盧新　楊海珊　黃雁翔　魏飛力　陳德喜

100080 北京市海淀區(qū)婦幼保健院檢驗科(盧新、楊海珊)；100069 北京，首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院 北京市肝病研究所(黃雁翔、魏飛力、陳德喜)

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·技術(shù)方法·

希森美康試劑和羅氏試劑檢測乙肝表面抗原的比較

盧新楊海珊黃雁翔魏飛力陳德喜

100080 北京市海淀區(qū)婦幼保健院檢驗科(盧新、楊海珊)；100069 北京，首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院 北京市肝病研究所(黃雁翔、魏飛力、陳德喜)

目的 評估希森美康試劑定量檢測乙肝表面抗原(Hepatitis B surface antigen，HBsAg)結(jié)果的重復(fù)性和羅氏試劑的相關(guān)性。方法收集580例血清標(biāo)本，用希森美康HISCL HBsAg試劑盒和羅氏Elecsys HBsAg Ⅱquant試劑盒進行檢測，用統(tǒng)計學(xué)方法分析檢測結(jié)果的相關(guān)性，通過與羅氏試劑檢測結(jié)果比較，對希森美康試劑的特異性、敏感性和抗干擾物質(zhì)能力進行評估。結(jié)果希森美康試劑檢測HBsAg 的批內(nèi)變異系數(shù)(coefficients of variation，CV)<5.0%，批間CV≤5.5%。238例標(biāo)本用希森美康試劑重復(fù)檢測，符合率100%,其中174例HBsAg陽性標(biāo)本重復(fù)檢測 HBsAg結(jié)果相關(guān)性r=0.999，P<0.01。122例正常對照組兩種試劑檢測HBsAg均為陰性，符合率100%。287例HBsAg標(biāo)本陽性希森美康與羅氏試劑檢測HBsAg結(jié)果的相關(guān)性r=0.996，P<0.01。對含有可疑干擾物的標(biāo)本，兩種試劑檢測結(jié)果相近(孕婦和嬰兒r=0.992,P=0.000；各種病毒或梅毒感染r=0.995,P=0.000；抗病毒藥物r=0.994,P=0.000；HBV基因變異耐藥r=0.998,P=0.000；抗核抗體及類風(fēng)濕因子r=0.997，P=0.000)。結(jié)論希森美康試劑檢測HBsAg結(jié)果的重復(fù)性佳，與羅氏試劑具有良好的相關(guān)性。

【主題詞】肝炎表面抗原, 乙型;相關(guān)性;符合率

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是全世界的健康問題，據(jù)世界衛(wèi)生組織報道，全球約有3.5億慢性HBV感染者，其中因肝衰竭、肝硬化和肝細胞癌死亡的每年約有100萬人[1]。我國現(xiàn)有慢性乙型肝炎患者約2 000萬例，因此研究HBV檢測技術(shù)，評估HBV診斷試劑敏感性對改善HBV感染的診斷和治療尤為重要[2]。乙肝表面抗原(Hepatitis B surface antigen，HBsAg) 在血液中的水平能充分反映HBV感染復(fù)制的活躍程度，它的水平在監(jiān)測乙型肝炎藥物治療效果和預(yù)后判斷方面具有至關(guān)重要作用[3],為此，我們選取了德國羅氏HBsAgⅡquant試劑盒、應(yīng)用羅氏Cobas e601型全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)和日本希森美康HISCL HBsAg試劑盒、希森美康HISCL-2000i全自動免疫檢測系統(tǒng)，分別檢測HBsAg, 對結(jié)果進行比較分析。

1　對象與方法

1.1研究對象收集2013年9月至2014年12月在北京市海淀區(qū)婦幼保健院就診的住院和門診患者臨床檢測標(biāo)本358例，收集HBV疫苗接種者且HBsAb陽性血清標(biāo)本122例為健康對照,入選580例標(biāo)本均于-70℃冷凍保存；血清含量至少為1 ml以便于進行復(fù)檢；未經(jīng)反復(fù)凍融。該研究由首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)實施，所有患者或家屬均簽署書面知情同意書。

