楊　峰　楊高中　夏扣平　張小春

(九江市第三人民醫(yī)院消化內科，江西　九江　332000)

?

英夫利昔單抗對高脂飼養(yǎng)大鼠腸黏膜屏障及胰島素抵抗的影響

楊峰楊高中夏扣平1張小春

(九江市第三人民醫(yī)院消化內科，江西九江332000)

摘要〔〕目的探討英夫利昔單抗對高脂飼養(yǎng)大鼠腸黏膜功能及胰島素抵抗(IR)的影響。方法30只大鼠隨機分為3組：正常組，模型組，英夫利昔單抗組。通過高脂飼料喂養(yǎng)大鼠造模，6 w后IR大鼠造模成功。模型組繼續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)6 w，治療組在高脂飼料喂養(yǎng)基礎上分別于0，2，4 w給予英夫利昔單抗肌注(3 mg/kg)1次。于6 w處死大鼠，頸總動脈取血并取小腸標本。全自動生化分析儀檢測血清空腹血糖(FPG)、空腹胰島素(FINS)并計算胰島素敏感指數；ELISA法檢測大鼠血清腫瘤壞死因子(TNF)-α及白細胞介素(IL)-10含量；比色法檢測血清二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸含量；HE染色檢測大鼠腸黏膜形態(tài)；Western印跡檢測大鼠小腸組織核因子(NF)-κB p65、pp65、IκBα、p-IκBα、閉合蛋白(ZO-1)、咬合蛋白的表達。結果與正常組比較，模型組IR大鼠血清中FPG、FINS水平顯著上升，胰島素敏感指數(ISI)下降，大鼠小腸黏膜損害程度較深，炎癥細胞浸潤較多，血清中DAO、D-乳酸及TNF-α含量上升，IL-10含量下降，NF-κB p65及IκBα磷酸化水平升高，ZO-1及咬合蛋白表達量下降；英夫利昔單抗可顯著抑制此變化。結論英夫利昔單抗可以通過NF-κB信號通路來調節(jié)TNF-α等相關炎癥因子含量，并間接影響TNF-α誘導的緊密連接蛋白的表達，從而改善大鼠腸黏膜功能，治療大鼠IR。

關鍵詞〔〕英夫利昔單抗；胰島素抵抗；腸黏膜屏障；腫瘤壞死因子-α；核因子-κB；信號通路

1江西省永修縣人民醫(yī)院內3科

第一作者：楊峰(1974-)，男，主治醫(yī)師，碩士，主要從事消化系統(tǒng)疾病臨床研究。

胰島素抵抗(IR)是多種代謝性疾病的始動因素和致病基礎。隨著現代生活方式的改變，各種與IR相關的代謝性疾病，如肥胖、糖尿病、高血壓及類風濕關節(jié)炎等發(fā)病率逐年上升〔1～3〕。IR是一個慢性非特異性炎癥持續(xù)過程〔4〕。其病理過程為：長期高脂飲食，引起腸道菌群結構發(fā)生改變，增加了腸道的通透性，導致腸道屏障功能受損，腸道細菌所產生的內毒素(LPS)大量進入門靜脈系統(tǒng)，形成代謝性內毒素血癥；從而刺激核因子(NF)-κB信號通路〔5〕釋放炎性因子如腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細胞介素(IL)-1、IL-6〔6〕等，導致IR；而炎性因子進一步抑制腸道上皮緊密連接蛋白的表達〔7〕，加重腸道屏障功能損傷。說明腸道屏障功能障礙為發(fā)生IR的啟動因素，其中TNF-α高度表達是發(fā)生IR的中心環(huán)節(jié)。英夫利昔單抗目前廣泛應用于炎癥性腸病、類風濕關節(jié)炎、強直性脊柱炎、銀屑病及銀屑病關節(jié)炎等疾病的治療，并已取得良好的療效〔8～11〕，作為一種新型生物制劑，與體內多種形式的TNF-α有較強結合能力，降低TNF-α生物活性，從而阻斷炎癥反應〔12〕，并抑制TNF-α誘導的腸上皮細胞緊密連接蛋白表達的降低〔13〕，降低腸上皮通透性，從而保護腸黏膜屏障功能〔14〕。高脂飼養(yǎng)Swiss小鼠，可產生IR及糖耐受，短期給予英夫利昔單抗可改善癥狀〔15〕。英夫利昔單抗可改善強直性脊柱炎病人IR〔11〕。自發(fā)性高血壓大鼠主動脈中胰島素活性下降，TNF-α活性提高，給予一定劑量英夫利昔，可抑制Iκβ磷酸化，改善此性狀〔16〕?；谝陨侠碚摫尘埃覀兊贸黾僭O，英夫利昔單抗可以通過NF-κB信號通路降低體內TNF-α水平及生物活性，改善高脂大鼠腸黏膜障礙從而治療IR，并對此進行探討。

