譚麗鶴， 李紅玉（錦州醫(yī)科大學(xué)，遼寧錦州121000）

?

桑蠶蛹多糖超聲提取優(yōu)化及水溶性多糖組分分析

譚麗鶴， 李紅玉*
（錦州醫(yī)科大學(xué)，遼寧錦州121000）

目的 優(yōu)化桑蠶蛹多糖的超聲提取工藝，并采用氣質(zhì)聯(lián)用 （GC-MS）及紅外光譜 （IR）法對(duì)水溶性多糖（PSP1）進(jìn)行組分分析。方法 以多糖得率為指標(biāo)，采用Box-Behnken設(shè)計(jì)和響應(yīng)面法優(yōu)化超聲提取工藝。多糖透析后，樹(shù)脂柱層析得到水溶性多糖 （PSP1），GC-MS和IR法分析其組分。結(jié)果 最佳條件為超聲功率760 W，液料比11∶1，提取時(shí)間10 min，得率15.28%。PSP1的主要組分為葡萄糖、山梨糖、半乳糖、甘露糖，摩爾比為95.94∶1.59∶1.59∶0.88，而且具有典型的多糖特征吸收峰，并含有吡喃糖。結(jié)論 該方法簡(jiǎn)便快速，多糖得率較高。

桑蠶蛹；多糖；超聲提取；水溶性多糖 （PSP1）；組分分析；Box-Behnken設(shè)計(jì)；響應(yīng)面法；GC-MS

桑蠶蛹（mu1berry si1k-worm）［1-2］別名小蜂兒，為蠶蛾科動(dòng)物家蠶蛾的蛹，在我國(guó)食用歷史悠久，因其含有多糖和豐富的蛋白質(zhì)，具有提高免疫力、延緩衰老、降血脂、降膽固醇等多重功效，多用于體弱者、老人和孕婦產(chǎn)后恢復(fù)。近年來(lái)研究顯示，多糖具有抗病毒、抗衰老、降血糖、刺激造血、免疫調(diào)節(jié)等生物學(xué)功效［3-4］。有文獻(xiàn)顯示，從桑蠶蛹中提取出的一種水溶性多糖具有抑制HeLa細(xì)胞增殖的作用［5］，但是未對(duì)其組分進(jìn)行分析和確定。因此，本實(shí)驗(yàn)采用超聲波法對(duì)桑蠶蛹多糖的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，并且對(duì)其中具有抗癌活性的多糖進(jìn)行分離、純化和鑒定，分析了其單糖組成，以求為尋找天然產(chǎn)物作為腫瘤治療替代藥物的進(jìn)一步研發(fā)提供基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1材料、試劑、儀器

1.1.1材料 桑蠶蛹子實(shí)體采自山東省臨沂市。G-150葡聚糖凝膠樹(shù)脂、二乙氨基乙基纖維52樹(shù)脂、SP131198纖維素透析袋 （上海源葉生物科技有限公司）；葡萄糖為分析純 （錦州市鑫源化玻有限公司）。

1.1.2試劑 石油醚、三氯甲烷、正丁醇、95%乙醇、重蒸酚、濃硫酸、吡啶、甲醇等均為分析純（錦州市鑫源化玻有限公司）。

1.1.3儀器 500 g搖擺式中藥粉碎機(jī) （溫嶺市奧力中藥機(jī)械有限公司）；DHG-9075A鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；UV2550紫外可見(jiàn)分光光度儀 （日本島津公司）；Sigma高速冷凍離心機(jī) （北京興達(dá)恒信科技有限公司）；GC7890B/ MSG3440B氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)安捷倫公司）；A1pha傅里葉變換紅外光譜儀 （緯斯特儀器中國(guó)有限公司）。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備 采用苯酚-硫酸法繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，測(cè)定多糖含有量［6-8］。精確量取0.1 mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液 （制備方法為精密稱(chēng)取于105℃烘干至恒重的葡萄糖0.100 0 g，蒸餾水溶解，定容于100 m L量瓶中。吸取10 mL，置于另一100 mL量瓶中，蒸餾水定容，即得。）0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9 mL，分別置于比色管中，加蒸餾水至1.0 mL。分別加入1 m L 5%重蒸酚和5 m L濃硫酸，沸水浴加熱10 min，待反應(yīng)完全后冷卻至室溫，于490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo) （Y），葡萄糖含有量為橫坐標(biāo) （X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程Y=1.293 7X+0.015 6（R2=0.998 6），表明葡萄糖在0.02～0.08 mg/m L范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

