玉 華（內(nèi)蒙古民族大學(xué)，內(nèi)蒙古通遼028000）

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如達(dá)七味散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

玉 華
（內(nèi)蒙古民族大學(xué)，內(nèi)蒙古通遼028000）

目的 建立蒙藥如達(dá)七味散 （木香、梔子、蓽茇等）的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 TLC法鑒別木香、梔子、蓽茇。HPLC分析采用Inertsi1C18色譜柱 （150 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相甲醇-水 （59∶41）；柱溫30℃；體積流量1.0mL/min；檢測波長225 nm（木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯）和343 nm（胡椒堿）。結(jié)果 TLC斑點(diǎn)清晰，專屬性強(qiáng)。木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯和胡椒堿分別在76.6～459.6 ng、123.6～741.6 ng、130.62～738.72 ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率分別為99.07%、98.87%、99.24%，RSD分別為1.02%、1.58%、1.76%（n=6）。結(jié)論 該方法精密度高，重復(fù)性好，可用于如達(dá)七味散的質(zhì)量控制。

如達(dá)七味散；木香；梔子；蓽茇；木香烴內(nèi)酯；去氫木香內(nèi)酯；胡椒堿

蒙藥如達(dá)七味散載自 《赤峰市藥品標(biāo)準(zhǔn)》，由木香、梔子、石榴皮、瞿麥、砂仁、蓽茇、山楂7味藥材組成，具有止吐，解痙之功效，主要用于“巴達(dá)干”、“寶日”引起的呃逆、嘔吐、胃痙攣等癥，臨床療效極為顯著，沿用至今。然而，目前無該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究報(bào)道，故本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法對(duì)該藥物中的木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯和胡椒堿進(jìn)行測定，同時(shí)應(yīng)用TLC法對(duì)木香、梔子和蓽茇等進(jìn)行鑒別，為其后續(xù)臨床應(yīng)用及研發(fā)提供參考。

1　材料

LC-20ATVP液相色譜儀（包括SPD-M20AVP檢測器、Shimadzu-VP色譜工作站）、AUW電子天平 （日本島津公司）；KQ-600超聲波清洗器（40 kHz、600 W，昆山市超聲儀器有限公司）；DHG-9070電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 （上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；ZF-I三用紫外分析儀 （上海銀澤儀器設(shè)備有限公司）。木香烴內(nèi)酯 （批號(hào) 111524-201208）、去氫木香內(nèi)酯 （批號(hào) 111525-201209）、胡椒堿 （批號(hào) 110775-201105）、梔子苷 （批號(hào)110749-201316）對(duì)照品 （中國食品藥品檢定研究院）。蒙藥如達(dá)七味散 （批號(hào)分別為 131125、140428、130720，內(nèi)蒙古赤峰市巴林右旗蒙醫(yī)院）。

2　TLC鑒別

2.1木香 取樣品及相應(yīng)的陰性樣品各約2.0 g，加甲醇15 mL，超聲處理30 min，過濾，濾液蒸干，2 mL甲醇溶解，即得供試品溶液。另取木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯，加甲醇配成1.0 mg/mL溶液。各吸取6μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，丙酮-環(huán)己烷 （3∶10）預(yù)飽和25 min并上行展開至12 cm后取出，晾干，5%香草醛硫酸溶液顯色，適當(dāng)溫度加熱至斑點(diǎn)清晰，結(jié)果見圖1。由圖可知，在對(duì)照品與供試品相應(yīng)的位置處，顯示相同顏色斑點(diǎn)，陰性樣品無干擾［1］。

圖1　木香的TLC色譜圖Fig.1 TLC chromatogram of Aucklandiae Radix

2.2梔子 取樣品及相應(yīng)的陰性樣品各約1.5 g，分別加甲醇10 m L，超聲處理30 min，過濾，濾液蒸干，1.5 mL甲醇溶解，即得供試品溶液。另取梔子苷，加甲醇配成1.0 mg/mL溶液。各吸取8μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，甲酸-丙酮-乙酸乙酯-水 （1∶5∶5∶1）預(yù)飽和20 min并上行展開至12 cm后取出，晾干，置365 nm紫外光燈下檢視，結(jié)果見圖2。由圖可知，在對(duì)照品與供試品相應(yīng)的位置處，顯示相同顏色斑點(diǎn)，陰性樣品無干擾［2-3］。