1材料和方法

1.1動物5～6周齡，160～180 g的健康成年SD 雄性大鼠30只，購于南昌大學動物部，室內溫度控制在(23±2)℃，大鼠自由飲食和攝水。

1.2藥物及飼料英夫利昔單抗(西安楊森制藥有限公司)；普通飼料(100 g)：豆粕25 g、黃豆5 g、玉米30 g、酵母2.5 g、鼓子10 g、魚粉10 g、骨粉2.5 g、高粱5 g、標準粉8.5 g、豆油1 g、鹽0.5 g。高脂飼料(100 g)：基礎飼料44 g、雞蛋20 g、奶粉15 g、豬油15 g、鮮黃豆芽5 g、魚肝油1 g。

1.3試劑 大鼠血清TNF-α檢測試劑盒(Bender MedSystems公司)；BCA法蛋白定量試劑盒(碧云天生物技術研究所)；β-actin(碧云天生物技術研究所)；閉合蛋白(ZO-1)蛋白抗體(武漢博士德生物工程有限公司)；NF-κB p65，pp65，IκBα，p-IκBα蛋白抗體(Epitmics公司)；咬合蛋白抗體(Occludin,Abcam公司)；二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

1.4儀器全自動生化分析儀(德國 ROCHE MODULAR SWA 公司 )；LDZ5-2 型臺式低速離心機(北京醫(yī)用離心廠)；ZT-12P 生物組織自動脫水機(湖北孝感亞光醫(yī)用電子技術有限公司)；電泳儀，轉印電泳儀，ChemiDocTM XRS凝膠成像系統(tǒng)(美國Bio-Rad公司)；酶標儀(瑞士TECAN集團公司)；-80℃冰箱(美國Thermo公司)。

1.5大鼠IR模型的建立大鼠適應性喂養(yǎng)1 w后，給予高脂飼料喂養(yǎng)。飼養(yǎng)6 w后，尾靜脈取血測空腹血糖(FPG)及胰島素(FINS)，并計算胰島素敏感指數(ISI)，ISI<-4.11±0.32即IR大鼠造模成功。

1.6動物分組及干預方法正常組：一直給予普通飼料喂養(yǎng)；將造模成功的20只大鼠隨機分為：模型組：繼續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)6 w；英夫利昔單抗組：在高脂飼料喂養(yǎng)基礎上分別于0，2，4 w給予英夫利昔單抗肌注(3 mg/kg)1次。

1.7標本采集各組大鼠禁食12 h，麻醉，經頸總動脈采血，并處死大鼠，取小腸標本，標本皆放于-80℃冰箱保存待測。

1.8血清葡萄糖、胰島素及ISI的測定血清葡萄糖、胰島素由我院檢驗科生化研究室采用全自動生化分析儀檢測，并計算ISI。

1.9血清TNF-α及IL-10含量的測定采用雙抗夾心ELISA法。分別按試劑盒說明書步驟進行操作。

1.10血清DAO及D-乳酸含量的測定采用改良分光光度法測定。分別按試劑盒說明書步驟進行操作。

1.11HE染色小腸組織標本經10%中性甲醛浸泡，石蠟包埋，切片，烘干。二甲苯脫蠟，無水、95%、80%乙醇脫水，流水沖洗，蘇木素浸泡，鹽酸酒精浸泡，流水沖洗至返藍，伊紅復染，流水沖洗，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，吹干后中性樹膠封片，后鏡檢。

