文/貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 劉金平

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應(yīng)用高效液相色譜技術(shù)檢測(cè)獸藥殘留的研究進(jìn)展

文/貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 劉金平

摘 要高效液相色譜是一種高效而快速的分離與分析技術(shù)，是目前分離檢測(cè)經(jīng)常用到的重要方法。因其具有選擇性好、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、工作時(shí)間短、可準(zhǔn)確分析測(cè)定樣品等特點(diǎn)而發(fā)展迅速，備受人們青睞。文章通過(guò)對(duì)近幾年來(lái)國(guó)內(nèi)外發(fā)表的具有代表性的相關(guān)文章進(jìn)行分析整理和歸納，綜述了高效液相色譜技術(shù)的發(fā)展和在獸醫(yī)藥理學(xué)中應(yīng)用的研究進(jìn)展。

關(guān)鍵詞高效液相色譜；質(zhì)譜；獸醫(yī)藥理學(xué)；獸藥殘留

色譜法是指利用待測(cè)樣品中各組分在兩相中分配系數(shù)不同，當(dāng)流動(dòng)相推動(dòng)樣品中的組分運(yùn)動(dòng)并通過(guò)固定相時(shí)，固定相根據(jù)不同物質(zhì)在不同相態(tài)下進(jìn)行選擇性分配，在兩相中進(jìn)行連續(xù)反復(fù)多次分配，從而形成差速移動(dòng)，不同的物質(zhì)會(huì)以不同的速度以固定相移動(dòng)最終實(shí)現(xiàn)分離［1，2］。根據(jù)流動(dòng)相的狀態(tài)可將色譜法分為氣相色譜法和液相色譜法。液相色譜技術(shù)經(jīng)過(guò)40多年的發(fā)展已在諸多領(lǐng)域得到了越來(lái)越廣泛的應(yīng)用［3～5］。高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）是在經(jīng)典的液體柱色譜基礎(chǔ)上，引入氣相色譜技術(shù)的理論，采用高壓泵、高效固定相和高靈敏度檢測(cè)器，達(dá)到了高速分離、高靈敏度和操作自動(dòng)化等目的，從而實(shí)現(xiàn)樣品的快速檢測(cè)和分析［6］。此法與氣相色譜的主要區(qū)別在于流動(dòng)相是液體而不是氣體，與氣相色譜法相比，由于不受樣品揮發(fā)度和熱穩(wěn)定性的限制，所以應(yīng)用范圍更廣泛，特別適合于高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性和熱穩(wěn)定性差的化合物的分析分離［7］。鑒于高效液相色譜所具有的優(yōu)點(diǎn)，使更多的人越來(lái)越重視對(duì)其的研究，高效液相色譜的應(yīng)用也越來(lái)越普遍，這不僅減少了工作的繁雜，也使所得的數(shù)據(jù)更加真實(shí)可靠。

隨著研究工作的不斷深入，高效液相色譜-質(zhì)譜連用技術(shù)也已經(jīng)出現(xiàn)，并投入到市場(chǎng)使用［8］。高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)是在高效液相色譜的高分離能力基礎(chǔ)上［9］，利用質(zhì)譜的高選擇性、高靈敏度以及能夠準(zhǔn)確提供化合物的相對(duì)分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)信息等特點(diǎn)設(shè)計(jì)，具有分析時(shí)間短，對(duì)高沸點(diǎn)、難揮發(fā)和熱不穩(wěn)定化合物的分析能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)［10］。

1 高效液相色譜

1.1 高效液相色譜的構(gòu)造

高效液相色譜主要由貯液罐、高壓輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀以及數(shù)據(jù)處理裝置8部分組成［11］。

1.2 高效液相色譜的工作原理

高效液相色譜是利用高壓泵將貯液罐中的流動(dòng)相送入色譜儀系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，隨流動(dòng)相流動(dòng)而被運(yùn)入色譜柱中，由于樣品溶液中的各個(gè)組分在流動(dòng)相和固定相中的分配系數(shù)不同，因此在兩相中會(huì)做相對(duì)運(yùn)動(dòng)，經(jīng)過(guò)不斷流動(dòng)分配，樣品中各混合組分之間漸漸拉開距離，最終以相互分離的單個(gè)組分存在，然后依次從柱內(nèi)流出，利用檢測(cè)器的傳感器將樣品濃度轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀，以圖譜形式將樣品數(shù)據(jù)打印出來(lái)［12］。

