薛非非， 李 坤， 王明芳， 趙利利， 王志敏， 張朔生*（.山西中醫(yī)學(xué)院制藥與食品工程學(xué)院，山西晉中03069；.山西華元醫(yī)藥集團(tuán)有限公司，山西太原03003）

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合煎對利口清含漱液穩(wěn)定性的影響

薛非非1， 李 坤1， 王明芳1， 趙利利1， 王志敏2， 張朔生1*
（1.山西中醫(yī)學(xué)院制藥與食品工程學(xué)院，山西晉中030619；2.山西華元醫(yī)藥集團(tuán)有限公司，山西太原030032）

目的 研究合煎對利口清含漱液穩(wěn)定性的影響。方法 將處方中原工藝改為合煎，并在合煎劑中加入pH穩(wěn)定劑、澄清劑。單因素試驗(yàn)對5種制劑工藝進(jìn)行研究，以綠原酸含有量為質(zhì)量控制指標(biāo)，驗(yàn)證合煎對制劑穩(wěn)定性的改善效果。結(jié)果 合煎與單煎相比，綠原酸含有量基本保持穩(wěn)定。樣品pH值在觀察期內(nèi)變化不大，絮狀物減少。結(jié)論

通過合煎工藝及加入澄清劑、pH穩(wěn)定劑等措施，可以提高利口清含漱液的穩(wěn)定性。

利口清含漱液；穩(wěn)定性；合煎；單因素試驗(yàn)

利口清含漱液主要成分為金銀花和北豆根，具有清熱解毒的功效，用于肺胃火熱引起的復(fù)發(fā)性口瘡和牙周?。ㄑ例l炎和牙周炎）的輔助治療，可減輕該類疾病引起的口腔局部潰瘍、滲出、充血、出血、水腫和疼痛等癥狀［1］。原處方是通過兩種藥材分煎后再合并煎煮液制成，在貯藏過程中存在pH值變化較大、絮狀物較多、有效成分含有量下降等問題。本實(shí)驗(yàn)通過采取合煎工藝［2-5］及加入殼聚糖、磷酸氫二鈉等措施對現(xiàn)有工藝進(jìn)行改進(jìn)，采用單因素試驗(yàn)法對制劑pH值及綠原酸含有量變化情況進(jìn)行分析，得出最優(yōu)工藝。

1　儀器與試劑

Thermo Fisher Scientific U3000高效液相色譜儀；pHS-3C+/3C智能酸度計 （成都世紀(jì)方舟科技有限公司）。

金銀花 （產(chǎn)地河南）和北豆根 （產(chǎn)地河北）經(jīng)山西中醫(yī)學(xué)院張朔生教授鑒定，分別為忍冬科忍冬屬植物金銀花Flos Lonicerae japonicae及防己科植物北豆根Rhizoma Menisperm i。

乙腈為色譜純；殼聚糖、磷酸氫二鈉等均為分析純；水為純化水。

綠原酸對照品 （中國食品藥品檢定研究院，批號140601）。樣品 （編號I～V），具體制備工藝見 “2.2”項(xiàng)。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) C18色譜柱 （C18烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，4.6 mm×250 mm，5μm）；檢測波長327 nm［6］；柱溫25℃；體積流量1.0 mL/min；流動相乙腈-0.4%磷酸溶液 （13∶87）；理論塔板數(shù)按綠原酸計算，應(yīng)不低于1 000。HPLC色譜圖見圖1。

2.2供試品溶液的制備

圖1　HPLC色譜圖

2.2.1制備工藝Ⅰ 稱取金銀花26.25 g，加水210 mL，浸泡1 h，煎煮3次，第1次40 min，第2次30 min，第3次20min，合并煎液，濾過，濾液備用。取北豆根26.25 g，加水210 mL，浸泡4 h，煎煮3次，第1次40 min，第2次30min，第3次20min，合并煎液，濾過，將兩者水煎液分別減壓濃縮至相對密度為1.15～1.20（50℃）的清膏，加入乙醇至含醇量達(dá)70%，攪勻，靜置過夜，回收乙醇，合并兩種溶液，加水至375mL，0～4℃放置48 h，濾過，濾液備用。取苯甲酸鈉1.25 g、檸檬酸1.25 g、碳酸氫鈉3.75 g，加水30 mL溶解，濾過，濾液備用。取薄荷腦0.175 g，加乙醇適量使溶解，與上述兩種濾液合并，加水至500 m L，攪勻，即得樣品Ⅰ。

