西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科(西安710004)　段　釗　韓紅芳　王　穎

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血清維生素D濃度與子宮內(nèi)膜癌相關(guān)性研究*

西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科(西安710004)段釗韓紅芳王穎

摘要目的：探討血清維生素D濃度與子宮內(nèi)膜癌的相關(guān)性。 方法：收集子宮內(nèi)膜相關(guān)病變患者118例為試驗(yàn)組，其中子宮內(nèi)膜增生癥22例，子宮內(nèi)膜癌96例，并以30例體檢健康婦女作為對(duì)照組。收集所有研究對(duì)象的清晨空腹肘靜脈血標(biāo)本。采用放射免疫法檢測(cè)標(biāo)本血清中維生素D的濃度。結(jié)果：子宮內(nèi)膜癌患者血清維生素D水平較正常對(duì)照組減低，隨著子宮內(nèi)膜癌病理分級(jí)及FIGO分期的升高，血清維生素D濃度逐漸減低，有淋巴轉(zhuǎn)移患者較無淋巴轉(zhuǎn)移者血清維生素D濃度亦減低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：血清維生素D濃度與子宮內(nèi)膜癌惡性程度呈負(fù)相關(guān)。

主題詞子宮內(nèi)膜腫瘤 維生素D@抗腫瘤作用

本研究通過檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者血清維生素D的濃度，初步探討血清維生素D水平與子宮內(nèi)膜癌臨床病理學(xué)特征間的相關(guān)性。

對(duì)象與方法

1研究對(duì)象收集2014年1月至2015年12月西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科收治的子宮內(nèi)膜相關(guān)病變患者118例為試驗(yàn)組，其中子宮內(nèi)膜增生癥22例，子宮內(nèi)膜癌96例，并以30例體檢健康婦女作為對(duì)照組。收集研究對(duì)象的清晨空腹肘靜脈血標(biāo)本。所有病例按照子宮內(nèi)膜活檢或術(shù)后病理學(xué)診斷分組，所有患者均未行放療、化療和激素治療，試驗(yàn)組年齡28～72歲，平均年齡50.5歲，對(duì)照組年齡25～70歲，平均年齡45.5歲。子宮內(nèi)膜癌的分類按照1988年國(guó)際婦科病理協(xié)會(huì)(ISGP)的分類法分類，并按2009年5月國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)重新修訂的子宮內(nèi)膜癌的手術(shù)病理分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理分級(jí)和分期[1]。

2方法標(biāo)本采集及預(yù)處理 取患者的空腹靜脈血5ml，分離血清，凍存于-80℃的冰箱。血清VD測(cè)定采用采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)，酶標(biāo)儀檢測(cè)血清25(OH)2VD3，具體操作步驟按照說明書進(jìn)行。

3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0 軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析, 方法包括t檢驗(yàn)、單因素方差分析等，P<0.05認(rèn)為有顯著性差異。

結(jié)果

正常對(duì)照組25(OH)2VD3水平為37.78±4.95pg/ml，子宮內(nèi)膜癌患者為29.39±6.36pg/ml，子宮內(nèi)膜增生癥為31.51±3.86pg/ml，子宮內(nèi)膜癌和子宮內(nèi)膜增生癥患者血清25(OH)2VD3水平均顯著低于正常對(duì)照組，子宮內(nèi)膜增生癥與子宮內(nèi)膜癌之間無顯著性差異(P=0.148)；病理分級(jí)結(jié)果為：G1級(jí)患者血清25(OH)2VD3水平為34.16±6.07pg/ml，G2級(jí)的患者為30.65±5.60pg/ml，G3級(jí)的患者為25.06±5.71pg/ml。兩兩比較的結(jié)果顯示，病理分級(jí)G1和G3級(jí)(P=0.02)、G2和G3級(jí)(P=0.000)的患者血清25(OH)2VD3水平均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；G1和G2級(jí)患者無顯著性差異(P=0.054)；FIGO分期Ⅰ期患者血清25(OH)2VD3水平為33.72±5.26pg/ml，Ⅱ期患者為29.76±6.24pg/ml，Ⅲ期患者為25.79±5.63pg/ml。兩兩比較的結(jié)果顯示Ⅰ期和Ⅱ期(P=0.032)，Ⅰ期與Ⅲ期(P=0.003)，Ⅱ期與Ⅲ期(P=0.021)患者血清 25(OH)2VD3水平差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者血清25(OH)2VD3水平為30.46±5.97pg/ml，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者為24.74±6.06pg/ml，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001)。表明血清25(OH)2VD3水平與子宮內(nèi)癌惡性程度呈負(fù)相關(guān)性。