1.3 高效液相色譜法的特點(diǎn)

與傳統(tǒng)的色譜法相比，高效液相色譜法有很多優(yōu)點(diǎn)。①顆粒極細(xì)的固定相使流動(dòng)阻力降低，有效提高了固定相的效率，使分離更加精確。②采用高壓輸送系統(tǒng)提高流動(dòng)相的流動(dòng)速度，縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間，從而減少操作人員的工作量。③采用高靈敏度檢測(cè)器，檢測(cè)靈敏度高，紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01ng。④通過(guò)流動(dòng)相可以控制和改善分離過(guò)程，同時(shí)色譜柱具有高柱效，因此具有高選擇性，既可分析同分異構(gòu)體，又可分析旋光異構(gòu)體［13］。

2 高效液相色譜的現(xiàn)狀

2.1 高效液相色譜的發(fā)展

隨著科技的不斷發(fā)展，科研工作者對(duì)高效液相色譜技術(shù)的應(yīng)用越來(lái)越普遍。高效液相色譜的發(fā)展始于20世紀(jì)60年代中后期［14］。20世紀(jì)60年代末期，世界上第一臺(tái)高效液相色譜儀出現(xiàn)，從此開啟了高效液相色譜的時(shí)代，受到很多科研工作者的關(guān)注，并且迅速發(fā)展起來(lái)。后來(lái)逐漸出現(xiàn)分配色譜、吸附色譜、離子交換色譜、凝膠色譜［15］，目前高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)已投入使用，這使數(shù)據(jù)分析更加快捷方便。

2.2 高效液相色譜的應(yīng)用

通過(guò)查閱國(guó)內(nèi)外的參考文獻(xiàn)，高效液相色譜應(yīng)用非常廣泛。喬坤云等［16］通過(guò)高效液相色譜熒光法同時(shí)檢測(cè)了雞肉中環(huán)丙沙星、達(dá)氟沙星、恩諾沙星、沙拉沙星4種氟喹諾酮類藥物殘留的情況。楊遠(yuǎn)高等［17］研究表明，高效液相色譜用于分離測(cè)定虎杖中白藜蘆醇，高良姜中槲皮素、山奈酚、高良姜素，小兒瀉速停顆粒中沒(méi)食子酸、兒茶素、表兒茶素幾種中草藥效果都非常好，并且該方法簡(jiǎn)便快速、靈敏度高、成本低、綠色環(huán)保，可用于該制劑的質(zhì)量控制。蔡良英等［18］運(yùn)用高效液相色譜方法快速地測(cè)定雞蛋中三聚氰胺殘留含量，該方法操作相對(duì)簡(jiǎn)單，運(yùn)行成本低，是目前最為常用的檢測(cè)方法。張吟等［19］通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，高效液相色譜可以用于分析測(cè)定血漿中多種藥物。王媛等［20］用固相萃取-高效液相色譜法分析測(cè)定減肥食品中是否添加雙氫克尿噻、呋噻米、克羅帕米、布美他尼和鹽酸西布曲明等藥物，用于違禁藥物的檢測(cè)。

3 高效液相色譜在獸醫(yī)藥理學(xué)研究中的應(yīng)用

我國(guó)是農(nóng)業(yè)大國(guó)，畜牧業(yè)的發(fā)展受到國(guó)家的高度重視，各種保健類和治療類獸藥是經(jīng)常用到的，各類獸藥在使用時(shí)會(huì)出現(xiàn)一些不良癥狀，如應(yīng)激反應(yīng)，畜禽體內(nèi)發(fā)生耐藥性［21，22］，甚至在很多肉類食品中出現(xiàn)嚴(yán)重的獸藥殘留［23］，對(duì)人們生活造成嚴(yán)重影響。這引起科研工作者對(duì)獸醫(yī)藥理學(xué)的研究更加重視。在進(jìn)行獸藥殘留的檢測(cè)時(shí)，普遍使用的就是高效液相色譜技術(shù)，目前高效液相色譜-質(zhì)譜串聯(lián)技術(shù)更受歡迎。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀主要由高效液相色譜系統(tǒng)和質(zhì)譜系統(tǒng)兩部分組成，樣品由液相系統(tǒng)進(jìn)入，經(jīng)色譜柱分離，被分離的組分依次進(jìn)入質(zhì)譜系統(tǒng)，在離子源中離子化，離子聚焦于質(zhì)量分析器中，根據(jù)質(zhì)荷比而分離，分離后的離子信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)，傳遞至計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，根據(jù)質(zhì)譜峰的強(qiáng)度和位置對(duì)樣品的成分和結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析［24］。該方法可以快速準(zhǔn)確地測(cè)定、分析數(shù)據(jù)。

