曹思婷，郭亞男，雷元元，白曉南，馬　燁，余永濤，何生虎

(寧夏大學農學院,寧夏銀川 750021)

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獸醫(yī)臨床

寧夏吳忠地區(qū)規(guī)模化奶牛場流產牛病原血清學調查

曹思婷，郭亞男，雷元元，白曉南，馬燁，余永濤，何生虎*

(寧夏大學農學院,寧夏銀川 750021)

摘要：為了調查寧夏吳忠地區(qū)奶牛場因傳染性因素造成流產的基本情況，應用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)對可能造成感染流產的牛傳染性鼻氣管炎病毒、新孢子蟲、牛病毒性腹瀉病毒的抗體及布魯菌的抗原進行了血清學檢測。結果顯示，牛傳染性鼻氣管炎病毒抗體陽性率為48.84%,新孢子蟲抗體陽性率為30.23%,牛病毒性腹瀉病毒抗體陽性率為19.77%，布魯菌抗原陽性率為24.42%。牛場陽性率高達100%。根據統計顯示，不同妊娠胎次的奶牛流產率差異顯著(P<0.05)，其中第1胎流產率與其他胎次間差異極顯著(P<0.01)。不同妊娠時間的奶牛流產率差異不顯著(P>0.05)。調查表明，寧夏部分奶牛場存在不同程度的牛傳染性鼻氣管炎病毒、新孢子蟲、牛病毒性腹瀉病毒和布魯菌感染。

關鍵詞：流產奶牛；血清學檢測；牛傳染性鼻氣管炎；新孢子蟲??；牛病毒性腹瀉；布魯菌病

奶牛流產是影響奶牛養(yǎng)殖業(yè)經濟效益的重要因素之一，流產不但造成胎兒夭折或發(fā)育受阻，使產犢間隔擴大，增加養(yǎng)牛的飼料成本，而且會造成產奶量下降，嚴重者還可引起母牛繁殖障礙，影響后備牛的擴充。一般情況下，3%～8%的奶牛流產率屬于正常現象[1]。在管理良好、無疫病流行的地區(qū)，奶牛流產率通常在2%～5%[2]。近年來隨著我國規(guī)模化奶牛場數量的增多，奶牛流產率也呈逐年上升趨勢。據調查，我國奶牛流產率在10%～20%左右。據國外統計，每個流產病例的平均經濟損失為640美元左右[2-3]，給奶牛場帶來了重大的經濟損失。引起奶牛流產的原因有很多，主要分為傳染性因素和非傳染性因素，傳染性因素占主導地位，國外研究發(fā)現達90%左右[3]，且這類流產病因繁多，癥狀復雜，不易確診。因此,臨床上對傳染性因素造成奶牛流產的病因調查及診斷分析非常必要，且對該類流產疾病的預防和控制具有十分重要的指導意義。

為了解寧夏吳忠地區(qū)奶牛場造成流產的傳染因素，對吳忠地區(qū)3個規(guī)?；膛?014年4月—2015年7月期間流產的86頭奶牛采集的血液樣品進行傳染性鼻氣管炎病毒、新孢子蟲、牛病毒性腹瀉病毒抗體和布魯菌抗原的血清學檢測，探究造成奶牛流產的主要傳染性因素，為奶牛場的疫病防控提供科學依據。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1檢測試劑盒 牛傳染性鼻氣管炎病毒抗體(IBR-Ab)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒(批號：DRE98252)、牛新孢子蟲抗體(N.caninum-Ab)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒(批號：DRE98175)、牛病毒性腹瀉病毒抗體(BVD-Ab)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒(批號：DRE98014)、牛布魯菌病(Brucellosis)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒(批號：DRE98408)，武漢華美生物工程有限公司CUSABIO○R產品。

1.1.2主要儀器 移液器，德國Eppendorf公司產品；ST70-2微孔板恒溫振蕩器、TGL-18C高速臺式離心機，上海安亭科學儀器公司產品；WELL WASH 4MK2洗板機，杭州米歐儀器有限公司產品；MULTISKAN MK3酶標儀，上海賽默飛世爾儀器有限公司產品。

1.2方法

1.2.1血清的收集和保存血液樣品由場內獸醫(yī)人員和寧夏大學農學院臨床獸醫(yī)學實驗室工作人員采集，從流產奶牛尾靜脈或頸靜脈采集2 mL～4 mL血液，在室溫下自然凝固 10 min～20 min，然后離心20 min(2 000 r/min～3 000 r/min)，最后吸出血清置于滅菌的小試管內，于-20 ℃保存待檢。