圖2　梔子的TLC色譜圖Fig.2 TLC chromatogram of Gardeniae Fructus

2.3蓽茇 取樣品及相應(yīng)的陰性樣品各約1.0 g，加無水乙醇10 mL，超聲處理30 min，濾液蒸干，1.0 mL甲醇溶解，即得供試品溶液。另取胡椒堿，加無水乙醇配成1.2 mg/mL溶液。各吸取5μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，丙酮-乙酸乙酯-甲苯（1∶2∶7）預(yù)飽和30 min并上行展開至12 cm后取出，晾干，10%硫酸乙醇溶液顯色，適當(dāng)溫度加熱至斑點(diǎn)清晰，結(jié)果見圖3。由圖可知，在對(duì)照品與供試品相應(yīng)的位置處，顯示相同顏色斑點(diǎn)，陰性樣品無干擾［4］。

圖3　蓽茇的TLC色譜圖Fig.3 TLC chromatogram of Piperis Longi Fructus

3　木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯和胡椒堿含有量的測定［5-10］

3.1色譜條件 Inertsi1-C18色譜柱（150 mm× 4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相為甲醇-水 （59∶41）；體積流量1.0 mL/min；柱溫35℃；木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯的檢測波長225 nm，在保留時(shí)間15 min時(shí)變換胡椒堿的檢測波長343 nm；進(jìn)樣量10μL。

3.2對(duì)照品溶液的制備 精密稱取木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品適量，加甲醇配成含30.64μg/m L木香烴內(nèi)酯和49.44μg/mL去氫木香內(nèi)酯的溶液。再精密稱取胡椒堿對(duì)照品適量，加甲醇配成52.248μg/mL溶液，即得。

3.3供試品溶液的制備 精密稱取樣品1.0 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，密塞過夜，超聲處理30 min，放冷，甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，取續(xù)濾液，0.45μm微孔濾膜過濾，即得。

3.4陰性溶液的制備 按處方量制備缺相應(yīng)藥材的樣品，按 “3.3”項(xiàng)下方法制備。

3.5專屬性考察 精密吸取上述溶液各10μL，在 “3.1”項(xiàng)色譜條件下分別注入儀器，結(jié)果見圖4。由圖可知，供試品溶液與木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯和胡椒堿色譜峰處均有吸收峰，而陰性樣品無干擾。

3.6線性關(guān)系考察 精密吸取木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯的混合溶液和胡椒堿溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0μL，注入HPLC色譜儀，以峰面積為縱坐標(biāo) （Y），進(jìn)樣量為橫坐標(biāo) （X）進(jìn)行回歸，得到三者的回歸方程分別為Y= 1 882.3X+1 691.3（r=0.999 8），Y=1 278.4X+ 5 906.1（r=0.999 9），Y=7 097.9X-18 705（r=0.999 8），分別在76.6～459.6、123.6～741.6、130.62～738.72 ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取3個(gè)對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)注入儀器6次，記錄峰面積。結(jié)果，木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯和胡椒堿峰面積RSD分別為1.09%、1.28%、1.26%，表明儀器精密度良好。

3.8穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一樣品溶液10μL，分別于0、2、4、6、8、10、12 h進(jìn)樣。結(jié)果，木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯和胡椒堿峰面積RSD分別為1.23%、1.52%、0.77%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.9重復(fù)性試驗(yàn) 取同一樣品約1.0 g，按“3.3”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，在 “3.1”項(xiàng)條件下測定。結(jié)果，木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯和胡椒堿峰面積RSD分別為0.65%、1.70%、0.80%，表明該方法重復(fù)性良好。

