)道。癌胚抗原（carcino embryonic antigen，CEA）是臨床上最常用的腫瘤標(biāo)志物之一，在鑒別良、惡性胸腔積液的診斷中使用廣泛［3］。該研究通過檢測(cè)患者血清和胸腔積液中TXNIP、CEA含量，探討對(duì)良、惡性胸腔積液的鑒別診斷價(jià)值。

1 材料與方法

1．1 病例資料收集2013年10月～2014年6月安徽醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院內(nèi)科住院患者中胸腔積液患者57例。良性胸腔積液32例作為良性組，其中男19例，女13例，年齡19～78（49．90±21．41）歲，肺結(jié)核17例，肺部感染12例，心力衰竭2例，胸膜炎1例；惡性胸腔積液25例作為惡性組，其中男16例，女9例，年齡33～81（61．16±12．65）歲，肺腺癌12例，肺鱗癌5例，小細(xì)胞肺癌2例，其他類型或類型不明確6例。惡性胸腔積液合并糖尿病患者4例。結(jié)核性胸腔積液診斷符合以下其中一項(xiàng)：①痰涂片或胸腔積液中找到抗酸桿菌；②組織或胸膜活檢發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌；③結(jié)核中毒癥狀、結(jié)核菌素試驗(yàn)陽性、胸片提示結(jié)核活動(dòng)病灶，抗結(jié)核治療有效；其他良性病例診斷通過結(jié)合臨床表現(xiàn)、影像學(xué)檢查及療效觀察明確。惡性胸腔積液診斷經(jīng)痰液及胸腔積液脫落細(xì)胞學(xué)檢查或者組織病理學(xué)檢查明確。糖尿病診斷符合WTO診斷標(biāo)準(zhǔn)（1999年）。

1．2 方法

1．2．1 標(biāo)本采集 患者入院后抽取晨起空腹靜脈血液3 ml，首次行胸腔穿刺時(shí)留取胸腔積液標(biāo)本10 ml。標(biāo)本收集后在4℃條件下3 000 r／min離心10 min，吸取上清液，分裝上清液于1．5 ml EP管中，－20℃保存，期間避免反復(fù)凍融，待檢。

1．2．2 標(biāo)本檢測(cè) 測(cè)試前標(biāo)本在室溫下充分解凍，離心或混勻，分別進(jìn)行TXNIP、CEA檢測(cè)。應(yīng)用ELISA法檢測(cè)患者血清、胸腔積液中TXNIP、CEA含量，嚴(yán)格按照試劑盒說明書對(duì)患者血清、胸腔積液中TXNIP與CEA分別進(jìn)行測(cè)定。使用酶標(biāo)儀（美國(guó)BioTek公司）讀數(shù)，并根據(jù)吸光度（optical density value，OD值）計(jì)算樣品濃度。ELISA試劑盒由合肥欣樂生物有限公司提供。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 19．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用Kolmogorov-Smirnov test以確定所得數(shù)據(jù)是否符合正態(tài)分布。數(shù)據(jù)以±s表示，兩樣本均數(shù)比較用t檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。采用受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curves，ROC）用以分析和評(píng)價(jià)試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果

2．1 胸腔積液和血清中TXNIP、CEA含量測(cè)定結(jié)果比較良性組與惡性組胸腔積液中TXNIP、CEA的濃度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），惡性組TXNIP濃度明顯低于良性組；惡性組CEA濃度明顯高于良性組。血清中CEA濃度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05），惡性組明顯高于良性組。血清中TXNIP濃度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

2．2 不同因素對(duì)惡性胸腔積液中TXNIP濃度變化的影響不同性別、年齡（以60歲分界）、是否吸煙、肺癌組織學(xué)分型的患者胸腔積液中TXNIP含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。肺癌合并糖尿病與肺癌未合并糖尿病患者的胸腔積液中TXNIP含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。伴有肺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的惡性胸腔積液TXNIP濃度明顯低于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的惡性胸腔積液TXNIP水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。見表2。

表1 胸腔積液和血清中TXNIP與CEA濃度（±s）

項(xiàng)目良性組（n＝32）惡性組（n＝25）P值t值胸腔積液TXNIP112．00±16．1377．36±17．58＜0．05 7．73 CEA2．80±1．7121．00±20．86＜0．05 4．93血清TXNIP123．52±23．52117．28±14．900．24 1．16 CEA2．35±1．2910．65±7．78＜0．05 5．47