1.2.2檢測方法及結果判定 嚴格按照ELISA試劑盒說明書進行操作和結果判定。

1.2.3數據統計 應用Excel和SAS 8.2統計分析軟件對數據進行統計分析。

2結果

2.1血清陽性率的檢測

被檢測的86份流產奶牛血清中，檢出牛傳染性鼻氣管炎病毒抗體陽性血清42頭份，陽性率為48.84%(42/86)；檢出新孢子蟲抗體陽性血清26頭份，陽性率為30.23%(26/86)；檢出牛病毒性腹瀉病毒抗體陽性血清17頭份，陽性率為19.77%(17/86)；檢出布魯菌抗原陽性血清21頭份，陽性率為24.42%(21/86)；另外28頭流產牛4種病原血清學檢測結果均呈現陰性(表1)。

根據統計，被檢測的86份血清，9頭份IBRV和N.caninum抗體均為陽性，占檢測總數10.47%；1頭份IBRV和BVDV抗體均為陽性，占檢測總數1.16%；5頭份IBRV抗體和Brucella抗原均為陽性，占檢測總數5.81%；1頭份N.caninum抗體和Brucella抗原均為陽性，占檢測總數1.16%；1頭份IBRV、N.caninum和BVDV抗體均為陽性，占檢測總數11.63%；3頭份IBRV、N.caninum抗體和Brucella抗原均為陽性，占檢測總數3.49%；2頭份IBRV、BVDV抗體和Brucella抗原均為陽性，占檢測總數2.33%；7頭份IBRV、N.caninum、BVDV抗體和Brucella抗原均為陽性，占檢測總數8.14%(表2)。

表1　牛傳染性鼻氣管炎病毒、新孢子蟲、牛病毒性腹瀉病毒和布魯菌血清學檢測結果

表2　多種病原合并血清陽性檢測結果

注：I．IBRV抗體；N．N．caninum抗體；V．BVDV抗體；B．Brucella抗原；IN．IBRV和N．caninum血清陽性；IV．IBRV和BVDV血清陽性；IB．IBRV和Brucella血清陽性；NV．N．caninum和BVDV血清陽性；NB．N．caninum和Brucella血清陽性；VB．BVDV和Brucella血清陽性；INV．IBRV，N．caninum和BVDV血清陽性；INB．IBRV，N．caninum和Brucella血清陽性；IVB．IBRV，BVDV和Brucella血清陽性；NVB．N．caninum，BVDV和Brucella血清陽性；INVB．IBRV，N．caninum，BVDV和Brucella血清陽性。

Note：I．IBRV antibody；N．N．caninumantibody；V．BVDV antibody；B．Brucellaantigen；IN．IBRV andN．caninumpositive sera；IV．IBRV and BVDV positive sera；IB．IBRV andBrucellapositive sera；NV．N．caninumand BVDV positive sera；NB．N．caninumandBrucellapositive sera；VB．BVDV andBrucellapositive sera；INV．IBRV，N．caninumand BVDV positive sera；INB．IBRV，N．caninumandBrucellapositive sera；IVB．IBRV，BVDV andBrucellapositive sera；NVB．N．caninum，BVDV andBrucellapositive sera；INVB．IBRV，N．caninum，BVDV andBrucellapositive sera.

2.2流產情況

統計結果顯示，2014年4月至2015年7月的86個流產病例中，隨著胎次的增加，流產率逐漸降低，其中第1胎牛流產所占比例最多，為36.05%(31/86)。流產時妊娠時間以5個月～6個月為主，占32.56%(28/86)(圖1和表3)。

圖1　流產與母牛胎次的關系

項目Item妊娠天數/dDaysofpregnancy≤9091～120121～150151～180181～210≥211病例數Cases7810281914比例/%Proportion8.149.3011.6332.5622.0916.28

