薛海波　馬麗麗　林賢凡　吳金明

1.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院消化內(nèi)一科，浙江溫州325000；2.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，浙江溫州325000

干擾素治療對慢性乙肝患者CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平的影響研究

薛海波1馬麗麗2林賢凡1吳金明1

1.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院消化內(nèi)一科，浙江溫州325000；2.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，浙江溫州325000

目的探討慢性乙型肝炎患者在干擾素抗病毒治療中外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的變化及臨床意義。方法選擇2013年1月～2015年1月在我院行干擾素抗病毒治療的慢性乙肝患者60例及同時(shí)期體檢的健康成人20例，分別于治療前、治療后第12、24、36、48周及停藥后24周收集患者的外周血，比較外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）、血清HBV-DNA載量以及谷氨酸-丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）的變化。結(jié)果治療前，完全應(yīng)答組、部分應(yīng)答組以及無應(yīng)答組外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例、ALT含量以及HBV-DNA載量組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但均顯著高于健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；治療后，完全應(yīng)答組和部分應(yīng)答組患者各時(shí)間段Tregs比例均較治療前顯著下降（P＜0.05）；在治療及停藥期間，完全應(yīng)答組和部分應(yīng)答組患者的Tregs比例一直在下降；治療期間HBV-DNA轉(zhuǎn)陰患者的Tregs比例逐步下降且顯著低于未轉(zhuǎn)陰的患者（P＜0.05）；治療期間血清學(xué)轉(zhuǎn)換的患者Tregs比例逐步下降且顯著低于未轉(zhuǎn)換的患者（P＜0.05）。結(jié)論慢性乙肝患者在接受干擾素抗病毒治療期間及治療后，其外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例下降，且越早出現(xiàn)下降的患者其治療后血清轉(zhuǎn)陰的可能性越大。

乙型肝炎；干擾素；調(diào)節(jié)性T細(xì)胞；外周血

［Abstract］Objective To investigate the changes and clinical significance of peripheral blood regulatory T cells in chronic hepatitis B patients treated with interferon.Methods 60 patients with chronic hepatitis B who were treated with interferon and 20 healthy adults were selected from January 2013 to January 2015 in our hospital.Peripheral blood was collected before treatment and 12th weeks，24th weeks，36th weeks，48th weeks after treatment and 24 weeks after withdrawal，the changes of CD4+CD25+regulatory T cells（Tregs），serum HBV-DNA and glutamate pyruvate aminotransferase（ALT）in peripheral blood were compared.Results There were no significant differences in the proportion of CD4+CD25+regulatory T cells，ALT content and HBV-DNA content between complete response group，partial response group and non response group before treatment（P＞0.05），but they were significantly higher than those in healthy control group，there were statistically significant differences between the groups（P＜0.05）；The proportion of Tregs in the complete response group and the partial response group after treatment were significantly decreased compared with that before treatment（P＜0.05）；The proportion of Tregs in patients of complete response group and partial response group had been declining during the treatment and withdrawal；Tregs ratio in patients with HBV-DNA negative were gradually decreased and were significantly lower than that of non negative patients during the treatment（P＜0.05）；Tregs proportion of seroconversion in converted patients during treatment were gradually declined and were significantly lower than nonconverted patients（P＜0.05）.Conclusion The peripheral regulatory T cells in patients with chronic hepatitis B by interferons antiviral treatment was decreased during treatment and after treatment，and the sooner the peripheral regulatory T cells declined the greater possibility of seroconversion after treatment.［Key words］Hepatitis B；Interferon；Regulatory T cells；Peripheral