1.12Western印跡取適量小腸組織標本，加入RIPA裂解液，裂解，離心，收獲蛋白。根據BCA試劑盒對蛋白濃度進行測定。蛋白上樣，跑SDS凝膠電泳，濕法磚膜。一抗孵育，4℃過夜；漂洗后，二抗室溫孵育1～2 h。漂洗，滴加ECL曝光液，在凝膠成像系統(tǒng)中曝光。用“Quantity one”軟件對各抗體條帶灰度值進行統(tǒng)計。

1.13統(tǒng)計學方法采用SPSS17.0軟件進行t檢驗、One-Way ANOVA。

2結果

2.1英夫利昔單抗對高脂飼養(yǎng)大鼠FPG，FINS及ISI的影響與正常組比較，模型組中大鼠FINS，FINS水平上升，ISI下降(P<0.01)；與模型組比較，英夫利昔單抗組能降低IR大鼠FPG、FINS水平，并提高ISI(P<0.05)。見表1。

表1　英夫利昔單抗對高脂飼養(yǎng)大鼠FPG、

與正常組比較：1)P<0.01;與模型組比較：2)P<0.01，下表同

2.2HE染色檢測英夫利昔單抗對高脂飼養(yǎng)大鼠腸黏膜形態(tài)的影響正常組小腸黏膜各層結構完整連續(xù)，極少炎癥細胞浸潤；模型組中黏膜糜爛，大量淋巴細胞浸潤；英夫利昔單抗治療組小腸黏膜損害程度較輕，炎癥細胞浸潤較少，各層細胞結構較為清楚。見圖1。

圖1　英夫利昔單抗對高脂飼養(yǎng)大鼠腸黏膜形態(tài)的影響(×400)

2.3英夫利昔單抗對高脂飼養(yǎng)大鼠血清TNF-α及IL-10水平的影響與正常組比較，模型組大鼠血清中TNF-α水平上升，IL-10水平下降(P<0.01)；與模型組比較，英夫利昔單抗能降低IR大鼠血清中TNF-α含量并提高IL-10水平(P<0.05)。見表2。

表2　英夫利昔單抗對高脂飼養(yǎng)大鼠血清TNF-α、

2.4英夫利昔單抗對高脂飼養(yǎng)大鼠腸黏膜通透性的影響與正常組比較，模型組中大鼠血清DAO及D-乳酸水平上升(P<0.01)；與模型組比較，英夫利昔單抗能降低IR大鼠血清中DAO及D-乳酸水平(P<0.05)。見表3。

表3　英夫利昔單抗對高脂飼養(yǎng)

2.5英夫利昔對高脂飼養(yǎng)大鼠腸上皮緊密連接蛋白含量的影響與正常組比較，模型組IR大鼠小腸組織中ZO-1和Occludin表達量顯著下降(P<0.01)；與模型組比較，英夫利昔單抗能提高IR大鼠小腸組織中ZO-1和Occludin表達(P<0.05)。見圖2，表4。

圖2　英夫利昔單拉對高脂飼養(yǎng)大鼠腸上皮緊密連接蛋白含量的影響

組別ZO-1/GADPHOccludin/GADPH正常組2.38±0.191.27±0.05模型組0.19±0.001)0.31±0.041)英夫利昔單抗組1.16±0.172)1.07±0.102)

2.6英夫利昔對高脂飼養(yǎng)大鼠NF-κB信號通路的影響與正常組比較，模型組IR大鼠小腸組織NF-κB p65和IκBα磷酸化水平上升(P<0.01)；與模型組比較，英夫利昔單抗能抑制IR大鼠小腸組織中NF-κB p65和IκBα磷酸化水平(P<0.05)。見圖3，表5。

圖3　英夫利昔單抗對高脂飼養(yǎng)大鼠NF-κB信號通路的影響

組別p-IκBα/IκBαpp65/p65正常組0.35±0.020.26±0.05模型組1.38±0.151)0.89±0.031)英夫利昔單抗組0.79±0.082)0.45±0.052)