3討論

3.1關于流產的原因

引起懷孕母牛流產的病因很多，但以傳染性因素為主導，如布魯菌病、牛傳染性鼻氣管炎、犬新孢子蟲病、牛病毒性腹瀉、弓形蟲病、衣原體病、牛沙門菌病、李斯特菌病、牛彎曲菌病、中山病、赤羽病等均可導致流產。86頭流產牛血清檢測結果顯示，傳染性鼻氣管炎病毒、新孢子蟲、病毒性腹瀉病毒抗體陽性率依次為48.84%、30.23%和19.77%，布魯菌抗原陽性率為24.42%；另外28頭牛血清學檢測結果均呈現陰性，流產原因未知。結果表明，寧夏吳忠地區(qū)3個奶牛場傳染性鼻氣管炎病毒、新孢子蟲、病毒性腹瀉病毒和布魯菌這4種病原均有感染，牛場陽性率100%，是造成流產的主要原因。由于條件限制，本次僅對引起奶牛流產的4種病原進行檢測，造成牛流產其他病原還有待于進一步查明。

3.1.1關于傳染性鼻氣管炎 牛傳染性鼻氣管炎是由牛皰疹病毒1型(BHV-1)引起的以牛呼吸道為主要癥狀的一種接觸性傳染病。該病呈世界分布，我國及周邊國家均有報道，不僅影響奶牛產奶量，還可導致公牛繁殖障礙、孕牛流產、犢牛死亡，嚴重影響了養(yǎng)牛業(yè)的健康發(fā)展，在我國被定為二類動物疫病。該病在我國感染較為嚴重，部分省(區(qū))普遍存在，朱海明等[4]對我國北京、天津、山東、河北、河南、四川、云南等7個省市的牛群IBRV的感染狀況進行了調查，結果顯示IBRV平均陽性率為29.45%，其中天津、山東、河南、云南4個地方的IBRV感染率達到30%以上；石冬梅等[5]報道，河南省奶牛IBRV抗體陽性率為59.29%，希尼尼根等[6]報道內蒙古地區(qū)IBRV的平均感染率率為47.62%；皮全等[7]報道，貴州省奶牛IBRV抗體總體陽性率為82.50%。此次調查顯示，寧夏吳忠3個奶牛場流產牛IBRV抗體總體陽性率為48.84%，相對比朱海明等調查的我國北京、天津、山東、河北、河南、四川、云南7個省(市)的IBRV平均陽性率29.45%高，同時也是此次調查的4種傳染性疫病中陽性率最高的，由此可判定IBRV是導致該3個奶牛場奶牛流產的主要的原因之一。

3.1.2關于新孢子蟲病牛新孢子蟲病是由犬新孢子蟲引起的多種動物共患的一種原蟲病，對牛危害十分嚴重，主要是引起孕畜流產或產死胎、弱胎，新生犢牛運動障礙、腦炎等，進而給養(yǎng)牛業(yè)帶來巨大的經濟損失。該病分布廣泛，迄今為止已經有70多個國家和地區(qū)報道奶牛存在新孢子蟲感染[8]，感染率在10%～ 40%之間，最高可達82%。2002年，我國學者徐雪平等[9]于2002年在新疆部分地區(qū)牛群首次檢出了新孢子蟲抗體陽性牛的存在，證明了我國牛群存在新孢子蟲病，此后該病相繼被報道，石冬梅等[10]報道了河南省奶牛犬新孢子蟲的血清抗體陽性率為16.88%，閆雙等[11]調查發(fā)現，新疆地區(qū)具有流產病史的奶牛的新孢子蟲感染率為20.4%，鄒世穎等[12]報道了我國北方六省市(山東、河北、內蒙、北京、河南、新疆)牛新孢子蟲血清陽性率為8.6%，皮全等[7]報道貴州省奶牛新孢子蟲抗體總體陽性率為36.67%。相比之下可看出，具有流產史的奶牛場新孢子蟲抗體陽性率較高，本次新孢子蟲抗體陽性檢測結果(30.23%)除了比皮全等報道的貴州省新孢子蟲抗體陽性檢測結果(36.67%)略低外，比以上國內其他各省(市、自治區(qū))均高，表明新孢子蟲在我國各地區(qū)感染較為普遍，是導致牛流產的原因之一，應當引起奶牛場的高度重視。