1.2主要試劑與儀器德國羅氏Elecsys HBsAgⅡQuant試劑盒(批號：173962),檢測下限0.05IU/ml，配套儀器為羅氏Cobas e601型全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)。日本希森美康HISCL HBsAg試劑盒(批號：ZS3001),檢測下限0.03IU/ml，配套儀器為HISCL-2000i全自動免疫檢測系統(tǒng)。

1.3方法

1.3.1檢測方法: 抽取患者靜脈血3.5 ml，離心取血清,首先用德國羅氏Elecsys HBsAgⅡQuant試劑盒，篩選出HBsAg<0.05 IU/ml及HBsAg>0.05 IU/ml(小于52000 IU/ml)標(biāo)本，再用日本希森美康HISCL HBsAg試劑盒進行HBsAg定量檢測，檢測結(jié)果不符合的標(biāo)本用第三方Abbott ARCHITECT i2000 發(fā)光免疫分析儀ARCHITECT HBsAg試劑(美國雅培有限公司)檢測，檢測下限0.05 IU/ml，具體操作和結(jié)果判定參照說明書進行，本課題僅作為科學(xué)研究，不牽涉利益問題。

1.3.2分組方法: 580例分成7個組：第1組：74例有乙肝病史，HBV DNA>20 IU/ml(羅氏乙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒)且未用抗病毒藥治療的患者標(biāo)本；第2組：104例有乙肝病史，經(jīng)抗病毒治療1年以上，HBV DNA檢測不到(羅氏乙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒)且無HBV變異耐藥；第3組：有乙肝病史，HBV DNA>20 IU/ml，用抗病毒藥治療的患者出現(xiàn)不同HBV基因型變異耐藥標(biāo)本40例，其中HBV基因A型 5例、B型15例、C型15例、D型5例；第4組：孕婦及幼兒標(biāo)本60例；第5組：各種病毒或梅毒感染標(biāo)本140例：CMV(巨細胞病毒)抗體陽性20例、EBV(EB病毒)抗體陽性20例、HSV(單純皰疹病毒)抗體陽性20例、風(fēng)疹抗體陽性20人、抗-HCV(丙肝病毒)陽性20例、抗-HIV(艾滋病毒)陽性20例、梅毒抗體陽性20例；第6組：ANA(抗核抗體)或RF(類風(fēng)濕因子)陽性標(biāo)本40例：ANA陽性20例、RF陽性20例。正常對照組122例：HBV疫苗接種者且HBsAb陽性血清標(biāo)本。各組標(biāo)本用兩種試劑檢測HBsAg，評價兩種試劑檢測結(jié)果的相關(guān)性。對于超出試劑測定范圍的標(biāo)本，羅氏Cobas e601儀器進行自動稀釋，HISCL-2000i儀器通過人工稀釋，計算最終濃度。

1.3.3希森美康檢測系統(tǒng)精密度驗證方法:采用希森美康公司的HBsAg定量試劑對HBsAg中、低濃度質(zhì)控品:希森美康株式會社HBsAg Viratrol Level 1[VL1，1.98(1.58-2.38)IU/ml]和Viratrol Level 2[VL2，11.21(8.97-13.45) IU/ml]分別進行批內(nèi)精密度檢測：同一批次內(nèi)連續(xù)檢測20次，計算變異系數(shù)( coefficient of variation，CV)值；批間精密度檢測：1 d 1次連續(xù)20 d檢測，計算CV值。

1.3.4希森美康試劑對不同患者標(biāo)本重復(fù)性驗證方法: 第1組、第2組和第4組共238例標(biāo)本用同一批號希森美康試劑檢測重復(fù)檢測，重復(fù)檢測結(jié)果進行相關(guān)性分析。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS19．0統(tǒng)計學(xué)軟件。兩種試劑檢測的HBsAg定量值取自然對數(shù)后進行統(tǒng)計分析，希森美康檢測系統(tǒng)精密度驗證質(zhì)控品檢測結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，并計算CV值。對各組測定結(jié)果進行Pearson相關(guān)性分析，計算相關(guān)系數(shù)，顯著性檢驗為雙側(cè)檢驗，設(shè)置顯著性水平為0.05。