2.2.2制備工藝Ⅱ 稱取金銀花26.25 g，加水210 mL，浸泡1 h。取北豆根26.25 g，加水210mL，浸泡4 h，合并兩種藥材浸泡液，煎煮3次，第1次40 min，第2次30 min，第3次20 min，合并煎液，濾過，水煎液分別減壓濃縮至相對密度為1.15～1.20（50℃）的清膏，其余制法同 “2.2.1”項(xiàng)，即得樣品Ⅱ。

2.2.3制備工藝Ⅲ 按 “2.2.2”項(xiàng)下制法，在加水定容至500 m L前加入殼聚糖 （0.6 g/100 mL）［7］，攪勻，即得樣品Ⅲ。

2.2.4制備工藝Ⅳ 按 “2.2.2”項(xiàng)下制法，將原工藝碳酸氫鈉3.75 g換成磷酸氫二鈉7.88 g［8］，即得樣品Ⅳ。

2.2.5制備工藝V 按 “2.2.2”項(xiàng)下制法，將原工藝碳酸氫鈉3.75 g換成磷酸氫二鈉7.88 g，并且在加水定容至500 mL前加入殼聚糖 （0.6 g/100 mL），攪勻，即得樣品V。

2.2.6供試品溶液 取樣品10 mL，過濾，精密量取續(xù)濾液1mL，置于10mL棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.3對照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對照品4.20 mg，置50 mL棕色量瓶中，加50%甲醇制成含綠原酸0.084 mg/mL的溶液，即得 （10℃以下保存）。

2.4線性范圍的考察 精密吸取 “2.3”項(xiàng)下對照品溶液1、2、3、4、5、6 mL，置于10m L量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，搖勻。在 “2.1”項(xiàng)色譜條件下，依次進(jìn)樣10μL，以峰面積為縱坐標(biāo) （Y），綠原酸質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo) （X）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=342.67X+0.003 5（r=0.999 9），表明綠原酸在0.008 4～0.050 4 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5精密度試驗(yàn) 精密吸取同一對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μL，測得綠原酸峰面積RSD為0.37%，表明儀器精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液 （樣品Ⅱ），分別于0、1、2、4、8、24 h進(jìn)樣，測得綠原酸峰面積RSD為1.14%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性試驗(yàn) 取同批樣品 （樣品II），重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10μL，測得綠原酸平均含有量為0.566 2 mg/mL，RSD為0.16%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.8加樣回收率試驗(yàn) 精密吸取9份綠原酸含有量已知的樣品Ⅱ1.0mL，置于10mL棕色量瓶中，分別精密加入綠原酸對照品溶液（0.084 mg/mL）5.0、7.0、8.0 mL，加50%甲醇至刻度，搖勻，進(jìn)樣10μL測定。結(jié)果，綠原酸平均回收率為96.40%，RSD為0.56%。

2.95種工藝的利口清含漱液結(jié)果比較

2.9.1綠原酸含有量測定 取 “2.2”項(xiàng)下供試品溶液，每隔20 d測定一次綠原酸含有量 （外標(biāo)法）。結(jié)果，改進(jìn)工藝后的樣品Ⅱ～V較樣品Ⅰ中綠原酸含有量增加，而且在一個多月內(nèi)基本保持穩(wěn)定。具體見表1。

2.9.2統(tǒng)計學(xué)處理 通過SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，對表1數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)以±s表示，組間均值比較采用LSD法（α＜0.05）。結(jié)果，0、20、40 d含有量相互差異均有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05）。

表1　含有量測定結(jié)果

2.9.3pH值測定 樣品Ⅰ的pH值隨時間的延長而略有降低。經(jīng)過工藝改進(jìn)后，樣品Ⅱ、Ⅲ能保持穩(wěn)定，但有較小的浮動；樣品Ⅳ、V在觀察期內(nèi)基本保持恒定。結(jié)果見圖2。

