張 華，李永興，陳 華，樂(lè) 嫣，項(xiàng)明潔

（上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院盧灣分院放免檢驗(yàn)科，上海 200020）

外周維生素D結(jié)合蛋白、25-羥維生素 D和原發(fā)性肝細(xì)胞癌風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系

張 華，李永興，陳 華，樂(lè) 嫣，項(xiàng)明潔

（上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院盧灣分院放免檢驗(yàn)科，上海 200020）

目的 25-羥維生素D［25（OH）D）］已被證明與原發(fā)性肝細(xì)胞癌（HCC）的發(fā)生有關(guān)，但對(duì)于維生素 D結(jié)合蛋白（VDBP）在原發(fā)性肝細(xì)胞癌發(fā)生中的作用卻知之甚少。作者檢測(cè)了25（OH）D的主要載體維生素 D結(jié)合蛋白（VDBP），研究其在25（OH）D與原發(fā)性肝細(xì)胞癌風(fēng)險(xiǎn)中的作用。方法 收集146例HCC患者和249名對(duì)照組的血樣，檢測(cè)血漿VDBP和25（OH）D的濃度。采用 logistic回歸計(jì)算比值比（OR）和95%可信區(qū)間（CI），評(píng)估外周血 VDBP、25（OH）D與原發(fā)性肝細(xì)胞癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系。結(jié)果 血漿VDBP濃度與HCC風(fēng)險(xiǎn)之間呈負(fù)相關(guān)；血漿25（OH）D與HCC風(fēng)險(xiǎn)呈正相關(guān)。只有在25（OH）D濃度高于中位數(shù)的人群中，VDBP升高顯著，降低了HCC風(fēng)險(xiǎn)。在VDBP濃度低于中位數(shù)的人群中，高濃度的25（OH）D顯著提高了HCC風(fēng)險(xiǎn)。結(jié)論 高濃度的 VDBP可結(jié)合更多的25（OH）D，減少游離25（OH）D的生物利用度，同時(shí)檢測(cè) VDBP和25（OH）D水平對(duì)于確定維生素D與 HCC風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性非常重要。

25-羥維生素； 維生素 D結(jié)合蛋白； 原發(fā)性肝細(xì)胞癌

原發(fā)性肝細(xì)胞癌 （hepatocellular carcinoma，HCC）是世界上常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，每年新發(fā)病例74萬(wàn)例，其中約 54%發(fā)生在中國(guó)。我國(guó)每年有37萬(wàn)人死于肝癌，居因惡性腫瘤死亡的第二位［1］。由于原發(fā)性肝細(xì)胞癌的高發(fā)性和高危害性，對(duì)原發(fā)性肝細(xì)胞癌的發(fā)生和發(fā)展的研究一直是國(guó)內(nèi)外的研究熱點(diǎn)。維生素D（vitamin D，VD）是一類對(duì)骨骼、牙齒和肌肉健康十分重要的脂溶性維生素。研究發(fā)現(xiàn)，VD對(duì)骨的結(jié)構(gòu)和硬度的維持有重要作用，還與多種癌癥風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)［2］。維生素D結(jié)合蛋白（vitamin D binding protein，VDBP）作為 VD的結(jié)合蛋白和載體，可與VD及其代謝產(chǎn)物結(jié)合將其轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用。有研究顯示，VDBP與多種惡性腫瘤包括乳腺癌、前列腺癌、結(jié)直腸癌等易感性有關(guān)［3］。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者血漿中的 VDBP和25（OH）D，為探討 VDBP、25（OH）D與原發(fā)性肝細(xì)胞癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

材料和方法

1 研究對(duì)象

病例組選自上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院盧灣分院2011年1月至2014年12月間明確診斷為原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者共146例，年齡37～83歲，均經(jīng)CT初步診斷和病理證實(shí)。急慢性肝腎疾病、營(yíng)養(yǎng)問(wèn)題（營(yíng)養(yǎng)不良、貧血、低蛋白血癥、厭食、食欲不振）、感染活動(dòng)期、無(wú)病理結(jié)果等病例均被排除。對(duì)照組為在上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院盧灣分院體檢的健康人靜脈血樣本 249例，要求無(wú)腫瘤病史，篩選年齡性別與實(shí)驗(yàn)組匹配，無(wú)臨床 HCC癥狀、腫瘤標(biāo)志物（血漿CEA、CA19-9、CA50、CA242）低于正常參考范圍。所有研究對(duì)象6個(gè)月內(nèi)均未使用過(guò)維生素D，也未使用過(guò)可能影響外周血25（OH）D水平的藥物。