高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在獸藥殘留方面應(yīng)用的報(bào)道已經(jīng)非常多［25］。李小玲等［26］建立的測(cè)定諾氟沙星、環(huán)丙沙星與恩諾沙星藥物殘留的高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法，樣品經(jīng)乙腈提取，正己烷脫脂，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，即可進(jìn)行定性和定量分析。該測(cè)定方法成本低，而且時(shí)間短。周萍等［27］通過(guò)高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)同時(shí)測(cè)定蜂王漿中甲硝唑、洛峭噠哇、二甲峭咪哇3種硝基咪哇類藥物殘留的含量，有力地說(shuō)明了該方法可作為峭基咪哇類藥物在蜂王漿中殘留的含量快速檢測(cè)方法。李向軍等［28］建立的同時(shí)測(cè)定24種性激素的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，實(shí)現(xiàn)了3類性激素的同時(shí)定量及定性確證分析。潘曉東等［29］建立超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測(cè)定魚肉中氯霉素（CAP）、甲砜霉素（TAP）和氟甲砜霉素（FF）殘留含量，并用實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)充分地說(shuō)明該方法具有良好的選擇性、靈敏度和準(zhǔn)確度，滿足魚肉中痕量氯霉素類藥物殘留的高靈敏分析需要。熊春蘭等［30］建立了高效液相色譜-質(zhì)譜串聯(lián)法同時(shí)測(cè)定水產(chǎn)品中喹諾酮類、大環(huán)內(nèi)酯類、磺胺類、磺胺增效劑、林可胺類、硝基咪唑類、喹啉類和多肽類8類共38種限用獸藥殘留的含量，該法方便快捷，可同時(shí)對(duì)多種獸藥殘留進(jìn)行快速測(cè)定。

4 結(jié)語(yǔ)

高效液相色譜技術(shù)是目前公認(rèn)的操作簡(jiǎn)單、工作時(shí)間較短、能夠快速測(cè)定分析藥物的方法，但是隨著社會(huì)的進(jìn)步，科技的不斷發(fā)展，為了預(yù)防和治療一些新型疾病，各種結(jié)構(gòu)復(fù)雜的新型藥物不斷問(wèn)世，新藥的耐藥性、在體內(nèi)分布情況等都是人們需要進(jìn)一步解決的問(wèn)題。單純地應(yīng)用高效液相色譜技術(shù)已經(jīng)很難滿足實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)測(cè)定分析的要求，在短時(shí)間內(nèi)同時(shí)完成對(duì)一種或幾種藥物的測(cè)定分析、確定藥物在機(jī)體內(nèi)的分布情況、藥物在體內(nèi)的作用位點(diǎn)等都是有待解決的問(wèn)題。為了解決這些問(wèn)題，現(xiàn)已經(jīng)出現(xiàn)在高效液相色譜的基礎(chǔ)上，結(jié)合質(zhì)譜的特點(diǎn)發(fā)明了高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，解決了部分存在的問(wèn)題，但是仍存在很多不足，需要進(jìn)一步改進(jìn)，如何提高高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的靈敏度和精度是以后高效液相色譜技術(shù)發(fā)展的研究方向。色譜聯(lián)用技術(shù)還有著很大的發(fā)展空間，新的色譜聯(lián)用技術(shù)有待探索使用?？梢钥闯?，各種新型色譜聯(lián)用技術(shù)的廣泛應(yīng)用必將對(duì)現(xiàn)代研究起到重要的推動(dòng)作用。

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