T淋巴細(xì)胞是來源于骨髓的多能干細(xì)胞（胚胎期則來源于卵黃囊和肝）。在人體胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干細(xì)胞或前T細(xì)胞遷移到胸腺內(nèi)，在胸腺激素的誘導(dǎo)下分化成熟，成為具有免疫活性的T細(xì)胞。而外周血調(diào)節(jié)T細(xì)胞是近年來新發(fā)現(xiàn)的與人體自身免疫功能相關(guān)的細(xì)胞，其在慢性乙型肝炎患者體內(nèi)數(shù)目明顯增加。本文研究慢性乙型肝炎患者在進(jìn)行干擾素抗病毒治療中其外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的變化及其臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選擇2013年1月～2015年1月在我院進(jìn)行干擾素抗病毒治療的60例慢性乙肝患者以及同時(shí)期進(jìn)行體檢的20例健康成人作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)［2］：符合慢性乙型肝炎感染診斷標(biāo)準(zhǔn)［乙型肝炎HBsAg和（或）HBV-DNA陽性6個(gè)月以上《慢性乙型肝炎防治指南（2015年版）》］，臨床確診為慢性乙型肝炎；在參與本次研究前半年內(nèi)未通過其他藥物進(jìn)行抗病毒及免疫調(diào)節(jié)治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：臨床資料不全；合并腫瘤、肝腎功能不全、自身免疫疾病、其他肝炎以及感染HIV者。分組標(biāo)準(zhǔn)：HBeAg、HBV-DNA陰轉(zhuǎn)、ALT復(fù)常的患者為完全應(yīng)答組；HBeAg、HBV-DNA和ALT 3項(xiàng)指標(biāo)中的1或2項(xiàng)達(dá)標(biāo)為部分應(yīng)答組；HBeAg、HBV-DNA和ALT均未達(dá)標(biāo)為無應(yīng)答組。所有患者均對本研究內(nèi)容知曉，并簽署知情同意書?；颊叩男詣e、年齡組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

1.2方法

所有患者均在清晨空腹的條件下取全血，通過流式細(xì)胞儀（FC-500，美國COULTER公司）測定CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞頻率；采用全自動(dòng)生化分析儀（AU5821，日本Beckman Coulter公司）測定ALT；采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR測定HBV-DNA，具體檢測方法參照潘修成等［1］的研究。其中以血清ALT＜40 U/L為正常。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗(yàn)或方差分析，計(jì)數(shù)資料以［n（%）］形式表示。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1治療前各組臨床觀察指標(biāo)比較

完全應(yīng)答組、部分應(yīng)答組以及無應(yīng)答組在進(jìn)行干擾素抗病毒治療前外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例、ALT含量以及HBV-DNA組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但均顯著高于健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2　治療前各組臨床觀察指標(biāo)比較

2.2各時(shí)間段慢性乙肝患者Tregs比例比較

治療12周后，完全應(yīng)答組患者的Tregs比例［（4.16± 0.62）%］顯著低于部分應(yīng)答組患者［（4.98±0.63）%］和無應(yīng)答組患者［（6.05±0.44）%］（P＜0.05），且部分應(yīng)答組患者顯著低于無應(yīng)答組患者（P＜0.05）；治療24周后，完全應(yīng)答組患者Tregs比例［（3.88±0.71）%］顯著低于部分應(yīng)答組患者［（4.51±0.52）%］和無應(yīng)答組患者［（6.05±0.44）%］（P＜0.05），且部分應(yīng)答組患者顯著低于無應(yīng)答組患者（P＜0.05）；治療36周后，完全應(yīng)答組患者和部分應(yīng)答組患者Tregs比例分別為（3.71±0.52）%和（4.11±0.63）%，均顯著低于無應(yīng)答組患者［（5.61± 0.42）%］（P＜0.05）；治療48周后，完全應(yīng)答組患者和部分應(yīng)答組患者Tregs比例分別為（3.44+0.37）%和（4.01+0.57）%，均顯著低于無應(yīng)答組患者［（5.22±0.58）%］（P＜0.05）；停止干擾素治療24周后，完全應(yīng)答組患者Tregs比例［（3.07±0.42）%］顯著低于部分應(yīng)答組患者［（3.82±0.47）%］和無應(yīng)答組患者［（5.31±0.47）%］（P＜0.05），且部分應(yīng)答組患者顯著低于無應(yīng)答組患者（P＜0.05）。此外，在使用干擾素治療期間以及干擾素停藥24周后，完全應(yīng)答組及部分應(yīng)答組患者各時(shí)間段Tregs比例均顯著低于治療前（P＜0.05）。見表3。

表1　患者一般資料

2.3各時(shí)間段慢性乙肝患者ALT達(dá)標(biāo)情況比較

使用干擾素治療后12、24、36、48周以及停止干擾素治療24周后，完全應(yīng)答組患者ALT達(dá)標(biāo)患者比例分別為77.78%、100.00%、100.00%、100.00%和44.44%；部分應(yīng)答組患者ALT達(dá)標(biāo)患者比例分別為75.00%、83.33%、83.33%、83.33%和50.00%。見表4。

