馮鎖民，任淑娟，李惠民，黎運(yùn)芳，王　帥

1.西安醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院(西安　710021)；2.陜西省人民醫(yī)院 藥劑科(西安　710068)；3.商洛職業(yè)技術(shù)學(xué)院(商州　726000)

HPLC法測定丁微硅油合劑中鹽酸丁卡因的含量*

馮鎖民1，任淑娟2，李惠民3，黎運(yùn)芳1，王帥1

1.西安醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院(西安710021)；2.陜西省人民醫(yī)院 藥劑科(西安710068)；3.商洛職業(yè)技術(shù)學(xué)院(商州726000)

【摘要】目的探討HPLC法測定丁微硅油合劑中鹽酸丁卡因含量的可行性。方法采用C18色譜柱，流動相為：甲醇-0.75%三乙醇胺溶液(60∶40)，流速：1.0 mL·min-1；檢測波長310 nm。結(jié)果鹽酸丁卡因檢測質(zhì)量濃度的線性范圍為10.21～20.42 μg·mL-1，平均回收率為99.82%，RSD為1.76%。結(jié)論HPLC法快速、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于丁微硅油合劑中鹽酸丁卡因的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】丁微硅油合劑；鹽酸丁卡因；高效液相色譜法(HPLC)；含量測定

丁微硅油合劑是由丁卡因、微粉硅膠和二甲基硅油組成的醫(yī)院制劑。主要在電子胃鏡檢查中發(fā)揮潤滑、止痛和消泡的作用，使操作、檢查易于進(jìn)行，采集的圖像更加清晰，防止誤診、漏診的發(fā)生。據(jù)報道鹽酸丁卡因原料和注射劑的含量測定方法主要有永停滴定法[1-2]和UV分光光度法[3]，由于丁微硅油合劑中所用輔料較多，干擾較大，前期通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)這兩種方法均不適合于該制劑中鹽酸丁卡因的含量控制，為此本研究對HPLC法測定合劑中鹽酸丁卡因含量的可行性進(jìn)行了探索，現(xiàn)報道如下。

1材料與方法

1.1儀器與試劑

1.1.1儀器Agilent Technologies HPLC 1260 Infinity(G1312C 1260 Bin Pump VL，G1329B 1260 ALSG1314F 1260 VWD)；C18柱(100 mm×4.6 mm，3.5 μm；北京金歐亞科技發(fā)展有限公司)；FA1004B型電子天平(上海越平科學(xué)儀器有限公司)；微量天平(青島東方嘉怡電子科技有限公司)。

1.1.2試劑鹽酸丁卡因?qū)φ掌?中國藥品生物制品檢定所，批號：100456-200301)；丁微硅油合劑(自制，批號：20140923、20140925和20140926)；甲醇(色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)；水(娃哈哈純凈水)；鹽酸丁卡因原料藥(北京市燕京藥業(yè)有限公司，20110301)；磷酸(色譜純，天津市紅巖化學(xué)試劑廠，純度：99.0%)；三乙醇胺(色譜純，天津市紅巖化學(xué)試劑廠，純度：99.0%)。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1溶液的配制1)對照品儲備液的配制：精密稱取10.21 mg鹽酸丁卡因?qū)φ掌?，置?0 mL容量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，即得204.20 μg·mL-1對照品儲備液。2)樣品溶液的配制：用1 mL容量瓶精密量取丁微硅油合劑1 mL，用水沖洗數(shù)次直至干凈，沖洗液轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，并加水稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液3 mL，置于10 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻即得。3)合劑缺丁卡因陰性樣品溶液的配制：取不含鹽酸丁卡因的丁微硅油合劑1 mL，按樣品溶液的配制方法配制。4)丁卡因原料藥溶液的配制：精密稱取0.200 g鹽酸丁卡因原料藥，置于100 mL容量瓶中，加水溶解至刻度，即得2 mg·mL-1原料藥儲備液，取5 mL該溶液，置于100 mL容量瓶中，加水定容，搖勻，再取1 mL置于10 mL容量瓶中，加水定容，即得10 μg·mL-1原料藥溶液。

1.2.2色譜條件C18色譜柱(100 mm×4.6 mm，3.5 μm)；流動相：甲醇-0.75%三乙醇胺溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0左右)體積比為60∶40；流速：1.0 mL·min-1； 檢測波長：λ=310 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。

2結(jié)果

2.1方法學(xué)考察

2.1.1線性關(guān)系精密量取0.5、0.6、0.7、0.8、0.9和1.0 mL鹽酸丁卡因?qū)φ掌穬湟?，分別置于10 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。按1.2.2色譜條件進(jìn)樣，進(jìn)樣量20 μL，測定鹽酸丁卡因的峰面積(A)。以峰面積為縱坐標(biāo)，鹽酸丁卡因的進(jìn)樣濃度(C)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程：A=81.889C-118.9，r2=0.993 9，即鹽酸丁卡因在10.21～20.42 μg·mL-1范圍內(nèi)線性良好。線性數(shù)據(jù)結(jié)果見表1，鹽酸丁卡因?qū)φ掌返腍PLC圖見圖1。

表1　鹽酸丁卡因線性數(shù)據(jù)

2.1.2精密度實(shí)驗(yàn)取濃度為14.294 μg·mL-1的鹽酸丁卡因?qū)φ掌啡芤骸０?.2.2色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，計算鹽酸丁卡因峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD(表2)，RSD為0.78%，表明精密度良好。

圖1鹽酸丁卡因?qū)φ掌稨PLC圖

注：1為丁卡因峰

2.1.3重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取批號為20140925的丁微硅油合劑，按樣品溶液的制備方法制備供試品溶液5份， 按1.2.2色譜條件進(jìn)樣，測得峰面積，計算RSD為0.60%，表明重復(fù)性良好(表2和圖2)。

