·臨床研究·

右歸飲對腎陽虛型子宮頸癌患者術(shù)后免疫功能的影響

霍熾文林小琦

東莞市第三人民醫(yī)院婦科，廣東東莞523000

摘要目的探討右歸飲對腎陽虛型子宮頸癌患者術(shù)后CD8+CD28- T細胞免疫功能的影響。方法搜集72例腎陽虛型子宮頸癌術(shù)后患者，將患者隨機分為觀察組和對照組，并選擇33例健康者作為健康對照組。觀察組35例給予右歸飲治療，對照組37例給予常規(guī)治療，比較治療前及治療3個月后2組患者CD8+CD28-T細胞及其細胞因子白介素10(IL-10)及轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)百分含量變化。結(jié)果治療前，觀察組與對照組的CD8+CD28-T細胞、IL-10及TGF-β1差異無統(tǒng)計學(xué)意義，且均顯著高于健康對照組(P<0.05)。治療后，觀察組CD8+CD28-T細胞、IL-10及TGF-β1水平均較治療前明顯下降(P<0.05)，且均顯著低于對照組(P<0.05)。結(jié)論CD8+CD28-T細胞及其細胞因子升高是子宮頸癌患者的重要表現(xiàn)，右歸飲可顯著下調(diào)腎陽虛型子宮頸癌患者術(shù)后CD8+CD28-T細胞的免疫功能。

關(guān)鍵詞子宮頸癌患者；腎陽虛；右歸飲；免疫功能

doi：10.3969/j.issn.1674-4616.2015.05.001

收稿日期：(2015-05-26)

Effect of Yougui Yin on the CD8+CD28-T Cells’Function for the Cervical Cancer Patients of

Kidney Yang Deficiency Who Underwent Excision

HUO Chiwen，LIN Xiaoqi

DepartmentofGynecology，theThirdPeople’sHospitalofDongguan，GuangdongDongguan523000，China

AbstractObjectiveTo study the effect of Yougui Yin on the CD8+CD28- T cells’function for the cervical cancer patients of kidney yang deficiency who underwent excision.MethodsSeventy-two cases of postoperative cervical cancer patients with kidney Yang deficiency were included.Thirty-five cases in the observation group were given Yougui Yin；the other thirty-seven cases in the control group were not given Yougui Yin.CD8+CD28- T cells，interleukin 10(IL-10)，and transforming growth factor beta 1(TGF-β1)were compared before and after treatment in the two groups.ResultsBefore treatment，there were no statistical differences for CD8+CD28-T cells，IL-10 and TGF-β1 between the observation group and the control group，and all of these were significantly higher than those of healthy people(P<0.05).After treatment，CD8+CD28-T cells，IL-10 and TGF-β1 in the observation group was significantly reduced(P<0.05)，and were significantly lower than those of the control group(P<0.05).ConclusionThe increase of CD8+CD28-T cells and its cytokines is one of the important manifestations in cervical cancer patients with kidney Yang deficiency；Yougui Yin can significantly improve by down-regulating CD8+CD28- T cell immune function.

Key wordscervical cancer patients；kidney Yang deficiency；Yougui Yin；immune function

腫瘤免疫調(diào)節(jié)治療是當前的熱點。中藥復(fù)方是腫瘤術(shù)后治療的主要措施之一，且多數(shù)經(jīng)典方劑已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)具有調(diào)節(jié)免疫的藥理學(xué)作用[1]，因此探討婦科腫瘤術(shù)后的中藥復(fù)方治療具有重要臨床意義。婦科腫瘤的辨證與腎緊密相關(guān)，其中腎精不足是主要病機，右歸飲是常用的中藥復(fù)方[2]。研究顯示，CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)與子宮頸癌發(fā)病相關(guān)，且國內(nèi)學(xué)者章圣輝等[3]發(fā)現(xiàn)子宮頸癌患者外周血CD4+CD25+Treg升高。同樣作為Treg的CD8+CD28-T細胞，是否也參與子宮頸癌的發(fā)病？目前尚缺少該方面的探討。為此，筆者使用右歸丸治療腎陽虛型子宮頸癌術(shù)后患者，觀察CD8+CD28-Treg及其細胞因子變化，現(xiàn)報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2011年1月—2014年7月于本院就診的腎陽虛型子宮頸癌術(shù)后患者72例作為觀察對象，按隨機法分為觀察組(35例)與對照組(37例)，觀察組給予右歸丸治療，對照組給予常規(guī)治療，并另選33例健康者作為健康對照組。2患者組的年齡、性別、病程、子宮切除范圍等臨床資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。

