溫志華 高迎霞 姚 煦

南京地區(qū)斑貼變應(yīng)原種類的初步篩選

溫志華 高迎霞 姚 煦

目的: 篩選南京地區(qū)的斑貼變應(yīng)原種類。方法: 參照曲泰斯及國際接觸性皮炎研究組提供的標(biāo)準(zhǔn)，并以前期文獻(xiàn)分析數(shù)據(jù)為依據(jù)，制備40種斑貼變應(yīng)原。納入443例接觸性皮炎(濕疹)患者，先后給予曲泰斯和自制斑試變應(yīng)原檢測，觀察兩組斑試變應(yīng)原在患者中陽性率差異，以評估在臨床應(yīng)用的可行性。結(jié)果: 自制斑試變應(yīng)原總體陽性率低于曲泰斯(73%＆81.7%)，二者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；相同的斑試變應(yīng)原相比，12種自制斑貼試劑單個(gè)變應(yīng)原檢測陽性率低于曲泰斯；除常規(guī)檢測的24種斑貼變應(yīng)原外，另外檢測到16種陽性率較高斑貼變應(yīng)原，也是南京地區(qū)常見的接觸過敏原。結(jié)論: 除曲泰斯標(biāo)準(zhǔn)變應(yīng)原系列提及的24種變應(yīng)原外，另16種陽性率較高的變應(yīng)原可同時(shí)納入南京地區(qū)篩選抗原系列。

曲泰斯； 斑貼變應(yīng)原； 斑貼試驗(yàn)

皮膚斑貼試驗(yàn)(簡稱斑試)主要用于診斷接觸性皮炎，尋找引起IV型變態(tài)反應(yīng)的過敏原。許多國家均有各自的標(biāo)準(zhǔn)斑貼試驗(yàn)變應(yīng)原系列，但我國尚無。我們統(tǒng)計(jì)國內(nèi)近20年發(fā)表的斑貼試驗(yàn)診斷文獻(xiàn)[1]，根據(jù)結(jié)果自制40種斑試變應(yīng)原，并與曲泰斯皮炎診斷貼劑進(jìn)行比較，初步探索篩選適合南京地區(qū)常見的接觸性過敏原。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 丹麥ALK公司皮炎診斷貼劑(24) (曲泰斯TRUE Test TM):含24種標(biāo)準(zhǔn)過敏原[硫酸鎳、羊毛脂醇、硫酸新霉素、重鉻酸鉀、卡因混合物、香料混合物、松香、環(huán)氧樹脂、喹啉混合物、秘魯香脂、二鹽酸乙二胺、氯化鈷、對叔丁酚甲醛樹脂、對羥基苯甲酸混合物、卡巴混合物、炭黑橡膠混合物、cl+Me-異噻唑啉酮(卡松CG)、夸特-15、巰基苯丙噻唑、對苯二胺、甲醛、巰基混合物、硫柳汞、秋蘭姆混合物]。使用國產(chǎn)試劑自制40種過敏原[1]:硫酸鎳、羊毛脂、硫酸新霉素、重鉻酸鉀、卡因混合物、芳香混合物、松香、環(huán)氧樹脂、喹啉混合物、秘魯香脂、乙二胺、氯化鈷、對叔丁基苯酚甲醛樹脂、對苯類混合物、卡巴混合物、黑橡膠混合物、卡松CG、考特15、巰基苯并噻唑、對苯二胺、甲醛、巰基混合物、硫柳汞、秋蘭姆混合物、17-氫化可的松丁酸酯、醋酸曲安奈德、21-地塞米松磷酸鈉、咪唑烷基脲、溴硝丙二醇、尼泊金酯、戊二醛、山梨酸、樟腦、乙二醇、對苯二酚、顏料紫、永固紅、耐曬黃、茶樹油、薄荷油，前24種過敏原配比濃度同曲泰斯診斷貼劑。自制聚乙烯斑點(diǎn)芯室每個(gè)小室直徑0.9 cm，半徑0.45 cm，每個(gè)小室面積為0.64 cm2，體積為25 μL[2，3]。