1.2.2樣品的預(yù)處理 桑蠶蛹子實(shí)體于60℃烘箱中烘干后，粉碎機(jī)粉碎，過(guò)60目篩。取過(guò)篩后的桑蠶蛹粉末適量，索氏提取器按1∶9的比例加入石油醚回流5 h進(jìn)行脫脂，再經(jīng)95%乙醇回流提取5 h除去小分子醇溶物，將處理后的蠶蛹粉末于室溫下晾干。

1.2.3超聲波法提取桑蠶蛹多糖工藝優(yōu)化［9］稱(chēng)取一定量的預(yù)處理后的桑蠶蛹粉末，按一定比例加入0.02 mo1/L NaOH溶液［10］，超聲提取2次，合并濾液，HC1溶液調(diào)節(jié)pH值至中性，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至一定體積后，加入4倍量95%乙醇，置4℃冰箱中過(guò)夜。醇沉液于4℃、3 000 r/min條件下離心20 min，干燥得桑蠶蛹粗多糖，計(jì)算得率。

1.2.3.1響應(yīng)曲面法試驗(yàn)設(shè)計(jì) 根據(jù)中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，采用3因素3水平的響應(yīng)面分析法。在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，以功率 （A）、時(shí)間 （B）、液料比 （C）為自變量，確定提取工藝的最佳參數(shù)，因素水平見(jiàn)表1。

表1　因素水平Tab.1 Factors and levels

1.2.4桑蠶蛹多糖的脫色及除蛋白 將蠶蛹粗多糖用Sevag法除蛋白，4℃下5 000 r/min離心20 min，取上清液反復(fù)離心，直至無(wú)蛋白層出現(xiàn)為止［11-12］，活性炭脫色，經(jīng)3層濾紙抽濾以除去活性炭粉末［13-14］。濾液經(jīng)濃縮、醇沉、干燥，得到除蛋白及脫色后的桑蠶蛹多糖。取0.5 mg/mL樣品液于比色管中，加蒸餾水至 1.0 mL，按“1.2.1”項(xiàng)下方法于490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，利用回歸方程計(jì)算脫色、脫蛋白后多糖的含有量，并計(jì)算490 nm波長(zhǎng)處的保留率及450 nm波長(zhǎng)處的脫色率。

計(jì)算公式為多糖含有量=純多糖質(zhì)量/粗多糖質(zhì)量×100%，多糖脫色率=（A1-A2）/A1× 100%，多糖保留率=（B1-B2）/B1×100%。其中，A1、A2分別為經(jīng)脫色、脫蛋白處理前后桑蠶蛹多糖溶液在450 nm波長(zhǎng)處的吸光度，B1、B2分別為經(jīng)脫色、脫蛋白處理前后的桑蠶蛹多糖溶液在490 nm波長(zhǎng)處的吸光度。

1.2.5桑蠶蛹多糖的純化 將脫色、脫蛋白后的多糖用蒸餾水溶解，裝入截留相對(duì)分子質(zhì)量5 000 Da的透析袋中，在流動(dòng)自來(lái)水中透析48 h，再置于蒸餾水中透析24 h。將透析后的多糖進(jìn)行樹(shù)脂柱層析 （40 mm×400 mm），分別以超純水和0.2、0.4 mo1/L NaC1溶液為洗脫液，體積流量為0.5 mL/min，每管收集5 mL，苯酚-硫酸法在490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度［15］，并繪制吸光度-試管數(shù)曲線(xiàn)。收集多糖PSP1洗脫液，濃縮、醇沉后于60℃烘箱中干燥。

查閱文獻(xiàn)可知，桑蠶蛹水溶性多糖 （PSP1）具有抑制HeLa細(xì)胞增殖的作用［5］，并能明顯增強(qiáng)B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的增殖，促進(jìn)小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬活力和溶血素生成［16］，但尚無(wú)化學(xué)方面的研究。因此，本實(shí)驗(yàn)將在優(yōu)化提取工藝的基礎(chǔ)上，對(duì)其組分進(jìn)行分析。

