徐曉桐， 程 松， 張小莉， 張滿生， 潘英妮， 劉曉秋*（.沈陽藥科大學(xué)中藥學(xué)院，遼寧沈陽006；.海南慧谷藥業(yè)有限公司，海南?？?703）

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楓蓼腸胃康片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

徐曉桐1， 程 松1， 張小莉1， 張滿生2， 潘英妮1， 劉曉秋1*
（1.沈陽藥科大學(xué)中藥學(xué)院，遼寧沈陽110016；2.海南慧谷藥業(yè)有限公司，海南?？?70311）

目的 建立楓蓼腸胃康片 （牛耳楓和辣蓼）的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 TLC法鑒定牛耳楓和辣蓼，HPLC法同時測定蘆丁和原兒茶酸的含有量。結(jié)果 TLC斑點(diǎn)清晰，陰性無干擾。蘆丁和原兒茶酸分別在4～128μg/mL（r=0.999 7）和2～64μg/mL（r=0.999 5）范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率分別為101.6%（RSD=2.1%）和98.7%（RSD= 2.0%）。結(jié)論 該方法簡便準(zhǔn)確，重復(fù)性好，適用于楓蓼腸胃康片的質(zhì)量控制。

楓蓼腸胃康片；牛耳楓；辣蓼；蘆?。辉瓋翰杷?/p>

楓蓼腸胃康片是由牛耳楓和辣蓼2味藥材加水煎煮，濃縮得浸膏，再加入蔗糖、糊精等輔料制成，用于治療急慢性腸胃炎［1］。方中牛耳楓為交讓木屬植物牛耳楓Daphniphyllum calycinum Benth.的全草，具有清熱解毒、活血舒筋的功效，用于感冒發(fā)熱，無名腫毒等；辣蓼為蓼屬植物水蓼Polygonum hydropiper Linn.的全草，有導(dǎo)滯化濕、祛風(fēng)止癢、化瘀解毒之功效，前者主要含黃酮、生物堿和酚酸類成分［2-5］，而后者主要含黃酮類成分［6］?，F(xiàn)有部頒標(biāo)準(zhǔn)中的鑒定方法規(guī)定了黃酮類成分的鹽酸-鎂粉反應(yīng)和生物堿類成分的沉淀反應(yīng)，羅杰等［7］以市售辣蓼為對照進(jìn)行鑒別，蘆丁為指標(biāo)進(jìn)行含有量測定，對楓蓼腸胃康片進(jìn)行了質(zhì)量控制，另有文獻(xiàn)報道采用HPLC法檢測了其中沒食子酸［8］或蘆?。?-11］含有量。經(jīng)與對照品比對發(fā)現(xiàn)，牛耳楓中的黃酮類成分主要是蘆丁，而酚酸類成分主要是原兒茶酸；辣蓼中的黃酮類成分 （如蘆?。┲饕植加谌~中，在莖中的含有量極少［12-13］，而目前應(yīng)用辣蓼以莖為主要部分，葉部分很少，故蘆丁在辣蓼中幾乎檢測不到。由于缺少對楓蓼腸胃康片全面控制的質(zhì)量研究，故本實(shí)驗(yàn)在對其化學(xué)成分進(jìn)行分析的基礎(chǔ)上，以牛耳楓為對照鑒別其中生物堿類成分，以沒食子酸為對照鑒別辣蓼，HPLC法同時測定蘆丁和原兒茶酸的含有量，可為有效控制該藥物的質(zhì)量提供依據(jù)。

1　材料

1.1儀器 LC-10AB高效液相色譜儀，包括SPD-10PDA檢測器（日本島津公司）；DZKW電子恒溫水浴鍋 （北京永光明醫(yī)療儀器廠）；AB135-S十萬分之一電子天平（瑞士Mett1er-To1edo公司）；SG3200H超聲清洗儀 （150 W、40 kHz，上海冠特超聲儀器有限公司）。

1.2試藥與樣品 硅膠GF254（青島海洋化工有限公司）；甲醇、甲酸為分析純 （天津市大茂化學(xué)試劑廠）；娃哈哈純凈水 （杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司）；乙腈為色譜純 （天津市康科德科技有限公司）。蘆丁 （批號 080-9303）、原兒茶酸 （批號9WLS-KM8J）、沒食子酸（批號SXE9-TD03）、牛耳楓（批號G2UG-VANF）對照品或藥材（中國食品藥品檢定研究院）。市售楓蓼腸胃康制劑，共9批 （由 3家企業(yè)生產(chǎn)，批號分別為 130806、130902、140104、130302、130601、131001、130803、131004、131101，規(guī)格分別為0.2、0.2、0.2、0.5、0.5、0.5、0.24、0.24、0.5 g/片）；3批自制品 （批號分別為140911、140915、140920，規(guī)格分別為0.3、0.5［批號140911有兩個規(guī)格］、0.3、0.3 g/片）。牛耳楓和辣蓼藥材 （海南慧谷藥業(yè)有限公司）。