2　結(jié)果

2.1兩種試劑檢測HBsAg結(jié)果122例正常對照組兩種試劑檢測HBsAg均為陰性。580例Elecsys

表1　兩種試劑檢測HBsAg結(jié)果(n=580)

HBsAgⅡQuant試劑檢測陽性率為49.48%，HISCLHBsAg試劑檢測陽性率為50.34%；兩種試劑檢測陽性符合率為100%；陰性符合率為98.29%；臨床總體符合率為99.14%，見表1。兩種試劑檢測287例HBsAg共陽性標(biāo)本結(jié)果相關(guān)性：r=0.994,P=0.000。兩種試劑檢測287例HBsAg共陽性標(biāo)本結(jié)果差值：R2=0.201。不符合標(biāo)本5例：其中第2組4例，檢出值分別為0.05 IU/ml、0.05 IU/ml、0.04 IU/ml、0.03IU/ml，均為乙肝感染者治療恢復(fù)期標(biāo)本；第6組1例，0.04 IU/ml，HBeAb陽性，HBcAb陽性，ANA陽性。5例不符合樣本分別用上述兩種試劑重復(fù)檢測，結(jié)果同前。用第三方雅培HBsAg試劑檢測結(jié)果HBsAg<0.05 IU/ml與羅氏試劑檢測相同。

2.2兩種試劑定量檢測HBsAg相關(guān)性分析第1組74例標(biāo)本羅氏試劑檢測出HBsAg>0.05 IU/ml 74例，希森美康試劑檢測出HBsAg > 0.03 IU/ml 74例；兩者反應(yīng)性均相符，檢測結(jié)果進行雙側(cè)Pearson相關(guān)性分析，相關(guān)系數(shù)r=0.997,P=0.000，見圖1a。對兩種試劑檢驗的差值分析結(jié)果顯示，R2=0.001，圖1b為差值分布，圖中結(jié)果顯示差值均勻分布于坐標(biāo)軸兩側(cè)，離散程度較小。第2組羅氏試劑檢測出HBsAg>0.05 IU/ml 64例，希森美康試劑檢測出HBsAg>0.03 IU/ml 68例；4例不符合標(biāo)本詳見結(jié)果1。對64例兩種試劑檢測均陽性結(jié)果進行相關(guān)性分析，相關(guān)系數(shù)r=0.994,P=0.000，見圖1c。對兩種試劑檢驗結(jié)果進行差值分析，R2=0219，差值分布，見圖1 d。第3組40例兩種試劑檢測結(jié)果均為陽性，兩種試劑檢測結(jié)果相關(guān)性：r=0.998,P=0.000,見圖1e。兩種試劑檢測結(jié)果差值比較：R2=0.056，見圖1f。第4組共30例幼兒、30例孕婦標(biāo)本，分別用兩種試劑檢測HBsAg結(jié)果，10例幼兒，22例孕婦陽性，符合率100%。兩種試劑檢測HBsAg結(jié)果相關(guān)性:r=0.992,P=0.000，見圖1g。兩種試劑檢測結(jié)果差值比較：R2=0.003,見圖1 h。第5組CMV抗體陽性20例、EBV抗體陽性20例、HSV抗體陽性20例、風(fēng)疹抗體陽性20人、抗-HCV陽性20例、抗-HIV陽性20例、梅毒抗體陽性20例、共140例，用兩種試劑檢測，均檢出HBsAg陽性49例，49例HBsAg陽性結(jié)果的相關(guān)性：r=0.995,P=0.000，見圖1i。49例兩種試劑檢測HBsAg陽性結(jié)果差值分析：R2=0.146，見圖1j。第6組ANA抗體陽性20例、RF陽性20例，羅氏試劑檢測出HBsAg>0.05IU/ml 28例，希森美康試劑檢測出HBsAg > 0.03IU/ml 29例；1例不符合標(biāo)本詳見結(jié)果1。28例兩種試劑檢測均陽性結(jié)果相關(guān)性：r=0.997，P=0.000，見圖1k。兩種試劑檢測均陽性結(jié)果差值分析，R2=0.010，見圖1l。