2.4各時(shí)間段慢性乙肝患者HBV-DNA低于500拷貝數(shù)/mL患者比例

使用干擾素治療后12、24、36、48周以及停止干擾素治療24周后，完全應(yīng)答組患者HBV-DNA低于500拷貝數(shù)/mL的患者比例分別為44.44%、100.00%、100.00%、100.00%和44.44%；部分應(yīng)答組患者ALT達(dá)標(biāo)患者比例分別為25.00%、58.33%、58.33%、75.00%和25.00%。見表5。

2.5各時(shí)間段HBV-DNA轉(zhuǎn)陰與未轉(zhuǎn)陰、血清學(xué)轉(zhuǎn)換與未轉(zhuǎn)換患者Tregs比較

HBV-DNA轉(zhuǎn)陰組患者使用干擾素治療后及停藥后Tregs比例逐步下降且均顯著低于未轉(zhuǎn)陰組患者（P＜0.05）；血清學(xué)轉(zhuǎn)換組患者干擾素治療后及停藥后Tregs比例逐步下降且均顯著低于未轉(zhuǎn)換組患者（P＜0.05）。見表6。

表3　各時(shí)間段慢性乙肝患者Tregs比例比較（x±s，%）

表4　各時(shí)間段慢性乙肝患者ALT達(dá)標(biāo)情況比較［n（%）］

表5　各時(shí)間段慢性乙肝患者HBV-DNA低于500拷貝數(shù)/mL患者比例［n（%）］

表6　各時(shí)間段HBV-DNA轉(zhuǎn)陰與未轉(zhuǎn)陰、血清學(xué)轉(zhuǎn)換與未轉(zhuǎn)換患者Tregs比較（x±s）

3　討論

調(diào)節(jié)性T細(xì)胞［3］（regulatory cells，Tregs）是一類控制體內(nèi)自身免疫反應(yīng)性的T細(xì)胞亞群，早期亦稱做suppressor T cells。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞可分為天然產(chǎn)生的自然調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（n T-regs）和誘導(dǎo)產(chǎn)生的適應(yīng)性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（a T-regs或i T-regs），如Th3、Tr1，另外尚有CD8 Treg、NKT細(xì)胞等，與自身免疫性疾病的發(fā)生關(guān)系密切，其異常表達(dá)可導(dǎo)致自身免疫性疾病。

CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞［4-6］是一類最近才被認(rèn)識的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，起源于胸腺，發(fā)揮抑制性免疫調(diào)節(jié)作用，持續(xù)性表達(dá)IL-2Rα鏈（CD25），具有免疫抑制性和免疫無能性兩大特征，在自身免疫性疾病的治療、腫瘤的免疫治療以及移植耐受的誘導(dǎo)等方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。程翔等［7］人研究表明，慢性心力衰竭患者外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例較正常人低，并且與慢性心力衰竭患者心功能存在相關(guān)性，說明CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例下降不僅與慢性心力衰竭發(fā)病有關(guān)，還與其疾病發(fā)展有關(guān)。此外，眾多研究還表明［8-10］，CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與紫癜［11］、腫瘤免疫逃逸［12］以及糖尿病合并肺部感染等有關(guān)［13］。這主要是由于CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是一種免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，其表達(dá)的多少將直接影響到機(jī)體的免疫水平，表達(dá)異常時(shí)會造成機(jī)體出現(xiàn)疾?。?4-16］。Tregs不僅與疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，還與疾病的治療有密切聯(lián)系。李浩等［17，18］研究發(fā)現(xiàn)，對于慢性乙型肝炎患者進(jìn)行干擾素抗病毒治療期間，隨著HBV-DNA載量的下降，Tregs比例也隨之下調(diào)。黃燕等［19，20］研究發(fā)現(xiàn)，慢性乙型肝炎患者體內(nèi)外周血CD4+CD25+Tregs細(xì)胞升高，進(jìn)行干擾素抗病毒治療后其比例下調(diào)。

本文研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)答慢性乙型肝炎感染患者進(jìn)行干擾素抗病毒治療，Tregs比例也隨之下調(diào)，且越早出現(xiàn)下降的患者治療后血清轉(zhuǎn)陰可能越大，而無應(yīng)答慢性乙型肝炎感染患者的Tregs比例無顯著變化。

［1］潘修成，楊帆，陳明，等.替比夫定對慢性乙型肝炎患者外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化的影響及其臨床意義［J］.中華肝臟病雜志，2008，16（12）：885-888.