圖2　pH值變化圖

2.9.4絮狀物的觀察 樣品Ⅰ在觀察期內(nèi)出現(xiàn)明顯的絮狀物，樣品Ⅱ～V有所減少，其中樣品Ⅲ、V減少顯著，而且溶液也較澄清。

3　討論

3.1意義 本實(shí)驗(yàn)建立了利口清含漱液中綠原酸的含有量測定方法［9］，為研究金銀花提取工藝奠定了基礎(chǔ)，也為優(yōu)化利口清含漱液制劑工藝和制定相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)。

3.2合煎的選擇 復(fù)方中藥溶液制劑中的各類型有效組分若按其酸堿性分類，大致可分為弱有機(jī)酸和弱有機(jī)堿［10］。研究表明，這兩類成分以游離狀態(tài)存在時，大多在水中溶解度較小而出現(xiàn)沉淀，若采用適當(dāng)方式使兩者反應(yīng)成鹽后，不僅其溶解度會顯著增加，更保證了制劑的穩(wěn)定性。

利口清含漱液中金銀花主要成分為綠原酸［11］，而北豆根為北豆根堿等生物堿類成分［12-13］，合煎過程中會產(chǎn)生酸堿反應(yīng)，生成較穩(wěn)定的酸堿復(fù)合物，可防止利口清含漱液在長期貯藏過程中含有量的下降。實(shí)驗(yàn)顯示，合煎樣品中綠原酸含有量高而穩(wěn)定，pH值也相對穩(wěn)定，而采用原工藝制成的樣品中其波動較大。因此，合煎可以作為解決利口清含漱液含有量下降的方法之一。

3.3pH穩(wěn)定劑的選擇 在復(fù)方制劑中［14］，一種成分很可能受處方中溶劑和其它成分或輔料的影響，從而發(fā)生改變。因此，一般需加入適當(dāng)?shù)乃?、堿或緩沖溶液，使其處于最適pH值狀態(tài)，以滿足藥物制劑安全、穩(wěn)定、有效的要求。

由于利口清含漱液原工藝中pH值變化較大，因此改變了緩沖溶液，將原工藝中的碳酸氫鈉改為磷酸氫二鈉溶液，檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液［15］使利口清含漱液的pH值相對穩(wěn)定，能夠達(dá)到預(yù)期效果。

3.4澄清劑的選擇 原工藝中利口清含漱液長期貯藏時，會出現(xiàn)絮狀物明顯增多的問題，因此本實(shí)驗(yàn)加入澄清劑殼聚糖以提高其澄清度。殼聚糖是一種優(yōu)良的澄清劑，具有良好的澄清性能，在中藥提取方面具有廣泛的應(yīng)用［16-17］。結(jié)果表明，加入殼聚糖后樣品絮狀物明顯減少，澄清度明顯高于其他樣品。此外，加入緩沖液磷酸氫二鈉后，pH值相對穩(wěn)定，而且絮狀物也有所下降。因此，通過加入澄清劑殼聚糖和緩沖液磷酸氫二鈉，同樣可以有效解決這一問題。

綜上所述，采用合煎工藝、加入澄清劑殼聚糖、改變pH緩沖劑等綜合措施，可有效提高利口請含漱液的穩(wěn)定性，而且能保證制劑中有效成分綠原酸的含有量，療效得到保障。另外，通過HPLC法測定綠原酸的含有量時，操作簡便，重復(fù)性好，可準(zhǔn)確評價該制劑的質(zhì)量。

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R927.11

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1001-1528（2016）06-1402-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2016.06.043

2015-09-10

薛非非 （1992—），女，碩士生，從事中藥炮制現(xiàn)代研究。E-mai1：18234046128@163.com

張朔生 （1965—），男，碩士，教授，碩士生導(dǎo)師，從事中藥炮制現(xiàn)代研究及新產(chǎn)品開發(fā)。Te1：（0351）3179909，E-mai1：zhangshuosheng@a1iyun.com