討論

維生素D的前體7-脫氫膽固醇存在于皮膚中，在陽光的作用下轉(zhuǎn)化為維生素D3，維生素D3隨血液循環(huán)到肝臟轉(zhuǎn)化為維生素D的另一種形式25位單脫氧膽固醇，這種形式的效用更大。隨后25位單脫氧膽固醇進(jìn)入腎臟被轉(zhuǎn)化為1，25位二羥膽鈣化醇，此形式是維生素D活性形式，活性最強(qiáng)。25(OH)D3是維生素D在血液中的主要運(yùn)輸形式，其血清濃度高，半衰期長(zhǎng)，是評(píng)價(jià)體內(nèi)維生素D營(yíng)養(yǎng)狀況最為可靠的指標(biāo)。我們測(cè)定所指的維生素D也就是25(OH)D3血清水平。

流行病學(xué)及實(shí)驗(yàn)室研究證明了維生素D及其類似物具有明顯可靠的腫瘤防治作用。目前認(rèn)為，維生素D作為促進(jìn)鈣吸收的活性物質(zhì)，與鈣的協(xié)同發(fā)揮抗腫瘤作用；維生素D的受體作為核受體，參與靶基因的調(diào)控，進(jìn)而干預(yù)腫瘤細(xì)胞的增殖與分化，影響瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為。維生素D還可結(jié)合到細(xì)胞表面膜受體或者其它受體，介導(dǎo)第二受體激活旁路通路，控制許多參與過量表達(dá)生物活性的基因表達(dá)。另外，維生素D通過調(diào)控細(xì)胞周期、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、影響生長(zhǎng)因子等途徑達(dá)到預(yù)防和治療癌癥的作用。

維生素D在體內(nèi)外試驗(yàn)中均可抑制子宮內(nèi)膜癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。Yabushita等[2]發(fā)現(xiàn)50nmol的calcitriol可以抑制子宮內(nèi)膜癌RL95-2細(xì)胞株的生長(zhǎng)，RL95-2細(xì)胞的生長(zhǎng)形態(tài)也發(fā)生改變，由極性腺樣結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變?yōu)橹鶢?。維生素D與鉑類藥物聯(lián)合使用，可以增強(qiáng)鉑類藥物抗腫瘤作用。Saunders等[3]研究證實(shí)卡鉑和calcitriol聯(lián)合應(yīng)用可以以濃度依賴方式抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。因而可以確定維生素D對(duì)子宮內(nèi)膜癌無論單用，還是與抗腫瘤藥物聯(lián)合應(yīng)用，均能抑制瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。Lee的研究[4]發(fā)現(xiàn)calcitriol與雌激素聯(lián)合使用促進(jìn)了子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯，顯現(xiàn)了抗腫瘤作用。

Nada等的研究發(fā)現(xiàn)一個(gè)并不引起血鈣升高的維生素D2衍生物抑制了裸鼠的移植卵巢以及子宮內(nèi)膜癌的生長(zhǎng)。這也是通過體內(nèi)補(bǔ)充維生素D抑制腫瘤的生長(zhǎng)，相對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞抗腫瘤作用更令人信服維生素D的抗子宮內(nèi)膜癌的作用。美國(guó)喬治敦大學(xué)的一項(xiàng)研究也發(fā)現(xiàn),補(bǔ)充維生素D可以降低肥胖實(shí)驗(yàn)鼠患子宮內(nèi)膜癌的風(fēng)險(xiǎn)。研究人員通過對(duì)實(shí)驗(yàn)鼠進(jìn)行基因處理, 使實(shí)驗(yàn)鼠容易發(fā)生子宮內(nèi)膜癌。在隨后的實(shí)驗(yàn)中對(duì)實(shí)驗(yàn)鼠添加維生素D在食物中。研究發(fā)現(xiàn), 經(jīng)過補(bǔ)充維生素D的肥胖實(shí)驗(yàn)鼠患子宮內(nèi)膜癌明顯降低(25%), 而未添加維生素D肥胖實(shí)驗(yàn)鼠子宮內(nèi)膜癌發(fā)生率顯著增高(67%)。不過,補(bǔ)充維生素D對(duì)體重正常的實(shí)驗(yàn)鼠卻未顯現(xiàn)保護(hù)作用。