1.2 受試者 2013年11月至2015年4月由經(jīng)驗(yàn)豐富醫(yī)生明確診斷的濕疹和疑似接觸性皮炎患者(皮損部位不限，但除外背部皮膚受累者)，共443例。其中男44例，女399例，年齡19～65歲。所有受試者兩周內(nèi)及斑試過程中未系統(tǒng)用糖皮質(zhì)激素、非甾體抗炎藥，背部皮膚兩周內(nèi)未局部外用糖皮質(zhì)激素，三天內(nèi)及試驗(yàn)過程中不得使用抗組胺藥。

1.3 斑貼試驗(yàn)操作方法 按國際接觸性皮炎研究組(ICDRG)推薦的方法進(jìn)行操作，將試劑貼敷于上背部脊柱兩側(cè)的正常皮膚[3]，其中曲泰斯診斷貼劑直接貼敷，自制抗原每次貼敷前臨時(shí)加量，各小室加量25 μL。48 h去除斑試物，于72 h觀察1次，并根據(jù)ICDRG標(biāo)準(zhǔn)對結(jié)果進(jìn)行判讀。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0進(jìn)行組間比較(χ2檢驗(yàn))，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.5 不良反應(yīng) 一周后及一月后電話隨訪患者有無出現(xiàn)不良反應(yīng)，并于門診隨訪不良反應(yīng)。

2 結(jié)果

2.1 曲泰斯斑試結(jié)果 443例受試者中，失訪31例，412例完成試驗(yàn)的受試者中結(jié)果皆陰性者 75例(18.3%)，出現(xiàn)陽性者337例(81.7%)。見表1。

表1 曲泰斯斑試陽性結(jié)果情況

2.2 自制變應(yīng)原斑試結(jié)果 443例受試者中，失訪31例，412例完成試驗(yàn)的受試者中結(jié)果皆陰性者111例(27.0%)，出現(xiàn)陽性者301例(73.0%)。見表2。

2.3 曲泰斯與自制變應(yīng)原斑試結(jié)果比較 見表3。

表2 自制斑試變應(yīng)原陽性結(jié)果情況

表3 曲泰斯貼劑與自制斑試變應(yīng)原陽性結(jié)果比較 例(%)

2.4 不良反應(yīng) 自制斑試變應(yīng)原試驗(yàn)過程中僅1例患者于貼敷結(jié)束5 min后出現(xiàn)咳嗽癥狀，去除敷料后咳嗽立刻緩解。其余患者除反應(yīng)部位局部瘙癢外無不適。

3 討論

斑貼試驗(yàn)在臨床上用于檢測潛在的過敏原，受到皮膚科及變態(tài)反應(yīng)科醫(yī)師的重視，曲泰斯貼劑，具有方便準(zhǔn)確、變應(yīng)原定量等優(yōu)點(diǎn)，被我國多位醫(yī)師驗(yàn)證是安全有效的[4，5]，廣泛應(yīng)用于我國臨床，但其所含為歐洲標(biāo)準(zhǔn)變應(yīng)原，目前尚無適合我國民眾的標(biāo)準(zhǔn)斑貼試驗(yàn)變應(yīng)原。為初步篩選適合南京地區(qū)居民的斑貼試驗(yàn)變應(yīng)原，我們統(tǒng)計(jì)國內(nèi)近20年發(fā)表的斑試診斷文獻(xiàn)，其中共提及61種過敏原[1]，結(jié)合國人日常接觸情況，選取其中40種并自制為斑試變應(yīng)原，與曲泰斯貼劑進(jìn)行比較，并評價(jià)自制斑貼試劑的安全性、有效性。