2　方法與結(jié)果

2.1TLC鑒別

2.1.1牛耳楓

2.1.1.1供試品溶液的制備 取本品 （批號130806、130302、130803）研細(xì)，各稱取約0.5 g，置于具塞錐形瓶中，加1%鹽酸-甲醇溶液20 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘?jiān)铀? mL，濃氨調(diào)節(jié)pH值至11～12，乙酸乙酯振搖提取3次，每次5 mL，合并萃取液，揮干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，即得。

2.1.1.2對照藥材溶液的制備 稱取牛耳楓1 g，按 “2.1.1.1”項(xiàng)下方法制備，即得。

2.1.1.3陰性對照溶液的制備 按處方稱取辣蓼0.5 g，按制劑工藝制得牛耳楓陰性對照制劑，按“2.1.1.1”項(xiàng)下方法制備，即得。

2.1.1.4方法和結(jié)果 吸取對照藥材、供試品和陰性對照溶液各5μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液 （20∶5∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀溶液，結(jié)果見圖1A。由圖可知，供試品在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色斑點(diǎn)，陰性樣品無干擾。

2.1.2辣蓼

2.1.2.1供試品溶液的制備 取本品 （批號同“2.1.1.1”項(xiàng)）研細(xì)，各稱取約0.5 g，加甲醇10 mL，回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)酉←}酸溶液2 mL溶解，鹽酸飽和的乙醚振搖提取2次，每次10mL，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，即得。

2.1.2.2對照品溶液的制備 稱取沒食子酸適量，加甲醇制成每1 m L含0.5 mg對照品的溶液，即得。

2.1.2.3陰性對照溶液的制備 按處方稱取牛耳楓1 g，按制劑工藝制得辣蓼陰性對照制劑，按“2.1.2.1”項(xiàng)下方法制備，即得。

2.1.2.4方法和結(jié)果 分別吸取對照品、供試品和陰性對照溶液各5μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲酸乙酯-甲酸 （5∶4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液，結(jié)果見圖1B。由圖可知，供試品在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色斑點(diǎn)，陰性樣品無干擾。

圖1　TLC色譜圖Fig.1 TLC chromatogram s

2.2含有量測定

2.2.1色譜條件 Agi1ent C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5μm）；流動相為乙腈（A）-0.2%磷酸水溶液 （B），梯度洗脫 （0～25 min，85%～80%B；25～35 min，80%～60%B）；體積流量0.8 mL/min；檢測波長254 nm；柱溫室溫。

2.2.2混合對照品溶液的制備 精密稱取120℃下干燥至恒重的對照品蘆丁3.2 mg和原兒茶酸1.6 mg，置于10 mL量瓶中，甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取適量，流動相分別制成含蘆丁、原兒茶酸4、2，8、4，16、8，32、16，64、32，128、64μg/mL的溶液。

2.2.3供試品溶液的制備 取本品研細(xì)，精密稱取1.0 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，回流提取1 h，放冷，甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4牛耳楓陰性對照溶液的制備 按處方取辣蓼，按制備工藝制備陰性樣品，按 “2.2.3”項(xiàng)下方法制備，即得。

2.2.5陰性干擾實(shí)驗(yàn) 吸取混合對照品、供試品和陰性對照溶液各20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖2。由圖可知，陰性樣品不干擾測定。

圖2　HPLC色譜圖Fig.2 HPLC chromatogram s

2.2.6線性關(guān)系考察 在 “2.2.1”項(xiàng)色譜條件下，精密吸取上述混合對照品溶液各20μL，注入液相色譜儀測定。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo) （C）、峰面積為縱坐標(biāo) （A）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得蘆丁回歸方程A=2.869×104C+1.670×105，r=0.999 7，在4～128μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；原兒茶酸回歸方程A=4.192×104C+1.407×105，r= 0.999 5，在2～64μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.2.7精密度試驗(yàn) 取混合對照品溶液，在“2.2.1”項(xiàng)色譜條件下，精密吸取20μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測得蘆丁和原兒茶酸峰面積RSD分別為1.5%和1.4%，表明儀器精密度良好。

2.2.8穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液 （批號140911），于0、2、4、6、8和24 h精密吸取20μL，注入液相色譜儀，測得蘆丁和原兒茶酸峰面積RSD分別為1.2%和1.5%，表明溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.9重復(fù)性試驗(yàn) 取本品 （批號140911）研細(xì)，精密稱取6份，置于具塞錐形瓶中，按“2.2.2”和 “2.2.3”項(xiàng)下方法制備混合對照品和供試品溶液。各吸取20μL，注入液相色譜儀，測得蘆丁和原兒茶酸含有量RSD分別為2.2%和1.8%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.10回收率試驗(yàn) 取本品 （批號140911），研細(xì)，精密稱取6份，每份0.5 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，再分別精密加入0.802mg/mL蘆丁對照品溶液1 mL和1.601 mg/mL原兒茶酸對照品溶液1 mL，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。在 “2.2.1”項(xiàng)色譜條件下，吸取20μL，注入液相色譜儀中測定，結(jié)果見表1。2.2.11 含有量測定 對9批市售和3批自制制劑進(jìn)行測定，結(jié)果見表2。由表可知，蘆丁含有量為0.372～1.410 mg/片，而原兒茶酸為0.057～ 1.503 mg/片。同時，自制品中蘆丁含有量比市售低，但原兒茶酸比市售高。