表2　精密度與重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖2丁微硅油合劑HPLC圖

注：1為丁卡因峰

2.1.4穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取濃度為14.294 μg·mL-1的鹽酸丁卡因?qū)φ掌啡芤?，分別于0、2、4、6、8和10 h按1.2.2色譜條件進(jìn)樣，測得峰面積，其RSD為1.79%，表明鹽酸丁卡因溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好(表3)。

2.1.5加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密吸取已知鹽酸丁卡因含量的供試品溶液，分別加入占已知含量約80%、100%和120%的鹽酸丁卡因?qū)φ掌啡芤?，每個濃度2份，共6份，按照1.2.2色譜條件進(jìn)樣并計算回收率，平均回收率為99.82%，RSD為1.76%(表4)。

表3　穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2樣品含量測定

2.2.1鹽酸丁卡因原料藥含量測定結(jié)果取購買的丁卡因原料藥，按照原料藥溶液的配制方法進(jìn)樣，測得峰面積為705.42(mAU·s)，計算得原料藥中鹽酸丁卡因含量為100.66%，與藥廠藥檢報告結(jié)果(100.22%)基本一致(圖3)。

圖3鹽酸丁卡因原料藥HPLC圖

注：1為丁卡因峰

2.2.2丁微硅油合劑中鹽酸丁卡因含量測定結(jié)果取3批自制的丁微硅油合劑，按照樣品溶液的配制方法制備，進(jìn)樣20 μL，記錄鹽酸丁卡因的峰面積，帶入線性方程，計算3批丁微硅油合劑中鹽酸丁卡因含量(表5)，樣品溶液的色譜圖見圖2，含量測定結(jié)果與理論值接近。同法進(jìn)樣制備缺丁卡因的陰性樣品溶液(圖4)。在鹽酸丁卡因出峰處，陰性樣品沒有峰出現(xiàn)，表明合劑中的其他輔料對鹽酸丁卡因的含量測定沒有干擾。

表5　丁微硅油合劑中鹽酸丁卡因的含量測定

圖4合劑缺丁卡因陰性對照HPLC圖

3討論

3.1合劑稀釋溶劑的選擇

實(shí)驗(yàn)在樣品處理過程中，參考文獻(xiàn)分別用磷酸鹽緩沖液[4-5]、水[6]和稀鹽酸[7]進(jìn)行稀釋。緩沖液由于樣品溶解度小，不易沖洗，主藥含量偏低，稀鹽酸溶解性也低，且丁卡因的最大吸收波長變?yōu)?29 nm，其他成分干擾增加。因此選用水稀釋樣品。

3.2HPLC法流動相的選擇

本實(shí)驗(yàn)參考文獻(xiàn)[8]流動相甲醇-水(75∶25)，發(fā)現(xiàn)主峰與雜質(zhì)峰的分離度較好，但峰形不好，拖尾嚴(yán)重，且出峰時間長約2 min。向流動相水中加入0.75%三乙醇胺后，用磷酸調(diào)pH至3.0發(fā)現(xiàn)分離度、峰形均好，HPLC見圖5，通過調(diào)整流動相比例，將保留時間控制在8 min左右，HPLC見圖6。本實(shí)驗(yàn)最后選擇甲醇-0.75%三乙醇胺溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)(60∶40)為流動相。

圖5甲醇-0.75%三乙醇胺(65∶35)HPLC圖

注：1為丁卡因峰

圖6甲醇-0.75%三乙醇胺溶液(60∶40)HPLC圖

注：用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0

參考文獻(xiàn)

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[8] 朱晶, 劉鵬飛, 陳慶先.HPLC法測定鹽酸丁卡因膠漿中鹽酸丁卡因的含量[J]. 中國醫(yī)藥指南, 2011, 9(29): 235-236.

Determination of Hydrochloride Tetracaine in butyl osmund silica oil mixture by HPLC

FengSuomin1,RenShujuan2,LiHuimin3,LiYunfang1,WangShuai1.

1.Xi′anMedicalUniversity,Xi′an710021;2.People′sHospitalofShaanxiProvince,Xi′an710068;3.ShangluoVocationalandTechnicalCollege,Shangzhou726000.

【Abstract】ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of hydrochloride tetracaine in butyl osmund silica oil mixture. MethodsThe determination was performed on a C18column, with a mobile phase consisted of methanol-0.75% triethanolamine(60∶40) and detection wavelength set at 310nm. ResultsThe linear range of hydrochloride tetracaine was 10.21-20.42μg·mL-1，and the average recovery rate was 99.82%, with a RSD of 1.76%. ConclusionThe established method is easy to operate and shows good precision and repeatability, and can be used for the determination of hydrochloride tetracaine in butyl osmund silica oil mixture.

【Key words】Butyl osmund silica oil mixture; Hydrochloride tetracaine; HPLC; Assay

doi:10.3969/j.issn.1674-2257.2016.01.031

*基金項(xiàng)目：2013年陜西省教育廳產(chǎn)業(yè)化項(xiàng)目(No:2013JC05)；陜西省自然科學(xué)基礎(chǔ)研究計劃項(xiàng)目(No:2014JM4132)；商洛市2013科學(xué)技術(shù)研究發(fā)展計劃項(xiàng)目(No:SK-2013-15)；2014年陜西省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項(xiàng)目(No:20140830056)；西安醫(yī)學(xué)院學(xué)科建設(shè)經(jīng)費(fèi)資助

【中圖分類號】R927.2

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

網(wǎng)絡(luò)出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1705.R.20151222.0907.036.html

·論著·