1.2.6桑蠶蛹多糖PSP1的純化 將Sephadex G-150樹(shù)脂于沸水中溶脹2 h后裝柱，平衡液平衡層析柱5個(gè)柱體積。多糖PSP1經(jīng)蒸餾水溶解后，上凝膠柱層析 （30 mm×300 mm），以超純水為洗脫液，體積流量為0.5 mL/min，每管收集5 mL，苯酚-硫酸法在490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，并繪制吸光度-試管數(shù)曲線(xiàn)，收集洗脫液，濃縮、醇沉后于60℃烘箱中干燥［17］。

1.2.7多糖PSP1的純度鑒定

1.2.7.1紙層析法 取0.2%PSP1多糖溶液20μL，點(diǎn)樣于濾紙（3 cm×20 cm）距端點(diǎn)1 cm處的中部，以正丁醇-乙酸乙酯-吡啶-水 （6∶1∶5∶4）為展開(kāi)劑，飽和后于室溫下展開(kāi)6 h，通風(fēng)櫥中揮干溶劑。以苯胺-二苯胺為顯色劑，于60℃烘箱中放置20 min顯色［18］。

1.2.7.2紫外分光光度法 稱(chēng)取少量多糖PSP1，溶解于適量蒸餾水中，紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在200～400 nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。

1.2.8桑蠶蛹多糖PSP1的組分分析

1.2.8.1多糖的完全酸水解及硅烷化衍生 精密稱(chēng)取桑蠶蛹多糖PSP1 10.0 mg，置于安瓿瓶中，加入3 mL 0.5 mo1/L硫酸溶液，酒精噴燈真空封管，置于110℃烘箱中水解6 h，冷卻至室溫后加入過(guò)量碳酸鋇粉末，靜置過(guò)夜，待其中和至中性后離心，上清液冷凍干燥，即得多糖水解產(chǎn)物，備用［19-21］。將水解產(chǎn)物于60℃下干燥至恒重，加入2 m L無(wú)水吡啶，置于80℃烘箱中反應(yīng)30 min后，加入0.6 mL硅烷化試劑（六甲基二硅胺烷-三甲基氯硅烷為2∶1），搖勻，80℃烘箱中反應(yīng)10 min［22-23］，過(guò)0.22μm有機(jī)濾膜，即得衍生化產(chǎn)物，備用。

1.2.8.2氣相色譜-質(zhì)譜分析條件 氣相色譜EI源，電子能量70 eV；分子量掃描范圍30～600 u；進(jìn)樣口溫度210℃；接口溫度210℃；載氣為氦氣；體積流量為1 m L/min；分流比60∶1；程序升溫（100℃保持5 min，以25℃/min速率升至210℃，保持14 min，以5℃/min速率升至290℃）；進(jìn)樣量為0.5μL。質(zhì)譜EI源，電子能量70 eV；溶劑延遲4 min。

1.2.9紅外分析 稱(chēng)取干燥至恒重的桑蠶蛹多糖PSP1 1 mg，置于潔凈的瑪瑙研缽中，紅外燈下研磨成粉，加入200 mg干燥的KBr粉末，研磨至兩者完全混合均勻。將混合物置于潔凈的壓片模具中，組裝好后進(jìn)行壓片，制成透明薄片。以空氣為空白，將薄片裝在樣品架上，置于樣品室中，在400～4 000 cm-1區(qū)間內(nèi)進(jìn)行紅外光譜掃描，先測(cè)定空白背景，再測(cè)定樣品的紅外光譜，進(jìn)行修正后觀(guān)察譜峰情況［24-25］。

2　結(jié)果與分析

2.1Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果 見(jiàn)表2。

表2　試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Tab.2 Design and resu lts of tests

根據(jù)表2結(jié)果，利用Design Expert8.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行二次回歸分析，得到回歸方程Y= 13.63+2.28A+1.50B-0.88C+0.54AB-1.19AC-0.38BC-2.87A2-0.98B2-1.34C2，方差分析見(jiàn)表3。由表可知，回歸方程模型的P＜0.000 1，高度顯著；R2為0.978 4，與實(shí)驗(yàn)擬合較好，符合度達(dá)97.84%，可靠性高，線(xiàn)性關(guān)系顯著；R2adj值為0.950 7，能夠解釋95.07%響應(yīng)值的變化，進(jìn)一步證明其可靠性。另外，功率和時(shí)間對(duì)多糖得率影響較大，尤其以功率最為顯著，影響程度依次為功率＞時(shí)間＞液料比。