1.木香烴內(nèi)酯 2.去氫木香內(nèi)酯 3.胡椒堿1.costuno1ide 2.dehydrocostus 1actone 3.piperine

3.10加樣回收率試驗(yàn) 取含有量已知的樣品0.5 g，精密加入0.1244、0.0766和0.082 4 mg/mL對(duì)照品貯備液，按“3.3”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，進(jìn)行測定，結(jié)果見表1。

3.11 含有量測定 取3批樣品，每批約1.0 g，按 “3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測定木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯、胡椒堿的含有量，結(jié)果見表2。

表1　加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）Tab.1 Results of recovery tests（n=6）

表2　含有量測定結(jié)果Tab.2 Results of con tent determ ination

4　討論

4.1TLC鑒別木香展開劑的選擇 本實(shí)驗(yàn)考察甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸 （10∶1∶0.1）、環(huán)己烷-醋酸乙酯 （17∶3）、甲苯-乙酸乙酯 （19∶1）、石油醚（60～90℃）-醋酸乙酯-苯 （7∶1.5∶1.5）、環(huán)己烷-丙酮 （10∶3）等展開系統(tǒng)，發(fā)現(xiàn)環(huán)己烷-丙酮（10∶3）的效果最好，故選用該展開系統(tǒng)。

4.2提取方法的選擇 對(duì)70℃恒溫水浴加熱回流提取1、1.5 h，以及冷浸過夜超聲提取30、40min 2種提取方法進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)無顯著差異。綜合考慮，選擇冷浸過夜超聲提取30 min。

4.3流動(dòng)相比例的選擇 以不同比例 （65∶35、60∶40、58∶42、57∶43、59∶41）甲醇-水進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)比例為59∶41時(shí)分離度最佳，而且峰形良好，故選擇其作為流動(dòng)相。

5　結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法和TLC法，對(duì)蒙藥如達(dá)七味散進(jìn)行含有量測定和定性鑒別，該方法操作簡單，重復(fù)性良好，準(zhǔn)確可靠，可為該藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立及其開發(fā)應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

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Quality standard for Ruda Q iwei Powder

YU Hua

（Inner Mongolia University for Nationalities，Tongliao 028000，China）

AIM To estab1ish the qua1ity standard for Mongo1ian medicine Ruda Qiuwei Powder（Aucklandiae Radix，Gardeniae Fructus，Piperis Longi Fructus，etc.）.M ETHODS TLC was app1ied to identifying A.Radix，G.Fructus and P.Longi.HPLC ana1ysiswas performed on a 30℃thermostatic Inertsi1C18co1umn（150 mm× 4.6 mm，5μm），with themobi1e phase comprising ofmethano1-water（59∶41）at a f1ow rate of 1.0 mL/min，and the detection wave1engthswere set at225 nm for costuno1ide and dehydrocostus 1actone，and 343 nm for piperine.RESULTS The c1ear spots proved the specificity of TLC.Costuno1ide，dehydrocostus 1actone and piperine showed good 1inear re1ationshipswithin the ranges of 76.6-459.6 ng，123.6-741.6 ng and 130.62-738.72 ng. The average recoveries were 99.07%，98.87%and 99.24%with the RSDs of 1.02%，1.58%and 1.76%（n=6），respective1y.CONCLUSION With high precision and good reproducibi1ity，thismethod can be used for the qua1ity contro1of Ruda Qiwei Powder.

Ruda Qiwei Powder；Aucklandiae Radix；Gardeniae Fructus；Piperis Longi Fructus；costuno1ide；dehydrocostus 1actone；piperine

R927.2

A

1001-1528（2016）06-1285-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2016.06.017

2015-11-04

內(nèi)蒙古民族大學(xué)科研基金項(xiàng)目 （NMD1335）

玉 華（1979—），女，講師，從事蒙藥化學(xué)的教學(xué)與科研工作。Te1：15849553184，E-mai1：mengyiyuhua@126.com