本研究發(fā)現(xiàn)與健康婦女相比，子宮內(nèi)膜癌患者的血清25(OH)D3水平明顯降低，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；值得注意的是子宮內(nèi)膜癌患者的25(OH)D3水平與FIGO分期、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，提示25(OH)D3水平與與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展存在一定的關(guān)系。本研究的發(fā)現(xiàn)證實(shí)維生素D水平降低可能與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，維生素D補(bǔ)充可能有益于子宮內(nèi)膜癌患者。因而，維生素D在治療子宮內(nèi)膜癌時(shí)有一定的臨床指導(dǎo)意義。

參考文獻(xiàn)

[1]Peerelli S.Revised FIGO staging for carcinoma of the vulva,cervix ,and endometrium[J].Int J Gynaecol Obstet,2009,105(2):103-104.

[2]Yabushita H, Hirata M, Noguchi M, Nakanishi M. Vitamin D receptor in endometrial carcinoma and the differentiation-inducing effect of 1,25-dihydroxyvitamin D3 on endometrial carcinoma cell lines[J]. J Obstet Gynaecol Res. 1996;22:529-39.

[3]Saunders DE, Christensen C, Wappler NL,etal. Additive inhibition of RL95-2 endometrial carcinoma cell growth by carboplatin and 1,25 dihydroxyvitamin D3[J]. GYNECOL ONCOL. 1993;51:155-9.

[4]Lee LR, Teng PN, Nguyen H,etal. Progesterone enhances calcitriol antitumor activity by upregulating vitamin D receptor expression and promoting apoptosis in endometrial cancer cells[J]. Cancer Prev Res (Phila). 2013;6:731-43.

(收稿：2016-02-02)

【中圖分類號(hào)】R737.33

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.08.011

Biological effects of siRNA interference targeting MeCP2 gene on cervical cancer Hela cells

Department of Obstetrics and Gynecology, The Second Affiliated Hospital

of Xi'an Jiaotong University(Xi'an 710004)Duan ZhaoHan HongfangWang Ying

ABSTRACTObjective To investigate the biological effects of MeCP2 on cervical cancer Hela cells and molecular mechanism. Methods siRNA interference were used to knockdown MeCP2. MTT assay were used to analyze the effects of MeCP2 on proliferation of cervical cancer Hela cells. To analyze the effects of MeCP2 on the cell cycle and apoptosis of cervical cancer Hela cells with flow cytometer. To examine the effects of MeCP2 siRNA on the expression of Cyclin D1, P-ERK1/2 and P-p38 with Western Blot. Results MeCP2 mRNA and protein significantly decreased in MeCP2 siRNA group compared to negative control group (P<0.01). MeCP2 siRNA inhibits proliferation of cervical cancer Hela cells. The number of S and G2/M phase cells significantly decreased in MeCP2 siRNA group compared to negative control group (P<0.01), meanwhile the number of G1/G0 phase cells remarkably increased (P<0.01). The number of early apoptotic cells and late apoptotic cells remarkably increased in MeCP2 siRNA group compared to negative control group (P<0.01). It was found that Cyclin D1 and P-ERK1/2 proteins significantly decreased in MeCP2 siRNA group compared to negative control group (P<0.01), P-p38 proteins remarkably increased (P<0.01). Conclusion MeCP2 promotes proliferation of cervical cancer Hela cells through regulating P-ERK1/2 and Cyclin D1 expression, and inhibits apoptosis by suppressing P-p38 MAPK signal pathway.

KEY WORDSEndometrial NeoplasmsVitamin D@Antitumor activity

*陜西省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2013JM4012)