3.1.3關于牛病毒性腹瀉牛病毒性腹瀉是由牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)引起的一種急性、熱性的牛傳染性疾病。該病的的危害主要包括犢牛腹瀉、腸炎、呼吸綜合征、母牛繁殖障礙及流產或產死胎、弱胎等。另外，持續(xù)感染BVDV的?？山K身排毒，感染同群其他牛。目前該病給世界養(yǎng)牛業(yè)造成嚴重經濟損失。BVDV最早于1953年報道于美國[13]，現在已經遍布于世界各地。本病在我國主要是20世紀80年代以后從德國、丹麥、美國、新西蘭等國家引入種源時帶入的，被我國列為三類動物疫病，多年來因人們對該病的重視程度不夠而導致目前呈現廣泛性流行趨勢。張俊杰等[14]報道北京地區(qū)規(guī)?；膛雠Ｈ築VDV抗體陽性率達到94.1%；范仲鑫等[15]報道湖南省規(guī)?；膛瞿膛VDV抗體陽性率為92.17%；石冬梅等[16]報道河南省奶牛BVDV感染率為53.8%；鄧波等[17]報道上海地區(qū)奶牛場育成牛的BVD抗體陽率為43.3%、成年乳牛為37.8%。Zhong F等[18]對西部牛場牛群感染BVDV的情況進行了調查，平均感染率達到43.39%；張改文等[19]對山西省太原4個縣區(qū)牛群進行BVDV血清學調查，檢出平均陽性率為63.5%。郭芙莉[20]采用雙抗原夾心酶聯免疫法(ELISA)對新疆不同地區(qū)的450份牛血清進行了BVDV抗體檢測，BVDV 抗體陽性率為 36.2%。這些結果均比本次BVDV抗體陽性率(19.77%)檢測結果高。

3.1.4關于布魯菌病布魯菌病是一種由布魯菌引起的流行廣泛、危害很大的人獸共患細菌性傳染病。家畜中牛、羊、豬最常發(fā)生，感染布病的動物最常出現的臨床癥狀是流產，產奶量下降。奶牛布魯菌病的病原主要是牛布魯菌，其中1型、2型或3型布魯菌是引起奶牛流產的主要致病菌類型。布魯菌病最早于1860年發(fā)現于地中海的馬耳他島，迄今世界上僅有四分之一的國家和地區(qū)沒有報道過該病的發(fā)生和流行。人畜間發(fā)病率較高的國家和地區(qū)有土耳其、馬耳他、希臘、西班牙、意大利、蘇格蘭等[21]。在我國，關于布魯菌病的確切記載是從20世紀初開始的，現已在25個省(市、直轄市)流行。我國將該病列為二類動物疫病，對該病的控制標準設定為血清陽性率低于0.5%。20世紀60年代到90年代初，我國多個省市已達到人畜布魯菌病控制標準，然而隨著人們生活水平的提高，對肉類、乳制品及其他動物產品的需求量增加，使得奶業(yè)生產快速發(fā)展，奶牛養(yǎng)殖領域不斷擴大，加之頻繁引種等因素，導致該病的發(fā)病率超過控制標準的2倍以上。自2000年以來，全國獸醫(yī)部門檢出的布魯菌病陽性牲畜數量逐年增加，出現流產、胎盤滯留等的患病奶牛在我國各個地區(qū)的奶牛群中也不斷增多，并呈上升趨勢[22]，這不僅阻礙畜牧業(yè)發(fā)展，造成嚴重的經濟損失，而且對人類的身體健康也構成了極大的威脅。徐明舉等[23]在河北張家口地區(qū)布魯菌的血清學調查結果顯示，流產奶牛的陽性率為26.24 %，王基隆等[24]于2011年—2013年采用虎紅平板凝集試驗對國內(黑龍江、遼寧、天津、河北、內蒙古等15個省市)的規(guī)?；膛ｐB(yǎng)殖場進行布魯菌的血清學調查，結果顯示，虎紅法檢測奶牛血清布魯菌總體陽性率為18.58%，其中具有流產史的奶牛陽性率為41.04%。本次檢測的86頭流產奶牛血清中布魯菌陽性率為24.42%，比流產牛的布魯菌血清陽性率相對較高，表明布魯菌是導致奶牛流產的一個非常重要的因素。

3.2關于流產

生產中調查發(fā)現，IBRV感染懷孕奶牛后多數在妊娠4個月～6個月出現流產，產第1、2胎次的母牛發(fā)病較多見[4]。奶牛新孢子蟲引起的流產可發(fā)生在妊娠各個階段，但是絕大多數見于5個月～6個月[25]。BVDV感染懷孕母牛后大多在150 d發(fā)生流產、死產，也有文獻報道妊娠120 d內感染流產。布魯菌感染懷孕母牛后，多因引發(fā)胎盤炎而導致妊娠后5個月～6個月內流產，不少還會引起奶牛多次流產。本次調查的86個病例中，流產奶牛傳染性鼻氣管炎病毒與新孢子蟲復合感染所占比例最高，占11.63%(10/86)，由此判斷傳染性鼻氣管炎合并新孢子蟲復合感染是此次調查的奶牛場流產的主要原因。另外，流產主要集中在1胎～3胎，第1胎牛流產所占比例最多，占36.05%(31/86)，其中第1胎流產率與其他胎次間差異極顯著(P<0.01)，這說明初產牛流產率明顯高于經產牛，這與羅玉江等[26]的調查結果奶牛在頭胎最易發(fā)生流產基本一致，分析其原因可能與青年牛生殖系統發(fā)育及內分泌機能尚不健全有關。據統計顯示，發(fā)生于150 d～180 d期間流產病例最多，占32.56%(28/86)，這與牛傳染性鼻氣管炎、新孢子蟲引起奶牛流產的特點相吻合。