3討論

IR是指外周圍靶器官對胰島素敏感度及反應性下降的一種病理狀態(tài)，主要表現為糖脂代謝異常等〔2,3〕。我們實驗室用高脂飼料喂養(yǎng)大鼠在6 w出現了FPG、FINS上升癥狀，胰島素敏感指數降低，顯示了IR癥狀，與El等〔17〕的觀點肥胖導致人體產生IR一致。英夫利昔單抗可改善強直性脊柱炎病人IR〔11〕。而本實驗也發(fā)現英夫利昔單抗能降低IR。

TNF-α主要由活化的單核細胞和巨噬細胞產生，可促進炎癥部位白細胞的聚集和活化，多種炎癥介質。TNF-α在肥胖病人和風濕性關節(jié)炎動物模型的腸道組織中含量上升并與胰島素敏感性下降有關〔18,19〕。TNF-α高度表達是發(fā)生IR的中心環(huán)節(jié)，因此，抑制TNF-α的顯著表達可治療IR?？筎NF-α可通過胰島素信號通路治療高IR類風濕關節(jié)炎患者〔20〕。高脂飼養(yǎng)的Wistar大鼠給予英夫利昔10 d，可抑制肝組織中促炎因子TNF-α、IL-1β含量〔12〕。Olsen等〔21,22〕利用英夫利昔單抗治療潰瘍性結腸炎患者，結果顯示治療后腸黏膜中TNF-α水平顯著降低。本實驗結果也發(fā)現IR抵抗的大鼠，血清中TNF-α含量顯著上升，給予英夫利昔單抗后，可顯著降低TNF-α含量。IL-10是Tp細胞分泌產生的抗炎細胞因子，可直接抑制Th1細胞，減少促炎因子的產生。Menassa等〔23〕的研究顯示，實驗性結腸炎小鼠腸黏膜中IL-10水平顯著低于正常組，同時小鼠IL-10基因沉默也可誘發(fā)實驗性結腸炎的產生，經治療后，腸道炎癥較模型組有所緩解。本實驗結果也發(fā)現IR大鼠，血清中IL-10含量顯著下降，給予英夫利昔單抗后，可提高IL-10含量。

高脂飼養(yǎng)大鼠，會使大鼠腸道功能受損，腸道屏障通透性升高，使腸道內有害物質如細菌或毒素通過腸黏膜進入體內，產生炎癥，導致腸源性內毒素血癥，影響胰島素信號通路，產生IR。英夫利昔單抗可抑制克羅恩病人血清中TNF-α表達及炎癥細胞浸潤〔9〕并恢復腸黏膜形態(tài)〔8,10〕。英夫利昔單抗可抑制缺血再灌注誘導的大鼠黏膜損傷〔24〕。本實驗發(fā)現模型組大鼠腸黏膜糜爛，黏膜下層水腫，淋巴細胞浸潤淋巴細胞及中性粒細胞浸潤。英夫利昔能改善此癥狀。

DAO主要位于小腸黏膜，在血漿中含量極低，當腸黏膜通透性增加時，DAO進入腸細胞間使血液中DAO水平升高，故能反映腸黏膜通透性變化。D-乳酸是腸道固有細菌的代謝終產物，生理狀態(tài)下血中D-乳酸含量很低，當各種因素誘導腸黏膜損傷，腸上皮細胞間隙連接破壞，腸道屏障通透性增高，腸腔內的D-乳酸通過受損腸黏膜進入血循環(huán)，導致其含量上升，故D-乳酸水平也可反映腸黏膜損害程度和通透性變化。本實驗結果也發(fā)現IR抵抗的大鼠，血清中DAO和D-乳酸水平顯著上升，給予英夫利昔單抗后，可顯著降低DAO和D-乳酸含量。