2.2響應(yīng)面曲線(xiàn)圖 由圖1可知，功率較低時(shí)，得率隨時(shí)間和液料比的增加而提高，但功率較大時(shí)反而降低，即與功率和液料比有關(guān)，而且穩(wěn)定點(diǎn)都落在范圍內(nèi)，表明兩者的交互作用對(duì)得率也有影響。液料比較低時(shí)，得率隨時(shí)間的增加而提高。時(shí)間較長(zhǎng)時(shí)，得率隨液料比的增加而呈降低趨勢(shì)。經(jīng)軟件分析預(yù)測(cè)，該模型得率為15.53%，最優(yōu)提取條件為超聲功率764.60 W，時(shí)間10.00 min，液料比11.22∶1。結(jié)合實(shí)際操作，將其修正為超聲功率760 W，時(shí)間10 min，液料比11∶1。為驗(yàn)證結(jié)果的可靠性，按上述條件設(shè)計(jì)3次平行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，測(cè)得桑蠶蛹多糖平均得率為15.28%，與預(yù)測(cè)值接近，說(shuō)明該模型準(zhǔn)確可靠。

表3　方差分析Tab.3 Analysis of variance

2.3桑蠶蛹多糖的純化 經(jīng)過(guò)石油醚脫脂、水提醇沉、Sevag法除蛋白、活性炭脫色后，得到淺黃色的桑蠶蛹粗多糖，其含有量為82.34%，脫色率為60.90%，保留率為49.68%。粗多糖經(jīng)截留分子量5 000μ的透析袋透析，經(jīng)DEAE-52樹(shù)脂純化。由圖2可知，多糖PSP1的峰值最高，而且峰形對(duì)稱(chēng)。

2.4 桑蠶蛹多糖PSP1的純化及鑒定 Sephadex G-150樹(shù)脂柱層析的紫外圖譜 （圖3）顯示為單一的洗脫峰，洗脫曲線(xiàn)峰形對(duì)稱(chēng)，表明多糖純度較高，分子量分布較均一。該多糖在紙層析上顯示為單一斑點(diǎn)，說(shuō)明為單一組分。在260 nm和280 nm波長(zhǎng)處沒(méi)有吸收峰，表明不含核酸和蛋白質(zhì)。

2.5桑蠶蛹多糖PSP1的組分分析 桑蠶蛹多糖PSP1經(jīng)硫酸酸解及硅烷化衍生后，再經(jīng)氣相色譜-質(zhì)譜 （GC-MS）檢測(cè)，供試品各峰保留時(shí)間與NIST譜庫(kù)對(duì)照結(jié)果見(jiàn)表4、圖4。由表可知，PSP1中有4種單糖，匹配度均在85%以上，以葡萄糖為主，其比例為95.94∶1.59∶1.59∶0.88。

圖1　響應(yīng)面曲線(xiàn)圖Fig.1 Response surface curves

圖2　DEAE-52樹(shù)脂柱純化多糖Fig.2 Purification of polysaccharides by DEAE-52 resin column

圖3　G-150葡聚糖凝膠柱純化多糖PSP1Fig.3 Purification of polysaccharide PSP1 by Sephadex G-150 colum n

表4　組分分析結(jié)果Tab.4 Resu lts of component analysis

2.6紅外光譜解析 由圖5可知，3 600～3 200 cm-1處有一個(gè)較寬的吸收峰，為氫鍵中O-H鍵的伸縮振動(dòng)峰；2 926.01 cm-1為C-H鍵的伸縮振動(dòng)峰；1 419.61 cm-1為C-H鍵的變角振動(dòng)吸收峰，由此可判斷 PSP1為 多 糖［26-27］。1 653.00 cm-1為O-H鍵的彎曲振動(dòng)峰；1 384.89～1 419.61 cm-1為 C-H鍵的彎曲振動(dòng)峰；1 026.13、1 080.14、1 151.50 cm-1為C-O鍵的伸縮振動(dòng)峰；1 026.13、1 080.14 cm-1為吡喃糖環(huán)的特征吸收峰；869.90 cm-1為β-D-甘露吡喃糖苷δC-H鍵的振動(dòng)峰［28-29］。