表2 25例惡性胸腔積液中TXNIP的濃度（±s）

項(xiàng)目nTXNIP（μg／L）P值t／F值性別男1675．59±21．050．5490．572女980．01±11．07年齡（歲）≥601576．10±16．010．6710．430＜601079．24±20．48吸煙有1173．22±19．600．3081．044無1480．60±15．80合并糖尿病患病477．75±25．630．9620．048未患病2177．28±16．51肺癌組織類型腺癌1277．03±17．110．9420．060鱗癌579．82±19．10其他類型876．31±19．65遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有461．63±12．510．0492．083無2180．35±16．99

2．3 惡性胸腔積液中TXNIP、CEA的診斷價(jià)值應(yīng)用ROC曲線分析實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)，約登指數(shù)最大值對(duì)應(yīng)的切點(diǎn)為診斷的最佳臨界點(diǎn)。選取約登指數(shù)為0．635，胸腔積液TXNIP＜89．57 μg／L為最佳臨界點(diǎn)（靈敏度76%，特異度87．5%，符合率86．96%，曲線下面積AUC 0．864＞對(duì)角線面積0．500）。見圖1。選取約登指數(shù)為0．786，胸腔積液CEA＞5．285 μg／L為最佳臨界點(diǎn)（靈敏度88%，特異度90．6%，符合率91．23%，AUC 0．943＞0．500）。見圖2。由上可見，TXNIP和CEA對(duì)惡性胸腔積液均有一定診斷價(jià)值，且CEA對(duì)惡性胸腔積液的診斷價(jià)值優(yōu)于TXNIP。選取胸腔積液TXNIP濃度為89．57 μg／L，CEA濃度為5．285 μg／L進(jìn)行聯(lián)合試驗(yàn)，TXNIP和CEA并聯(lián)對(duì)惡性胸腔積液診斷靈敏度為97．12%，特異度為79．28%；串聯(lián)對(duì)惡性胸腔積液診斷靈敏度為66．88%，特異度98．83%。見表3。

2．4 相關(guān)性分析惡性胸腔積液的TXNIP濃度水平與CEA濃度水平之間無顯著相關(guān)性（r＝0．095，P＝0．652）。

3 討論

TXNIP是一種氧化還原調(diào)節(jié)蛋白，可與硫氧還蛋白活性半胱氨酸殘基結(jié)合，影響體內(nèi)活性氧水平及參與調(diào)節(jié)線粒體通路，從而發(fā)揮調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)的作用［4］。此外，TXNIP參與絲裂原活化蛋白激酶途徑所介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡［5］；促進(jìn)p27激酶抑制蛋白1穩(wěn)定表達(dá)，使細(xì)胞周期停滯在G1／S周期以對(duì)抗腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)［6］；NK細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的重要組成部分，在抗腫瘤過程中發(fā)揮重要作用。TNXIP的缺失可使NK細(xì)胞發(fā)育異常，數(shù)量及活性下降，造成免疫系統(tǒng)受到抑制并促使腫瘤的發(fā)生及進(jìn)一步發(fā)展［7］。所以TXNIP通過多種機(jī)制參與抑制腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移等過程。

研究［8］顯示TXNIP基因敲除或基因突變的小鼠比野生型更容易導(dǎo)致腫瘤發(fā)生，提示其可能是一種新型腫瘤抑制因子，并且在肝癌、胃腸癌、乳腺癌等惡性腫瘤組織中呈低表達(dá)［9］。體外實(shí)驗(yàn)［10］進(jìn)一步表明TXNIP對(duì)肺腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)有抑制作用。因此，TXNIP水平的檢測(cè)可能對(duì)肺腫瘤的診斷有一定的幫助。本研究顯示肺癌所致惡性胸腔積液中TXNIP濃度明顯低于良性胸腔積液。TXNIP在肺部腫瘤及惡性胸腔積液發(fā)生過程中可能作為腫瘤抑制因子參與其中，并在惡性胸腔積液中呈低表達(dá)，這與前述相關(guān)研究結(jié)果一致。良、惡性胸腔積液患者血清中TXNIP濃度水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其可能與TXNIP組織起源和表達(dá)強(qiáng)度有關(guān)，也有可能與樣本量、誤差及偏倚等因素有關(guān)，這需要擴(kuò)大樣本量等進(jìn)行進(jìn)一步研究。本研究提示惡性胸腔積液中TXNIP水平與患者年齡、性別、是否吸煙、是否合并糖尿病、腫瘤組織類型等因素?zé)o明顯相關(guān)性。