表1　回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）Tab.1 Results of recovery tests（n=6）

表2　含有量測定結(jié)果Tab.2 Results of content determ ination

3　討論

牛耳楓主要含生物堿類、黃酮類和酚酸類成分［5，14］，其中生物堿是牛耳楓中的代表性成分，故本實(shí)驗(yàn)建立了以牛耳楓為對照的鑒別生物堿類成分的TLC法，專屬性強(qiáng)；辣蓼主要含鞣質(zhì)類、黃酮類和揮發(fā)油類成分，由于本方提取工藝是水煎，故未設(shè)計揮發(fā)性物質(zhì)的鑒別。沒食子酸是辣蓼中的主要成分，具有抗炎、抗突變、抗氧化、抗自由基等多種生物活性［15］，與本品功效一致，而且牛耳楓中不含此成分，具有專屬性，故本實(shí)驗(yàn)以沒食子酸為對照品，采用TLC法鑒別處方中的辣蓼。

本品主要功效是治療急性腸胃炎，方中牛耳楓是君藥，主要成分為黃酮類、酚酸類和生物堿類，而且黃酮類和酚酸類的抗炎、抗菌作用與本品功效一致。由于蘆丁是牛耳楓中主要的黃酮類成分，而原兒茶酸是牛耳楓中主要的酚酸類成分，故選擇兩者作為含有量測定指標(biāo)［16-17］。

文獻(xiàn) ［18-19］報道，辣蓼中含有蘆丁。由于藥材在采集晾干后，葉子很容易與莖分離，而且易碎，故使用莖較多。另外，所測定的蘆丁來自牛耳楓，而在辣蓼中很難檢測到，故鑒別蘆丁時無干擾。

楓蓼腸胃康片市售品與自制品比較，蘆丁含有量遠(yuǎn)高于自制品，但原兒茶酸含有量遠(yuǎn)低于后者，可能是藥材來源不同所致。另外，盡管蘆丁是牛耳楓的主要成分，但僅以其為指標(biāo)成分進(jìn)行測定時專屬性不強(qiáng)，易導(dǎo)致?lián)郊傩袨?。個別市售制劑中原兒茶酸含有量偏低，推測可能市售與自制制劑中被測成分的轉(zhuǎn)移率不同，或按照現(xiàn)有提取工藝，在提取液濃縮成浸膏時采用80℃減壓濃縮。實(shí)驗(yàn)表明，若浸膏置于80℃減壓干燥箱中3 h，原兒茶酸含有量從3.3 mg/g下降到1.5 mg/g，而且原兒茶酸在高溫下會分解，釋放出CO2，導(dǎo)致含有量降低。因此，制劑中間體浸膏的干燥溫度對主藥有效成分影響很大，應(yīng)注意制藥工程關(guān)鍵環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制。

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Quality standard for Fengliao Changweikang Tablets

XU Xiao-tong1， CHENG Song1， ZHANG Xiao-1i1， ZHANGMan-sheng2， PAN Ying-ni1， LIU Xiaoqiu1*

（1.School of Traditional Chinese Materia Medica，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China；2.Hainan Huigu Pharmaceutical Co.，Ltd.，Haikou 570311，China）

AIM To estab1ish the qua1ity standard for Feng1iao Changweikang Tab1ets（Daphniphyllum calycinum Benth.and Polygonum hydropiper Linn.）.METHODS TLC was used for identifying D.calycinum and P. hydropiper.HPLC was app1ied to simu1taneous1y determining the contents of rutin and protocatechuic acid.RESULTS TLC showed c1ear spots，free from interference from the negative reference.Rutin and protocatechuic acid disp1ayed good 1inear re1ationships within the ranges of 4-128μg/m L（r=0.999 7）and 2-64μg/mL（r=0.999 5）.The average recoverieswere101.6%（RSD=2.1%）and 98.7%（RSD=2.0%），respective1y. CONCLUSION This simp1e，accurate and reproducib1emethod qua1ifies for the qua1ity contro1of Feng1iao Changweikang Tab1ets.

Feng1iao Changweikang Tab1ets；Daphniphyllum calycinum Benth.；Polygonum hydropiper Linn.；rutin；protocatechuic acid

R927.2

A

1001-1528（2016）06-1289-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2016.06.018

2015-11-26

徐曉桐 （1992—），男，碩士生，從事中藥炮制研究。Te1：（024）23986469，E-mai1：18809896263@163.com

劉曉秋 （1964—），女，博士，教授，從事中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量控制研究。Te1：（024）23986469，E-mai1：1iuxiaoqiu3388@126.com