3　討論

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)響應(yīng)面法優(yōu)化桑蠶蛹多糖的超聲提取工藝，發(fā)現(xiàn)最優(yōu)條件為超聲功率760 W，時(shí)間10min，液料比11∶1，平均收率為15.28%。采用硫酸酸解、硅烷化法對(duì)PSP1進(jìn)行衍生，GC-MS顯示其單糖組分為葡萄糖、山梨糖、半乳糖和甘露糖，比例95.94∶1.59∶1.59∶0.88。今后，還將采用高碘酸氧化、Smith降解、甲基化反應(yīng)、質(zhì)譜、核磁共振等方法對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行深入研究。

圖4　GC-MS總離子流圖Fig.4 GC-MS total ion current chromatogram

圖5　紅外光譜圖Fig.5 Infrared spectrum

［1］方定堅(jiān)，鄭祥明，廖森泰，等.家蠶蛹人工培養(yǎng)巴西蟲(chóng)草研究［J］.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1995，16（1）：103-108.

［2］賴(lài)泰君，劉旭輝，孫建華，等.蠶蛹多糖提取工藝的研究［J］.中藥材，2009，32（7）：1137-1139.

［3］錢(qián) 珍，江國(guó)榮.多糖抗腫瘤作用的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)藥物警戒，2015，12（2）：96-98.

［4］Ca1iceti P，Sa1maso S，Bersani S.Cancer drug discovery and deve1opment［M］.New York：Springer-Ver1ag New York Inc.，2010：163-219.

［5］嚴(yán) 鵬.蠶蛹多糖的提取分離及對(duì)HeLa細(xì)胞增殖影響的研究［D］.錦州：遼寧醫(yī)學(xué)院，2014.

［6］吳海燕，袁秋梅.導(dǎo)數(shù)光譜法快速測(cè)定蠶蛹中的多糖含量［J］.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43（4）：309-311.

［7］陰婉婷，李 彤，馬 辰.改良的苯酚-硫酸法測(cè)定蛹蟲(chóng)草多糖含量［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43（4）：117-118，173.

［8］Rover M R，Johnston P A，BuddhiP，et al.Tota1water-so1ub1e sugars quantificaton in bio-oi1using the pheno1-su1furic acid assay［J］.JAnal Appl Pyrol，2013，104（2）：194-201.

［9］遲海霞，涂宗財(cái)，陳鋼，等.米糠多糖的超聲波輔助纖維素酶-檸檬酸聯(lián)合提取及結(jié)構(gòu)分析［J］.食品科學(xué)，2010，31（24）：168-171.

［10］孫 龍，馮 穎，何 釗，等.蠶蛹多糖的堿液提取及免疫活性初步研究［J］.林業(yè)科學(xué)研究，2007，20（6）：782-786.

［11］蔡 銘，羅印龍，孫培龍.黑木耳多糖的抑菌活性與單糖組分分析［J］.浙江工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，42（5）：534-535.

［12］伍善廣，賴(lài)泰君，孫建華，等.蠶蛹多糖脫蛋白方法研究［J］.食品科學(xué)，2011，32（14）：21-24.

［13］楊 云，田潤(rùn)濤，苗明三，等.大棗渣多糖活性炭脫色工藝研究［J］.河南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，19（1）：35-36.

［14］孫 頡，何 慧，謝筆鈞.活性炭脫色對(duì)靈芝水提液活性成分的影響［J］.化學(xué)工業(yè)與工程技術(shù)，2001，22（1）：5-8.

［15］Miao Y，Xiao BX，Jiang Z，etal.Growth inhibition and ce11-cyc1e arrest of human gastric cancer ce11s by Lycium barbarum po1ysaccharide［J］.Med Oncol，2010，27（3）：785-790.

［16］王國(guó)基，殷偉芬，王 俊，等.蠶蛹多糖對(duì)小鼠免疫功能的影響［J］.江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，17（5）：373-375.

［17］CaiW R，Xie L L，Chen Y，et al.Purification characterization and anticoagu1ant activity of the po1ysaccharides from green tea［J］.Carbohyd Polym，2013，92（2）：1086-1090.