腸黏膜上皮屏障是由完整的腸上皮細胞和相鄰腸上皮細胞之間的連接構成。上皮細胞間通過形成緊密連接蛋白網絡復合物，防止腸道內有害物質對腸腔外組織器官侵犯。其中緊密連接(TJ)是決定腸黏膜通透性最重要的連接方式，研究發(fā)現當緊密連接斷裂或緊密連接蛋白減少，會使腸上皮細胞間隙增大，腸黏膜通透性增加〔25,26〕。ZO-1蛋白屬于膜結合鳥苷酸激酶家族，為跨膜蛋白，起中介作用，并且還可與其他緊密連接蛋白相連。TNF-α與結腸癌上皮細胞株(CaCo-2細胞株)共同培養(yǎng)，發(fā)現腸道屏障功能降低，ZO-1 mRNA和蛋白表達皆下降〔27〕。咬合蛋白也是構成緊密連接成分之一，能使細胞以拉鏈式緊密結合，并參與緊密連接形成的信號調節(jié)。缺乏完整結構的咬合蛋白片段轉入缺乏TJ的L-成纖維細胞未能改善細胞屏障功能，當轉入咬合蛋白完整片段后，相鄰細胞之間可以形成TJ樣結構〔28〕。Costantini等〔29〕，分別在燒傷引起的腸黏膜屏障損害及感染性腸病中觀察到咬合蛋白和ZO-1的表達顯著降低。TNFR-1(-/-)小鼠或英夫利昔治療組小鼠可改善小鼠的腸黏膜障礙功能，是通過提高腸上皮細胞緊密連接蛋白表達來實現的〔13〕。本實驗結果也發(fā)現IR抵抗的大鼠腸黏膜形態(tài)受損，咬合蛋白和ZO-1表達下降，給予英夫利昔后，可顯著提高咬合蛋白和ZO-1的表達量。

NF-κB通路是體內主要的炎癥信號轉導通路，與IR的發(fā)生有密切的聯系，已成為研究改善IR的新靶點〔5,31〕。在細胞中最常見的作用形式為 p65 及 p50 組成的二聚體，未受刺激時與 IκB 結合，當受到刺激時，IκB被降解，磷酸化，從而釋放NF-κB p65，使之恢復轉錄活性并從細胞質轉移到細胞核內，調節(jié)炎癥相關基因的表達。Vona-Davis〔32〕等發(fā)現NF-κB的拮抗劑可以顯著抑制組織病理損傷及大量炎癥因子的產生。IR/糖尿病小鼠暴露于PM2.5空氣中4～5 w，腦注射IKKβ抑制劑IMD-0354可改善小鼠胰島素敏感度，抑制TNFα含量〔33〕。英夫利昔單抗治療12個克羅恩病人，發(fā)現腸黏膜中炎癥細胞數目減少，TNF-α含量降低，是通過NF-κB活性實現的〔14〕。本實驗也發(fā)現IR大鼠腸組織中NF-κB p65及IκBα磷酸化程度上升，英夫利昔單抗可顯著抑制NF-κB信號通路的活化。Al-Sadi等〔34〕使用NF-κB抑制劑或NF-κB p65 siRNA基因沉默技術降低炎癥因子引起的緊密連接破壞。說明英夫利昔單抗可以通過NF-κB信號通路來調節(jié)TNF-α相關炎癥因子含量，并間接影響TNF-α誘導的緊密連接蛋白的表達，從而改善大鼠腸黏膜功能進而治療IR大鼠。

雖然本實驗得到英夫利昔單抗可通過NF-κB信號通路調節(jié)TNF-α相關炎癥因子含量，并間接影響TNF-α誘導的緊密連接蛋白的表達，并改善大鼠腸黏膜功能從而治療大鼠IR。但是實驗設計還是有所不足。首先是本實驗是從蛋白水平探討英夫利昔單抗對于NF-κB信號通路的影響，沒有涉及基因水平，mRNA的合成和蛋白質的合成可能不在同一個水平上，會產生誤差，影響實驗結果。且本實驗缺少NF-κB信號通路抑制劑給藥組，來進一步更加精確的得到結論。

參考文獻4

1Ursini F,Naty S,Grembiale RD.Infliximab and insulin resistance 〔J〕.Autoimmun Rev,2010;9(8):536-9.

2Hernandez AV,Guarnizo M,Miranda Y,etal.Association between insulin resistance and breast carcinoma:a systematic review and meta-analysis 〔J〕.PLoS One,2014;9(6):e99317.