相關(guān)性：第1組(a)，第2組(c)，第3組(e)，第4組(g)，第5組(i)，第6組(k);差值分析：第1組(b)，第2組(d)，第3組(f)，第4組(h)，第5組(j)，第6組(l)圖1　兩種試劑檢測HBsAg相關(guān)性及差值分析Correlation:Group 1(a),Group 2(c),Group 3(e),Group 4(g),Group 5(i),Group 6(k);Difference:Group 1(b),Group 2(d),Group 3(f),Group 4(h),Group 5(j),Group 6(l)Fig.1　The correlation and difference between the detection results of HBsAg with two reagents

2.3希森美康檢測系統(tǒng)精密度驗證結(jié)果希森美康檢測系統(tǒng)檢測HBsAg質(zhì)控品結(jié)果見表2。

表2　希森美康試劑HBsAg質(zhì)控品檢測結(jié)果

按照廠家提供的CV<10%作為重復(fù)性的最高可接受限，本次實驗CV≤5.5%，檢測系統(tǒng)批內(nèi)精密度，批間精密度可接受。

2.4希森美康試劑對不同患者標(biāo)本重復(fù)性驗證結(jié)果第1組、第2組、第4組共238例標(biāo)本用希森美康試劑重復(fù)檢測，陰陽性符合率100%。3組共檢出174例陽性標(biāo)本,重復(fù)檢測結(jié)果相關(guān)性r=0.999，P<0.01。對重復(fù)檢驗結(jié)果進行差值分析，R2=0.028。

3　討論

近年來，血清HBsAg 定量檢測技術(shù)快速發(fā)展，其中化學(xué)發(fā)光法因其操作簡單、檢測速度快且穩(wěn)定、其線性檢測范圍和敏感性顯著高于傳統(tǒng)的ELISA法而且自動化程度高等優(yōu)點，已漸成為HBsAg常用檢測方法[4]。 HBsAg檢測不僅用于HBV感染篩查，而且對治療效果判定也很重要，因此，我們選取了靈敏度和特異度都較高的HBsAg羅氏試劑與希森美康HBsAg試劑進行檢測靈敏度和特異性分析，比較兩種同屬化學(xué)發(fā)光法但檢測方法仍有差異的檢測試劑的臨床應(yīng)用性能。在方法學(xué)上，希森美康試劑是采用包被抗HBs單克隆抗體微粒子進行化學(xué)發(fā)光免疫測定，而羅氏試劑是采用包被抗HBsAg單克隆抗體進行電化學(xué)發(fā)光免疫測定。最后，以英國國家生物制品檢定所NIBSC標(biāo)準(zhǔn)(世界衛(wèi)生組織國際標(biāo)準(zhǔn))對其定量標(biāo)準(zhǔn)進行溯源，因方法學(xué)類似、因此相同溯源標(biāo)準(zhǔn)是兩種檢測結(jié)果具有相關(guān)性的基礎(chǔ)。

羅氏HBsAg-quant試劑檢測出HBsAg<0.05 IU/ml (陰性)293例中用希森美康試劑檢測出HBsAg<0.03 IU/ml(陰性)288例，其中有5例不符合。分析原因：①兩種試劑檢測下限不一致，HBsAg濃度低于羅氏檢測方法的靈敏度；②兩種檢測試劑包被的抗體不一樣，羅氏檢測方法所使用的檢測抗體對該標(biāo)本抗原缺乏特異性反應(yīng)。

本研究中同一標(biāo)本不論普通標(biāo)本還是服用抗病毒藥物患者標(biāo)本、孕婦及嬰兒標(biāo)本，希森美康HBsAg定量試劑重復(fù)檢測結(jié)果相關(guān)性均很好，差值離散程度較小，沒有統(tǒng)計學(xué)意義，從精密度水平來看，希森美康HBsAg定量試劑批內(nèi)和批間CV值均約為5%，檢測系統(tǒng)批內(nèi)精密度，批間精密度可接受，能滿足臨床使用的需要。

