譚 翔,曹利雅
(貴陽(yáng)市建材質(zhì)量檢驗(yàn)中心 ,貴州 貴陽(yáng) 550009;2.貴州醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院,貴州 貴陽(yáng) 550025)
UPLC-TUV測(cè)定啤酒中亮藍(lán)含量
譚 翔1,曹利雅2
(貴陽(yáng)市建材質(zhì)量檢驗(yàn)中心 ,貴州 貴陽(yáng) 550009;2.貴州醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院,貴州 貴陽(yáng) 550025)
摘 要:利用超高效液相色譜法測(cè)定啤酒中人工合成色素亮藍(lán)的含量。采用色譜柱ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm(2.1mm×50mm Column),流動(dòng)相為甲醇-0.02mol·L-1乙酸銨(39∶61),流速0.3mL·min-1,檢測(cè)波長(zhǎng)628nm,柱溫16.1℃,進(jìn)樣量5μL。檢測(cè)結(jié)果表明,亮藍(lán)在1.0~25mg·L-1(r=0.9994)間線性關(guān)系良好,平均回收率為98.7%,RSD=0.49%,在3種市場(chǎng)所售啤酒中均未檢測(cè)到亮藍(lán)。該方法可以用于檢測(cè)啤酒中是否添加人工合成色素亮藍(lán),為市場(chǎng)上銷售啤酒質(zhì)量檢測(cè)提供參考依據(jù)。
關(guān)鍵詞:超高液;啤酒;亮藍(lán);含量測(cè)定
啤酒是深受大眾喜愛(ài)的酒精飲料之一?,F(xiàn)代有些苦瓜啤酒制造商為了讓啤酒的色澤光鮮通常都會(huì)加入人工合成色素亮藍(lán)[1-3]。亮藍(lán)作為可食用色素適用于糕點(diǎn)、糖果和配制酒的著色[4-6]。但《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》(GB 2760-2014)中規(guī)定,亮藍(lán)在飲料、汽水、配制酒等的最大使用量為0.025g·kg-1[7],含量超標(biāo)會(huì)影響人體健康[8]。
由于常規(guī)性發(fā)酵啤酒中不允許加入合成色素,為了檢測(cè)市場(chǎng)上常規(guī)性發(fā)酵啤酒中是否添加色素亮藍(lán),本文基于超高效液相色譜的優(yōu)良性能,建立了一種更快、更簡(jiǎn)捷、靈敏度更高的啤酒中亮藍(lán)含量的測(cè)定方法[9-10]。
Waters ACQUITY超高效液相色譜儀,色譜柱: ACQUITY UPLC BEH C18 1.7 μ m(2.1mm×50mm Column)。
亮藍(lán)對(duì)照品(1mg·mL-1),甲醇(色譜純),乙酸銨(分析純),檸檬酸(分析純),氨水(分析純),無(wú)水乙醇(分析純),純凈水。
啤酒3種(市售)。
2.1 色譜條件
色譜柱:ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm(2.1mm×50mm Column);流 動(dòng) 相:甲醇-0.02mol·L-1乙酸銨(39∶61),流速0.3mL·min-1,檢測(cè)波長(zhǎng)628nm,柱溫16.1℃,進(jìn)樣量5μL。
通訊聯(lián)系人:曹利雅,貴州醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院。E-mail:591404002@qq.com
2.2 對(duì)照品溶液的制備
取1mg·mL-1的亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)溶液于容量瓶,加純凈水分別稀釋成濃度為1.0mg·L-1、5.0mg·L-1、10mg·L-1、15mg·L-1、20mg·L-1、25mg·L-1的亮藍(lán)溶液。
2.3 供試品溶液制備
移取50mL供試品,加熱驅(qū)除CO2和乙醇,用200g·L-1的檸檬酸溶液調(diào)節(jié)pH=6,加熱至60℃,將1g聚酰胺粉加水調(diào)成粥狀,倒入供試品溶液中,攪拌,抽濾,用60℃、pH=4的檸檬酸水溶液洗滌3~5次,然后用甲醇-甲酸(6+4)混合溶液洗滌3~5次,再用水洗至中性,用乙醇-氨水-水(7+2+1)混合溶液解吸3~5次,每次5mL,收集解吸液,加乙酸中和,水浴蒸發(fā)至干,加2.00mL水溶解,經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾。
2.4 線性關(guān)系