3Gougeon R.Insulin resistance of protein metabolism in type 2 diabetes and impact on dietary needs:a review 〔J〕.Can J Diabet,2013;37(2):115-20.

4Wellen KE,Hotamisligil GS.Inflammation,stress,and diabetes 〔J〕.J Clin Invest,2005;115(5):1111-9.

5Yang SJ,Choi JM,Park SE,etal.Preventive effects of bitter melon (Momordica charantia)against insulin resistance and diabetes are associated with the inhibition of NF-kappaB and JNK pathways in high-fat-fed OLETF rats 〔J〕.J Nutr Biochem,2015;26(3):234-40.

6Mohd-Radzman NH,Ismail WI,Adam Z,etal.Potential roles of stevia rebaudiana bertoni in abrogating insulin resistance and diabetes:a review 〔J〕.Evid Based Complement Alternat Med,2013;2013:718049.

7Hallam MC,Reimer RA.Postnatal prebiotic fiber intake in offspring exposed to gestational protein restriction has sex-specific effects on insulin resistance and intestinal permeability in rats 〔J〕.J Nutr,2014;144(10):1556-63.

8Sloan S,Maxwell P,Salto-Tellez M,etal.FOXP3+ regulatory T-cell counts correlate with histological response in Crohn's colitis treated with infliximab 〔J〕.Pathol Int,2014;64(12):624-7.

9Liu C,Xia X,Wu W,etal.Anti-tumour necrosis factor therapy enhances mucosal healing through down-regulation of interleukin-21 expression and T helper type 17 cell infiltration in Crohn's disease 〔J〕.Clin Exp Immunol,2013;173(1):102-11.

10Meijer MJ,Mieremet-Ooms MA,van Duijn W,etal.Effect of the anti-tumor necrosis factor-alpha antibody infliximab on the ex vivo mucosal matrix metalloproteinase-proteolytic phenotype in inflammatory bowel disease 〔J〕.Inflamm Bowel Dis,2007;13(2):200-10.

11Genre F,Lopez-Mejias R,Miranda-Filloy JA,etal.Correlation between insulin resistance and serum ghrelin in non-diabetic ankylosing spondylitis patients undergoing anti-TNF-alpha therapy 〔J〕.Clin Exp Rheumatol,2013;31(6):913-8.

12Barbuio R,Milanski M,Bertolo MB,etal.Infliximab reverses steatosis and improves insulin signal transduction in liver of rats fed a high-fat diet 〔J〕.J Endocrinol,2007;194(3):539-50.

13Fries W,Muja C,Crisafulli C,etal.Dynamics of enterocyte tight junctions:effect of experimental colitis and two different anti-TNF strategies 〔J〕.Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol,2008;294(4):G938-G947.

14Guidi L,Costanzo M,Ciarniello M,etal.Increased levels of NF-kappaB inhibitors (IkappaBalpha and IkappaBgamma)in the intestinal mucosa of Crohn's disease patients during infliximab treatment 〔J〕.Int J Immunopathol Pharmacol,2005;18(1):155-64.

15Araujo EP,De Souza CT,Ueno M,etal.Infliximab restores glucose homeostasis in an animal model of diet-induced obesity and diabetes 〔J〕.Endocrinology,2007;148(12):5991-7.

16Filho AG,Kinote A,Pereira DJ,etal.Infliximab prevents increased systolic blood pressure and upregulates the AKT/eNOS pathway in the aorta of spontaneously hypertensive rats 〔J〕.Eur J Pharmacol,2013;700(1-3):201-9.

17El AM,Ruiz DAJ,Angulo J,etal.Preserved endothelial function in human obesity in the absence of insulin resistance 〔J〕.J Transl Med,2013;11(2):263.

18Wang N,Wang H,Yao H,etal.Expression and activity of the TLR4/NF-kappaB signaling pathway in mouse intestine following administration of a short-term high-fat diet 〔J〕.Exp Ther Med,2013;6(3):635-40.