［2］中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會.慢性乙型肝炎防治指南（2015年版）［J］.中華實(shí)驗(yàn)和臨床感染病雜志（電子版），2015，（5）：1-19.

［3］史洋溢.Th17細(xì)胞/Treg細(xì)胞失衡在兒童過敏性紫癜發(fā)病機(jī)制中的作用［J］.中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2015，23（5）：1391-1396.

［4］鄭佳，王強(qiáng).Th17細(xì)胞/調(diào)節(jié)性T細(xì)胞失衡在過敏性紫癜發(fā)病機(jī)制中的作用［J］.中國小兒血液與腫瘤雜志，2014，（5）：274-277.

［5］王勝軍，許化溪，楊勝利.CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞［J］.中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào)，2005，27（1）：61-65.

［6］鄧曉杰，朱洪志，吳尚潔.哮喘患者外周血Rho激酶及CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞測定［J］.中南大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2014，39（6）：577-581.

［7］程翔，廖玉華，鄭金娥，等.慢性心力衰竭患者CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞檢測及意義［J］.臨床心血管病雜志，2006，22（3）：145-147.

［8］李娜，邊紅軍，張娟，等.慢性心力衰竭患者外周血中Th17及Treg細(xì)胞的檢測及意義［J］.山東大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2010，48（6）：100-103.

［9］游楊楊，吳繼雄.慢性心力衰竭患者外周血CD4+CD25+CDlow127調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的變化［J］.山東醫(yī)藥雜志，2012，52（5）：55-57.

［10］潘珍珍，李羚，郭赟，等.CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與IL-33在兒童哮喘發(fā)病機(jī)制中的作用［J］.中國當(dāng)代兒科雜志，2014，（12）：1211-1214.

［11］李平，王小康，顧園，等.CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在乳腺癌組織中的變化及其意義［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2015，32（10）：113-115.

［12］呂學(xué)文，劉仿，伍昌林.Foxp3基因表達(dá)與CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在急性特發(fā)性血小板減少性紫癜發(fā)病中的作用［J］.中華實(shí)用兒科臨床雜志，2007，22（3）：188-190.

［13］王曉華，孫巍，劉卓剛.CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在血液病中的研究進(jìn)展［J］.白血?。毫馨土?，2014，（4）：250-252.

［14］王慧，潘科，夏建川.IDO和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在腫瘤免疫逃逸中相互作用的研究進(jìn)展［J］.中國癌癥雜志，2014，28（2）：221-224.

［15］溫鵬強(qiáng)，趙俊山，齊中香，等.急性期川崎病患兒CD4+CD25highFOXP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞亞群改變及意義［J］.中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2015，19（2）：110-112.

［16］李洪，李家萱，張志哲，等.糖尿病合并肺部感染血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的變化及意義［J］.廣西醫(yī)學(xué)，2011，33（2）：162-164.

［17］李浩，徐洪濤，邢同京，等.干擾素治療對慢性乙型肝炎患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)的影響［J］.江蘇醫(yī)藥，2011，37（11）：1324-1326.

［18］Gubser C，Schmaler M，Rossi SW，et al.Monoclonal regulatory T cells provide insights into T cell suppression［J］. Sci Rep，2016，23（6）：25758.

［19］黃燕，譚德明，彭敏源.慢性乙型肝炎患者抗病毒治療前后外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的變化［J］.中國感染控制雜志，2009，8（6）：380-383.

［20］鄧茜，肖影群，鄒正宇，等.慢性乙型肝炎患者抗病毒治療前后CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的變化［J］.廣東醫(yī)學(xué)，2012，33（9）：132-134.

Effect of CD4+CD25+regulatory T cell level of chronic hepatitis B during interferon theraping

XUE Haibo1MA Lili2LIN Xianfan1WU Jinming1
1.The First Department of Gastroenterology，the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University，Wenzhou 325000，China；2.Department of Rheumatology and Immunology，the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical U-niversity，Wenzhou325000，China

R512.62

A

1673-9701（2016）24-0012-04

2016-04-13）

浙江省自然科學(xué)基金（LY12H03003）