分 別 吸 取 濃 度 為1.0mg·L-1、5.0mg·L-1、10mg·L-1、15mg·L-1、20mg·L-1、25mg·L-1的亮藍(lán)溶液5μL注入超高效液相色譜儀,按2.1的色譜條件進(jìn)行測(cè)定,以峰面積 (Y)對(duì)濃度(X,mg·L-1)進(jìn)行線性回歸,亮藍(lán)在1.0~25mg·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,回歸方程Y=21425X+1588.9,R2=0.9994。
2.5 精密度考察
精密吸取25mg·L-1的對(duì)照品溶液,按照2.1的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次,記錄峰面積,計(jì)算得到RSD=1.18%,表明儀器精密度良好。
2.6 重復(fù)性試驗(yàn)
按照2.3的方法配制供試品溶液6份,再按照2.1的色譜條件進(jìn)行測(cè)定,記錄峰面積,計(jì)算得到RSD=1.25%,表明該方法重復(fù)性良好。
2.7 穩(wěn)定性考察
取供試品溶液,按2.1的色譜條件分別在0、4、8、12、16、20、24、48、72h進(jìn)樣,記錄峰面積,計(jì)算得到RSD=1.88%,表明供試品溶液在72h內(nèi)穩(wěn)定。
2.8 加樣回收率
取6份同一啤酒樣品溶液各1mL,分別加入濃度為1.0mg·L-1、5.0mg·L-1、10mg·L-1、15mg·L-1、20mg·L-1、25mg·L-1的亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)溶液1mL,搖勻,按2.1的色譜條件注入超高液相色譜儀,記錄峰面積。計(jì)算加樣回收率,平均回收率為99.21%,RSD=0.49%,結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 樣品加樣回收率結(jié)果
2.9 含量測(cè)定
取3種市售啤酒,按照2.3的方法制備供試品溶液3份,按照2.1的色譜條件進(jìn)行測(cè)量,結(jié)果都未檢測(cè)到亮藍(lán)。
本文建立了超高效液相色譜快速測(cè)定啤酒中人工合成色素亮藍(lán)含量的方法,該方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確、靈敏度高,避免了常規(guī)亮藍(lán)含量測(cè)定時(shí)梯度洗脫帶來(lái)的繁瑣和比例不易調(diào)節(jié)等缺點(diǎn),可為食品和市場(chǎng)監(jiān)管部門對(duì)啤酒質(zhì)量的監(jiān)控提供理論依據(jù)和參考價(jià)值。
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中圖分類號(hào):O 657.7+2
文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A
文章編號(hào):1671-9905(2016)02-0034-02
作者簡(jiǎn)介:譚翔(1988-),男,漢族,四川梓潼人,助理工程師,研究方向:分析檢測(cè)
收稿日期:2015-12-24
Determine of Brilliant Blue Content in Beer by UPLC-TUV
TAN Xiang1, CAO Li-Ya2
(1. Guiyang City Building Materials Quality Inspection Center, Guiyang 550009, China;2.School of Public Health, Guizhou Medical University, Guiyang 550025, China)
Abstract:Ultra high performance liquid chromatography was applied to determine the content of brilliant blue in beer with ACQUITY UPLC BEH column C18 1.7μm(2.1mm×50mm Column), mobile phase was methanol- 0.02mol/L ammonium acetate(39∶61), fow rate was 0.3mL/min, the wavelength was 628nm, column temperature was 16.1℃, and sample size was 5μL. The result showed that brilliant blue had a good linear relationship between 1.0~25mg/L. The average recovery was 98.7%, RSD=0.49%.
Key words:UPLC; beer; brilliant blue; content detection