［18］劉 葳，于源華，毛亞杰，等.黃綠蜜環(huán)菌多糖的分離純化與組成結(jié)構(gòu)分析［J］.長(zhǎng)春理工大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，30（2）：102-105.

［19］姚 丹，王宏軍.黃芪多糖單糖組分的氣相色譜分析［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（9）：5128-5129.

［20］許 輝，白國(guó)濤，潘國(guó)卿，等.硅烷化衍生化-氣相色譜法測(cè)定不同品種莜麥的非淀粉多糖［J］.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，34（1）：146-151.

［21］Li R，Chen W C，Wang W P，et al.Extraction，characterization of Astragalus po1ysaccharides and its immunemodu1ating activities in rats with gastric cancer［J］.Carbohyd Polym，2009，78（4）：738-742.

［22］張明月，鄒一可，王彩云，等.女貞子多糖的提取工藝及單糖組成［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（3）：88-89.

［23］劉 剛，王 輝，周 建，等.柱前衍生化毛細(xì)管氣相色譜法分析松茸多糖的單糖組成［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（21）：63-64.

［24］劉 冰，許程劍，王月香，等.阿魏菇多糖的分離純化與結(jié)構(gòu)分析［J］.食品研究與開(kāi)發(fā)，2014，35（8）：69-72，85.

［25］田仁君.桑葚多糖的分離純化及組成分析［J］.華西藥學(xué)雜志，2014，29（4）：401-404.

［26］安曉娟，馮 琳，宋紅平，等.淫羊藿多糖的分離純化及結(jié)構(gòu)初步分析［J］.生物學(xué)雜志，2012，29（3）：39-41.

［27］魏寶東，陳留勇，孟憲軍，等.黃桃水溶性多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)分析［J］.食品工業(yè)科技，2005，26（6）：88-89.

［28］顏 軍，侯賢燈，徐開(kāi)來(lái).柱前衍生HPLC分析銀耳多糖的單糖組成［J］.中國(guó)測(cè)試，2011，37（1）：44-46.

［29］李志華.鐵皮石斛多糖的提取、分離、純化及結(jié)構(gòu)分析［D］.南寧：廣西師范學(xué)院，2012：33-34.

Optim izing the ultrasonic extraction of polysaccharides from mulberry silkworm pupa and analyzing the water-soluble polysaccharide

TAN Li-he， LIHong-yu*

（Jinzhou Medical University，Jinzhou 121000，China）

AIM To optimize the u1trasonic extraction of po1ysaccharides from mu1berry si1kworm pupa and to ana1yze the components of water-so1ub1e po1ysaccharide（PSP1）by gas chromatography-mass spectrometer（GCMS）and infrared spectroscopy（IR）.METHODS With the po1ysaccharide yie1d as amode1 for eva1uation，the u1trasonic extraction was optimized by Box-Behnken design and response surface method.After dia1ysis，PSP1 stratefied by the resin co1umn was qua1ified and quantified by GC-MSand IR.RESULTS At the highest po1ysaccharide yie1d of 15.28%，the best conditions were 760 W for u1trasonic power，11∶1 for 1iquid-so1id ratio，and 10 min for extraction time.Themain components of PSP1，presenting the typica1 characteristic absorption peaks of po1ysaccharides，were determined to be g1ucose，sorbito1，ga1actose andmannose at themo1ar ratio of95.94∶1.59∶1.59∶0.88，and with a concomitant pyranose.CONCLUSION This simp1e and rapid method can produce a high yie1d of po1ysaccharides.

mu1berry si1kworm pupa；po1ysaccharides；u1trasonic extraction；water-so1ub1e po1ysaccharide（PSP1）；componentana1ysis；Box-Behnken design；response surfacemethod；GC-MS

R284.2

A

1001-1528（2016）06-1254-06

10.3969/j.issn.1001-1528.2016.06.011

2015-12-01

譚麗鶴 （1991—），女，碩士，研究方向?yàn)樗巹W(xué)。Te1：18841622145，E-mai1：1402334040@qq.com

李紅玉 （1956—），女，博士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)檩d體栓劑及新藥開(kāi)發(fā)。E-mai1：1ihongyu@163.com