表1　2組一般臨床資料比較

1.2納入標準

①經(jīng)術(shù)后病理學(xué)確診為子宮頸癌；②術(shù)后證實分期為I～Ⅱ期，無病灶轉(zhuǎn)移，不需化療或放療；③無合并其他腫瘤；④排除自身免疫性疾??；⑤近8周未使用激素或免疫抑制劑[4]；⑥依從性好，能堅持隨訪。按照中醫(yī)證候標準[5]：證見虛胖體弱，畏寒怕冷，頭昏無力，腰膝酸軟，腹脹隆起，或腹脹有積液，白帶稀薄，或貧血消瘦，胎薄白，脈細無力者歸屬腎陽虛。

1.3CD8+CD28-Treg的流式細胞術(shù)檢測

CD8-FITC、CD28-PE、IFN-γ及IL-4抗體購自BECTON DICKINSON；溶血素OptiLyse C、同型對照試劑IgG1-FITC/IgG1-PE/IgG1-PC5購自BECKMAN COULTER公司；FACS Calibur多色流式細胞儀購自美國BD公司。采用Ficoll分離獲得外周血單核細胞，隨后應(yīng)用尼龍毛柱獲得T淋巴細胞，再用免

疫磁珠(MACS)孵育30 min后進行磁珠而分離出CD8+CD28-Treg，使用固定穿透劑對CD8+CD28-Treg胞內(nèi)IL-10及TGF-β1進行染色，使用雙激光光源，其中FL1和FL2熒光通道以相應(yīng)同種型鼠IgG染色細胞作陰陽分界線，仔細設(shè)置各熒光通道之間的熒光補償，然后進行IL-10及TGF-β1的檢測，運用FACSDIVA軟件對CD8+CD28-Treg、IL-10及TGF-β1百分含量進行分析[6]。

1.4治療方法與隨訪

觀察組在此基礎(chǔ)上給予右歸丸(北京同仁堂股份有限公司，國藥準字Z11021040，10丸裝，大蜜丸)治療，每次1丸，每日3次，連服3個月。對照組給予常規(guī)治療。治療3個月后復(fù)查CD8+CD28-Treg及其細胞因子水平。2組患者均予基本隨訪，包括3大常規(guī)、腹部及婦科超聲等檢查[7]。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理

2結(jié)果

治療前，觀察組與對照組CD8+CD28-T細胞、IL-10及TGF-β1差異均無統(tǒng)計學(xué)差異，但均顯著高于健康對照組(P<0.05)。治療后，觀察組CD8+CD28-T細胞、IL-10及TGF-β1水平均顯著低于對照組(P<0.05)，且觀察組CD8+CD28-T細胞、IL-10及TGF-β1均較治療前明顯下降(P<0.05)，且CD8+CD28-T細胞下降水平與健康對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；對照組僅CD8+CD28-T細胞較治療前顯著下降(P<0.05)，而IL-10及TGF-β1均較治療前差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2　2組治療前后免疫功能的變化 ± s)