3.3防控措施

牛傳染性鼻氣管炎為接觸性傳染的病毒病，目前尚無特效治療藥物，可以使用疫苗預防，凡陰性?？刹扇∫呙缱⑸?，陽性牛如果數量較少，可予以淘汰，如果數量多，應立即隔離，集中飼養(yǎng)，但疫苗不能阻止野毒感染，也不能阻止?jié)摲《镜某掷m(xù)性感染，因此，最重要的防控措施是嚴格檢疫，防止引入傳染源和帶入病毒。新孢子蟲病是目前尚無治療藥物的一種寄生蟲病，目前認為對養(yǎng)殖場內犬只的控制是控制該病的一個重要環(huán)節(jié)，而且垂直傳播是本病的重要傳播途徑，因此，有專家建議，淘汰血清抗體陽性母?？赡苁强刂票静〉囊环N重要措施。牛病毒性腹瀉為病毒病，尚無有效治療藥物，考慮到國內尚無疫苗可以使用，檢測并淘汰持續(xù)感染牛是控制牛病毒性腹瀉的有效手段，平時預防要加強檢疫，防止引入帶毒牛。 布魯菌病屬于人獸共患傳染病，對公眾健康構成潛在的威脅，世界上有多種布魯菌疫苗，但疫苗接種預防還存在一些問題，如傳統牛布魯菌弱毒苗均不能用于懷孕母牛、免疫接種后產生的血清反應與野毒感染相似，臨床難于區(qū)分等，因此，布魯菌病應引起人們的高度重視，嚴格執(zhí)行獸醫(yī)衛(wèi)生制度，認真做好動物衛(wèi)生檢疫工作，加強對布魯菌病的檢疫，檢出陽性患病動物及時淘汰，死于傳染病或疑似傳染病的動物尸體應焚燒或深埋。

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Serological Investigation on Infectious Pathogens in Abortion Cows of Large-scale Dairy Farms in Wuzhong of Ningxia

CAO Si-ting,GUO Ya-nan,LEI Yuan-yuan,BAI Xiao-nan,MA Ye,YU Yong-tao,HE Sheng-hu

(SchoolofAgriculture，NingxiaUniversity,Yinchuan,Ningxia,750021,China)

Abstract:An epidemiological survey on infectious factors causing abortion in dariy cows was carried out in the Wuzhong of Ningxia．All sera were tested for seroprevalences of infectious bovine rhinotracheitis(IBR)，neosporiasis，bovine viral diarrhea(BVD) and brucellosis that may cause abortion by the ELISA．The overall seroprevalence of IBR was 48.84%，the overall seroprevalence of neosporiasis was 30.23%，the overall seroprevalence of BVD was 19.77%，the overall seroprevalence of brucellosis was 24.42%．The seroprevalence rate of dairy cow farms was 100%．The statistic analysis showed that there was a significant difference (P<0.05) in abortion rates of different parities among that there was a extremly significant difference(P<0.01) in first parity compared with other parities,but the abortion rates had no significant difference (P>0.05)between different pregnancy time．The results showed that different degrees of infections of IBRV，Neospora caninum，BVDV and Brucella exist in part of the dairy cow farms in Ningxia．

Key words:abortion cow；serological detection；infectious bovine rhinotracheitis；neosporiasis；bovine viral diarrhea；brucellosis

文章編號:1007-5038(2016)04-0115-05

中圖分類號:S857.21;S858.21

文獻標識碼:B

作者簡介：曹思婷(1990-)，女，寧夏靈武人，碩士研究生，主要從事臨床獸醫(yī)診斷技術研究。*通訊作者

基金項目：寧夏科技廳重大農業(yè)技術推廣項目(0315-0103)

收稿日期：2015-10-12