Kiss1基因是腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，與腫瘤轉(zhuǎn)移的發(fā)生關(guān)系密切［11］。TXNIP通過調(diào)控Kiss1基因，發(fā)揮抗腫瘤轉(zhuǎn)移功能［12］。低氧誘導(dǎo)因子1α是介導(dǎo)腫瘤轉(zhuǎn)移的重要因子，TXNIP通過影響其功能，抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移［13］。本研究顯示伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的惡性胸腔積液TXNIP含量低于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的惡性胸腔積液，提示TXNIP可能在抑制肺部腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮作用。但是TXNIP抑制肺部腫瘤轉(zhuǎn)移的發(fā)生機(jī)制尚不清楚。CEA是目前臨床上應(yīng)用最廣泛的惡性腫瘤標(biāo)志物，用于多種惡性腫瘤的篩查和診斷。本研究顯示TXNIP單項(xiàng)檢測(cè)對(duì)鑒別診斷良惡性胸腔積液有一定價(jià)值，但是并不優(yōu)于CEA。本研究觀察到聯(lián)合檢測(cè)可以提高惡性胸腔積液診斷的靈敏度和特異度。

綜上所述，TXNIP對(duì)惡性胸腔積液的診斷具有一定價(jià)值，與CEA聯(lián)合檢測(cè)可以提高診斷靈敏度與特異度。然而，目前有關(guān)TXNIP在肺癌及肺癌所致胸腔積液的發(fā)病機(jī)制中的作用尚未明確，影響標(biāo)本檢測(cè)的因素等也未見相關(guān)報(bào)道。TXNIP能否成為臨床惡性胸腔積液診斷中一個(gè)新的腫瘤分子標(biāo)志物，有待于進(jìn)一步研究。

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Diagnostic value of TXNIP and CEA combined detection in differentiating between benign and malignant pleural effusion

Yuan Jieqing，Shu Jun，Wang Danping，et al
（Dept of Respiratory Medicine，The Fourth Affiliated Hospital of Anhui Medical University，Hefei 230022）

ObjectiveTo explore the diagnostic value of combined detection by thioredoxin－interacting protein（TXNIP）and carcinoembryonic antigen（CEA）in discriminating between benign and malignant pleural effusion．Methods The clinical data of 57 patients were collected from 25 cases of malignant pleural effusion and 32 of benign pleural effusion．The levels of TXNIP，CEA in serum and pleural effusion were measured by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）．Results The concentrations of TXNIP in patients with malignant pleural effusion were significantly lower than those patients in benign pleural effusion．But the difference in serum was not statistically significant between benign group and malignant group．Diagnostic sensitivity，specificity and agreement rate for TXNIP in malignant pleural effusion were 76%，87．5%and 86．96%respectively at diagnostic cut-off point of 89．57 μg／L，88%，90．6%and 91．23%for CEA at 5．285 μg／L．Diagnostic sensitivity and specificity value were 97．12%，79．28%respectively in parallel test，and 66．88%，98．83%in serial test．Conclusion The detection of TXNIP has certain value to the diagnosis of malignant pleural effusion，and joint detection with CEA can improve the diagnostic sensitivity and specificity value．However，the diagnostic value of TXNIP to malignant pleural effusion is not superior to CEA．

thioredoxin-interacting protein；carcinoembryonic antigen；pleural effusion；diagnosis

R 561．3；R 734．3

A

1000－1492（2015）03－0341－04

2014－11－23接收

安徽省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（編號(hào)：1308085MH141）；安徽醫(yī)科大學(xué)科研基金資助項(xiàng)目（編號(hào)：2010xkj115）

1安徽醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科，合肥 2300222安徽病原生物學(xué)省級(jí)實(shí)驗(yàn)室和人獸共患病安徽重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（安徽醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室），合肥230032

袁杰清，男，碩士研究生；束 軍，男，醫(yī)學(xué)博士，碩士生導(dǎo)師，責(zé)任作者，E-mail：J．Shu＠126．com