兩種試劑檢測HBsAg陽性標(biāo)本：從普通標(biāo)本到服用抗病毒藥物患者標(biāo)本、不同HBV基因型變異耐藥標(biāo)本、孕婦及嬰兒標(biāo)本、感染其他病毒或梅毒標(biāo)本、抗核抗體或類風(fēng)濕因子陽性標(biāo)本、其相關(guān)性均很好，同一標(biāo)本兩種試劑檢測結(jié)果差值離散程度較小，差值沒有統(tǒng)計學(xué)意義，提示兩種試劑的檢測結(jié)果之間具有良好的一致性。

兩種試劑對含有潛在干擾物質(zhì)的標(biāo)本檢測結(jié)果進行比較顯示，兩種試劑對孕婦、于抗病毒藥物、乙肝疫苗接種后、其他病毒(CMV，EBV，HSV，風(fēng)疹病毒，HCV，HIV)及梅毒感染、嬰兒、抗核抗體或類風(fēng)濕因子陽性血清，都具備相似的抗干擾能力。

[1]中華醫(yī)學(xué)會肝病分會，中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會．慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)[J]．中華肝臟病雜志，2011，19(1)：13-24．doi: 10.3760/cma.j.issn.1007-3418.2011.01.007.

[2]孫彬, 李康, 吳純,等. 羅氏Cobas e601與雅培Architect i2000檢測乙肝表面抗原的比較[J]. 國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志, 2014,35(20):2823-2824.doi:10.3969/j.issn.1673-4130.2014.20.45.

[3]盛歡, 胡曉波, 許潔. 兩種方法檢測HBsAg定量結(jié)果的臨床互認(rèn)研究[J]. 檢驗醫(yī)學(xué),2013,28(9):828-834.doi:10.3969/j.issn.1673-8640.2013.09.023.

[4]Brunetto MR, Moriconi F, Bonino F, et al. Hepatitis B virus surface antigen levels: A guide to sustained response to peginterferon alfa-2a in HBeAg-negative chronic hepatitis B [J]. Hepatology, 2009, 49(4):1141-1150. doi: 10.1002/hep.22760.

Comparison of HBsAg detection results between HISCL kits and Roche kits

LuXin,YangHaishan,HuangYanxiang,WeiFeili,ChenDexi

ClinicalLaboratoryofHaidianMaternal&ChildHealthHospital,Beijing100080,China(LuX,YangHS);CapitalMedicalUniversityBeijingYouanHospital,BeijingHepatologyInstitute,Beijing100069,China(HuangYX,WeiFL,ChenDX.)

ChenDexi,Email:dexichen@ccmu.edu.cn

ObjectiveTo evaluate the repeatability of HISCL HBsAg kits and the correlation comparing with Roche kits. MethodsA total of 580 serum samples were collected, HBsAg levels were detected by HISCL HBsAg kits and Elecsys HBsAgⅡQuant kits, respectively．Data were analyzed, and the specificity, sensitivity and anti-jamming capability of HISCL kits were assessed by comparing with Roche kits．Results The intra-assay coefficients of variation (CV) of HISCL HBsAg kits was<5.0%, and Inter-assayCVwas≤5.5%. 238 samples were repeated testing with HISCL HBsAg kits and the coincidence was 100%. Within them, the repeating detection results of 174 positive samples by HISCL HBsAg kits had agood correlation (r=0.999,P<0.01). 122 cases of normal control were detected negative by both kits, and the coincidence was 100%. The correlation of HBsAg results from 287 HBsAg positive samples detected by the two kits wasr=0.996,P<0.01. For the samples containing suspicious interferences, the results of the two kits were similar( pregnant women and infantsr=0.992,P=0.000; antiviral drugsr=0.994,P=0.000; various virus or syphilisr=0.995,P=0.000; HBV gene mutationr=0.998,P=0.000; antinuclear antibodies and rheumatoid factorr=0.997，P=0.000). ConclusionsHISCL HBsAg kits have a good repeatability and a excellent correlation with Elecsys HBsAgⅡQuant kits.

Hepatitis B surface antigens; Correlation; Coincidence

陳德喜， Email: dexichen@ccmu.edu.cn

10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2016.04.017

2016-02-28)