與健康組比較*P<0.05；與對照組比較△P<0.05；與治療前比較▲P<0.05

3討論

CD8+T細胞與腫瘤的發(fā)病機制密切相關(guān)。部分腫瘤，如獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)患者表現(xiàn)為CD8+T細胞增多，而部分腸道腫瘤表現(xiàn)為CD8+T細胞降低[8]。因此，CD8+T細胞對于腫瘤而言具有異質(zhì)性，亦即在不同的腫瘤，其扮演不同性質(zhì)的角色。根據(jù)細胞膜是否表達CD28分子，CD8+T細胞可以被分為CD8+CD28+殺傷性T細胞及CD8+CD28-抑制性T細胞，后者由于可以表達細胞因子IL-10、TGF-β1從而發(fā)揮免疫增強或抑制的雙重作用，因此CD8+CD28-T細胞歸屬到CD4+CD25+同類的調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)當中[9]。究竟子宮頸癌患者的CD8+CD28-Treg發(fā)揮何種作用，目前尚缺少相關(guān)探討。

宮頸癌屬于中醫(yī)“帶下”、“無色帶下”、“崩漏”等范疇。根據(jù)天癸學(xué)說及養(yǎng)生學(xué)說，子宮頸癌的核心病因病機為腎虛，此類患者多有起居無常，房事無節(jié)等，耗傷腎氣而致腎陽虛[10]。

“以藥測證”是重要的臨證思想，是論證藥物與證候是否呼應(yīng)的重要手段。為探討上述問題，筆者采用了右歸飲作為觀察CD8+CD28-Treg變化趨勢及判斷性質(zhì)的藥物。右歸飲出自《景岳全書》，組成為熟地、山茱萸、山藥、枸杞子、杜仲、菟絲子、附子、肉桂、當歸、鹿角膠，具有溫補腎陽、填充精血之功效[11]。近年右歸丸被應(yīng)用于卵巢癌、子宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌等婦科惡性腫瘤，盡管其藥理機制尚未完全闡明，但現(xiàn)有的證據(jù)[12]顯示，熟地、山藥、枸杞子及鹿角膠等具有明確的免疫調(diào)節(jié)作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，治療前觀察組與對照組CD8+CD28-T細胞、IL-10及TGF-β1均無統(tǒng)計學(xué)差異，且均顯著高于健康人，這與Pita-Lopez等[13]報道的低分化子宮頸癌患者外周血CD8+CD28-T細胞升高具有一致性，這初步說明CD8+CD28-T細胞可能是子宮頸癌的一個免疫學(xué)特征，提示其可能是一個對發(fā)病起負面作用的淋巴細胞；觀察組與對照組上述三者無統(tǒng)計學(xué)差異，說明2組具有可比性。治療后，觀察組CD8+CD28-T細胞、IL-10及TGF-β1均較治療前明顯下降，進一步印證CD8+CD28-T細胞可能是對病情不利的指標，而且觀察組CD8+CD28-T細胞已下降至與健康人無統(tǒng)計學(xué)差異，說明CD8+CD28-T細胞、IL-10及TGF-β1三者都是右歸丸的主要靶淋巴細胞及靶細胞因子。治療后，對照組僅CD8+CD28-T細胞較治療前顯著下降，而IL-10及TGF-β1均較治療前無顯著性差異，說明在手術(shù)本身可能僅促進CD8+CD28-T細胞的下降，而對其細胞因子分泌無明顯影響。治療后，觀察組CD8+CD28-T細胞、IL-10及TGF-β1均顯著低于對照組，進一步印證了是否應(yīng)用右歸丸治療，2組患者的免疫功能呈現(xiàn)顯著性差異。

通過本研究筆者認為，CD8+CD28-T細胞及其細胞因子升高是子宮頸癌患者的重要表現(xiàn)，前者可能是腎陽虛的物質(zhì)基礎(chǔ)，可能是屬于“邪”范圍的淋巴細胞。右歸飲可顯著下調(diào)腎陽虛型子宮頸癌患者術(shù)后CD8+CD28-T細胞的免疫功能，可能是該復(fù)方通過“驅(qū)邪”而實現(xiàn)“扶正”的藥理學(xué)基礎(chǔ)。

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