2 實(shí)驗(yàn)方法

所有血樣采集使用枸櫞酸鈉抗凝試管，收集好的血漿樣本保存于-80℃?zhèn)溆?。血漿25（OH）D水平檢測(cè)采用直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附分析試劑（HCB，Ltd，Vancouver，Canada）。外周血VDBP水平檢測(cè)采用人VDBP 免疫分析試劑（R＆D Systems，Minneapolis，USA）。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSSl9.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。對(duì)于基本特征的描述性統(tǒng)計(jì)，連續(xù)變量采用中位數(shù)表示，分類變量采用頻率表示。采用卡方檢驗(yàn)比較在病例組與對(duì)照組之間的分布差異，運(yùn)用Logistic回歸模型計(jì)算優(yōu)勢(shì)比（odds ratio，OR）及其 95%可信區(qū)間（95%confidence interval，95%CI），用 OR及其95% CI表示相對(duì)危險(xiǎn)度，分析VDBP、25（OH）D與原發(fā)性肝細(xì)胞癌風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 研究對(duì)象基本特征與血漿VDBP、25（OH）D濃度

395 例研究對(duì)象包括146例原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者和249名無(wú)腫瘤病史的健康受試者。病例組包含120名男性（82.2%），而對(duì)照組包含 134名男性（53.8%），對(duì)照組人群沒(méi)有偏離平衡，具有代表性。病例組和對(duì)照組在年齡（±5歲）和血樣收集時(shí)間上匹配，其基本特征見(jiàn)表1。兩組在BMI指數(shù)、吸煙、飲酒、糖尿病、高血壓平等方面無(wú)顯著差異。然而，HCC患者的血漿 25（OH）D明顯高于對(duì)照組（P＝0.001），而血漿VDBP濃度低于對(duì)照組（P＝0.005）。

表1 原發(fā)性肝細(xì)胞癌病例組與對(duì)照組的基本特征

2 血漿VDBP、25（OH）D與原發(fā)性肝細(xì)胞癌風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系

見(jiàn)表2。結(jié)果表明，血漿 VDBP濃度與 HCC風(fēng)險(xiǎn)之間呈負(fù)相關(guān)（aOR，P-trend＝0.02），第二、第三和第四范圍的風(fēng)險(xiǎn)明顯低于第一范圍（OR＝0.56， 95%CI：0.36～0.84，范圍4／范圍1），進(jìn)一步用HCC風(fēng)險(xiǎn)因子的多變量以及 25（OH）D的校正也無(wú)法改變此風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。血漿25（OH）D與 HCC風(fēng)險(xiǎn)呈正相關(guān)，HCC風(fēng)險(xiǎn)因子的多變量以及VDBP的校正并不能改變此正相關(guān)的評(píng)估。

表2 血漿 VDBP、25（OH）D與原發(fā)性肝細(xì)胞癌風(fēng)險(xiǎn)的OR值和95%可信區(qū)間

非條件logistic回歸分析用 VDBP對(duì)25（OH）D（＜平均值vs.≥平均值），或用25（OH）D對(duì)VDBP（＜平均值vs.≥平均值）進(jìn)行分層。結(jié)果顯示，與HCC風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的外周血 VDBP和25（OH）D之間存在著較強(qiáng)的有統(tǒng)計(jì)意義的相互作用（見(jiàn)表3）。只有在25（OH）D濃度高于中位數(shù)的人群中，VDBP升高顯著降低了HCC風(fēng)險(xiǎn)（OR＝0.34，95%CI：0.15～0.74，范圍4／范圍1，p-trend＝0.001），而在25（OH）D濃度低于中位數(shù)的人群中，這種作用并不存在。同樣在 VDBP濃度低于中位數(shù)的人群中，高濃度的25（OH）D顯著提高了HCC風(fēng)險(xiǎn)（OR＝5.10，95% CI：2.41～10.45，范圍4／范圍1，p-trend＝0.0001）。

表3 25（OH）D或VDBP校正后的VDBP和25（OH）D與原發(fā)性肝細(xì)胞癌風(fēng)險(xiǎn)的OR值和HCC的95%可信區(qū)間

討 論

本研究結(jié)果顯示，血漿25（OH）D的濃度與HCC風(fēng)險(xiǎn)呈正相關(guān)，血漿VDBP與HCC風(fēng)險(xiǎn)呈負(fù)相關(guān)，特別是在25（OH）D水平較高的人群中。在VDBP低于152.56μg／mL的人群中，我們觀察到在25（OH）D第四范圍（＞27.56ng／mL）HCC風(fēng)險(xiǎn)大大升高（OR＞5），提示低水平血漿VDBP帶來(lái)的HCC高風(fēng)險(xiǎn)，大大加強(qiáng)了高濃度的25（OH）D與HCC風(fēng)險(xiǎn)的正相關(guān)，而較高水平的VDBP可能阻礙了游離25（OH）D的生成。在回歸模型中，血漿VDBP和25（OH）D與HCC風(fēng)險(xiǎn)并未因相關(guān)因子的校正而衰減。

25（OH）D作為維生素 D生物活性形式的前體，被認(rèn)為是維生素D代謝狀態(tài)的最佳指標(biāo)。25（OH）D通常與維生素D結(jié)合蛋白（VDBP）結(jié)合，在腎臟、結(jié)腸等組織中可轉(zhuǎn)換成有生物活性的1，25-二羥維生素D3［1，25（OH）2D3］。大部分25（OH）D和1，25（OH）2D3最初都與VDBP結(jié)合，游離的25（OH）D和1，25（OH）2D3只占不到 1%。Hammad［4］觀察到 25（OH）D在肝纖維化、肝硬化至HCC的發(fā)展過(guò)程中明顯地呈進(jìn)行性下降，監(jiān)控25（OH）D可使醫(yī)生更早地干預(yù)HCC的發(fā)展。本研究結(jié)果顯示，血漿25（OH）D的濃度與 HCC風(fēng)險(xiǎn)呈正相關(guān)，與此不符。