19Shinoki A,Hara H.Dietary fructo-oligosaccharides improve insulin sensitivity along with the suppression of adipocytokine secretion from mesenteric fat cells in rats 〔J〕.Br J Nutr,2011;106(8):1190-7.

20Stagakis I,Bertsias G,Karvounaris S,etal.Anti-tumor necrosis factor therapy improves insulin resistance,beta cell function and insulin signaling in active rheumatoid arthritis patients with high insulin resistance 〔J〕.Arthritis Res Ther,2012;14(3):R141.

21Olsen T,Cui G,Goll R,etal.Infliximab therapy decreases the levels of TNF-alpha and IFN-gamma mRNA in colonic mucosa of ulcerative colitis 〔J〕.Scand J Gastroenterol,2009;44(6):727-35.

22Olsen T,Goll R,Cui G,etal.TNF-alpha gene expression in colorectal mucosa as a predictor of remission after induction therapy with infliximab in ulcerative colitis 〔J〕.Cytokine,2009;46(2):222-7.

23Menassa R,Du C,Yin ZQ,etal.Therapeutic effectiveness of orally administered transgenic low-alkaloid tobacco expressing human interleukin-10 in a mouse model of colitis 〔J〕.Plant Biotechnol J,2007;5(1):50-9.

24Yang Q,Zheng FP,Zhan YS,etal.Tumor necrosis factor-alpha mediates JNK activation response to intestinal ischemia-reperfusion injury 〔J〕.World J Gastroenterol,2013;19(30):4925-34.

25Yang S,Yu M,Sun L,etal.Interferon-gamma-induced intestinal epithelial barrier dysfunction by NF-kappaB/HIF-1alpha pathway 〔J〕.J Interferon Cytokine Res,2014;34(3):195-203.

26Wang Y,Tong J,Chang B,etal.Effects of alcohol on intestinal epithelial barrier permeability and expression of tight junction-associated proteins 〔J〕.Mol Med Rep,2014;9(6):2352-6.

27Costantini TW,Deree J,Loomis W,etal.Phosphodiesterase inhibition attenuates alterations to the tight junction proteins occludin and ZO-1 in immunostimulated Caco-2 intestinal monolayers 〔J〕.Life Sci,2009;84(1-2):18-22.

28Kubota K,Furuse M,Sasaki H,etal.Ca(2+)-independent cell-adhesion activity of claudins,a family of integral membrane proteins localized at tight junctions 〔J〕.Curr Biol,1999;9(18):1035-8.

29Costantini TW,Loomis WH,Putnam JG,etal.Burn-induced gut barrier injury is attenuated by phosphodiesterase inhibition:effects on tight junction structural proteins 〔J〕.Shock,2009;31(4):416-22.

30Vivinus-Nebot M,Frin-Mathy G,Bzioueche H,etal.Functional bowel symptoms in quiescent inflammatory bowel diseases:role of epithelial barrier disruption and low-grade inflammation 〔J〕.Gut,2014;63(5):744-52.

31Elshazly SM.Ameliorative effect of nicorandil on high fat diet induced non-alcoholic fatty liver disease in rats 〔J〕.Eur J Pharmacol,2015;748:123-32.

32Vona-Davis L,Yu A,Magabo K,etal.Peptide YY attenuates transcription factor activity in tumor necrosis factor-alpha-induced pancreatitis 〔J〕.J Am Coll Surg,2004;199(1):87-95.

33Liu C,Fonken LK,Wang A,etal.Central IKKbeta inhibition prevents air pollution mediated peripheral inflammation and exaggeration of type II diabetes 〔J〕.Part Fibre Toxicol,2014;11:53.

34Al-Sadi R,Ye D,Said HM,etal.IL-1beta-induced increase in intestinal epithelial tight junction permeability is mediated by MEKK-1 activation of canonical NF-kappaB pathway 〔J〕.Am J Pathol,2010;177(5):2310-22.

〔2014-09-16修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)

基金項目：江西省衛(wèi)生計生委科技計劃項目(20141725)

中圖分類號〔〕R589〔

文獻標識碼〕A〔

文章編號〕1005-9202(2015)21-6045-05；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.21.018