VDBP主要由肝臟合成，是屬于白蛋白超家族中的一種結(jié)合蛋白。VDBP在外周血中負(fù)責(zé)結(jié)合和轉(zhuǎn)運(yùn)維生素D。血漿中的VDBP比25（OH）D多得多，半衰期大約2.5～3天，它對(duì)25（OH）D的親和力比1，25（OH）2D大得多，只有少于5%的VDBP與維生素D結(jié)合。研究發(fā)現(xiàn)，VDBP除了有結(jié)合維生素D的功能，尚具有許多其他方面的功能，諸如與細(xì)胞外肌動(dòng)蛋白結(jié)合，運(yùn)輸脂肪酸和內(nèi)毒素 p31，參與炎癥過(guò)程等［5］。VDBP經(jīng)過(guò)B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的脫糖基化可轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞活化因子（macrophage activating factor，MAF），形成 GC-MAF復(fù)合物。該復(fù)合物可直接作用于內(nèi)皮細(xì)胞，抑制血管生成，同時(shí)刺激巨噬細(xì)胞攻擊惡性生長(zhǎng)的腫瘤細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞，從而抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)［6］。近年來(lái)，人們?cè)谂R床研究中發(fā)現(xiàn) VDBP與乳腺癌及前列腺癌、結(jié)腸癌等的發(fā)生均具有一定相關(guān)性［7-9］。Gressner等［10］研究顯示，與正常人相比，肝纖維化和肝癌患者血清中 VDBP水平減少，且減少的水平與疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)，在低水平VDBP的人群中25（OH）D與HCC風(fēng)險(xiǎn)之間呈強(qiáng)正相關(guān)，這可能是因?yàn)榈蜐舛鹊腣DBP結(jié)合較少的25（OH）D，導(dǎo)致外周血中游離25（OH）D的水平較高，游離的25（OH）D通過(guò)轉(zhuǎn)化為1，25（OH）2D3與靶組織中的維生素 D受體結(jié)合，從而啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄的發(fā)生，因?yàn)橹挥形唇Y(jié)合的激素可進(jìn)入靶細(xì)胞，進(jìn)而影響到轉(zhuǎn)錄及其下游生物學(xué)事件。同時(shí)，在高濃度25（OH）D下，較低的 VDBP水平導(dǎo)致抑癌能力降低也加強(qiáng)了VDBP與HCC風(fēng)險(xiǎn)之間的負(fù)相關(guān)。

總之，VDBP水平與HCC風(fēng)險(xiǎn)呈負(fù)相關(guān)，尤其當(dāng)25（OH）D高濃度時(shí)。25（OH）D本身與HCC呈正相關(guān)，高水平 VDBP可使更多的 25（OH）D與之結(jié)合，減少游離25（OH）D的生物利用度，減弱了這種正相關(guān)。同時(shí)檢測(cè)VDBP和25（OH）D有助于維生素D與HCC風(fēng)險(xiǎn)的研究。

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（張?jiān)鑫渚庉嫞?/p>

Association of Circulating Vitamin D Binding Protein and 25-hydroxyvitamin D with the Risk of Hepatocellular Carcinoma

ZHANG Hua，LI Yong-xing，CHEN Hua，LE Yan，XIANG Ming-jie
（Department of Radioimmunoassay and Clinical Laboratory，Luwan Branch of Ruijin Hospital，Shanghai 200020，China）

Objective To investigate the role of vitamin D binding protein（VDBP）and circulating 25-hydroxyvitamin D［25（OH）D］in liver carcinogenesis.Methods The plasma DBP and 25（OH）D levels in 146 cases of Hepatocellular carcinoma（HCC）patients and 249 controls were detected.The logistic regression was used to calculate the odds ratios and 95%confidence intervals for further estimation of the association of VDBP and 25（OH）D with HCC risk.Results The plasma 25（OH）D levels was positively related with the increase risk of HCC，and plasma VDBP levels was negatively related with HCC risk.Only in men with higher plasma 25（OH）D above the median level，high levels of VDBP were associated significantly with decreased risk of HCC.Men with higher 25（OH）D concentrations and serum DBP below the median showed greatly elevated risk of HCC.Conclusion Higher VDBP concentrations may sequester more 25（OH）D and reduce free 25（OH）D bioavailability.Simultaneous examination of VDBP and 25（OH）D may be important in determining the association of vitamin D with HCC risk.

Vitamin D binding protein； 25-Hydroxyvitamin D； Hepatocellular carcinoma

10.11748／bjmy.issn.1006－1703.2016.01.003

2015-05-25；

2015-07-01