本研究中除1例不能解釋的不良反應(yīng)，其余受試者除了陽性反應(yīng)局部瘙癢并出現(xiàn)皮疹外皆無不適，證明兩種斑貼試劑是安全的。

本研究分別對443例南京地區(qū)皮炎濕疹患者先后使用曲泰斯斑試貼劑及自制抗原進(jìn)行斑貼試驗(yàn)，其中結(jié)果顯示曲泰斯總體陽性率，與其他研究結(jié)果一致[4，5]，再次論證曲泰斯的有效性。自制斑試抗原總體陽性率(73%)低于曲泰斯(81.7%)，且二者相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＝0.003)；就單項(xiàng)變應(yīng)原而言，自制變應(yīng)原陽性率亦低于曲泰斯，說明自制斑試變應(yīng)原存在一定缺陷導(dǎo)致檢出率較低。多種實(shí)驗(yàn)因素可影響斑貼試驗(yàn)的結(jié)果，如不同斑試物體積、劑量、不同斑試器類型等，有文獻(xiàn)報(bào)道隨試驗(yàn)物劑量及體積的增加，皮膚反應(yīng)程度有增加的趨勢。本研究自制抗原與曲泰斯成分相同或相似，濃度相同，故差別可能源自不同類型的斑試器及接觸劑量。本研究中沒有配備定量加樣器，僅以加滿小室為標(biāo)準(zhǔn)，雖試驗(yàn)全程由操作熟練的同一護(hù)士完成，但不可避免的存在偏差；同時(shí)自制聚乙烯斑點(diǎn)芯室比較粗糙，部分邊緣不光滑，可能存在密閉性差，貼敷不嚴(yán)密等缺點(diǎn)；同時(shí)亦不能除外抗原在配制時(shí)不均勻或顆粒過大等造成的假陰性反應(yīng)。

雖然本研究中自制斑試變應(yīng)原總體陽性率低于曲泰斯貼劑，但實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)另外16種自制變應(yīng)原檢出率較高，如永固紅(9.3%)、薄荷油(7.6%)、對苯二酚(7.2%)等，既往多數(shù)學(xué)者認(rèn)為作為篩選抗原的常見過敏原組分，其陽性率應(yīng)在2%或1%以上，說明這些抗原也是我國南京地區(qū)較常見的過敏原。因此，我們認(rèn)為這些抗原成分可作為我國臨床篩選抗原使用。糖皮質(zhì)激素因其強(qiáng)大的抗炎抗過敏作用，廣泛應(yīng)用于臨床，其外用制劑更是皮膚科一線用藥，但本研究發(fā)現(xiàn)臨床常用糖皮質(zhì)激素斑試結(jié)果亦呈現(xiàn)較高陽性率，如醋酸曲安奈德(3.8%)、21-地塞米松磷酸鈉(3.0%)、17-氫化可的松丁酸酯(1.3%)，故臨床中如患者出現(xiàn)糖皮質(zhì)激素治療抵抗甚至病情加重時(shí)，應(yīng)考慮患者是否存在糖皮質(zhì)激素過敏予及時(shí)停用，從而避免不良后果。

本研究發(fā)現(xiàn)曲泰斯斑試診斷貼劑不能完全滿足實(shí)際情況，應(yīng)篩選適合我國國情的標(biāo)準(zhǔn)斑貼變應(yīng)原種類。除外曲泰斯標(biāo)準(zhǔn)變應(yīng)原系列提及的24種變應(yīng)原，另16種陽性率較高的變應(yīng)原可同時(shí)納入我國篩選抗原系列。但為進(jìn)一步提高診斷率，自制斑試變應(yīng)原在試劑配制、斑貼小室的制備及加量各方面均有待提高。

[1]溫志華，姚煦，王寶璽，等.中國皮膚科斑貼試驗(yàn)臨床應(yīng)用分析[J].中華皮膚科雜志，2013，46(11):834-836.

[2]Lazzarini R，Duarte I，F(xiàn)erreira AL.Patch tests[J].Anais Brasileiros de Dermatologia，2013，88(6):879-888.

[3]趙辨.中國臨床皮膚病學(xué)[M].南京:江蘇科學(xué)技術(shù)出版社，2009.766-769.

[4]李鄰峰.用曲泰斯貼劑檢測變應(yīng)性接觸性皮炎[J].中國皮膚性病學(xué)雜志，2003，17(2):97-98.

[5]文利平，尹佳，李宏，等.曲泰斯斑貼試劑診斷過敏性接觸性皮炎[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2007，27(6):708-709.

(收稿:2016-05-25)

Screening for contact-allergenswith patch test in Nanjing city

WEN ZhiHua，GAO Yingxia，YAO Xu.
Institute of Dermatology，Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College，Nanjing 210042，China

Objective:To screen the contact-allergens with patch test in Nanjing.M ethods:Forty domestic allergenswere prepared according to TRUE Test standard patch testing series(24)and the criterion provided by the international contact dermatitis research group，and on the base of literature review.Four hundred and forty-three patients of contact dermatitis were enrolled into the study and were tested with TRUE Test patch testing series and domestic patch test to compare the positivity rates between the two tests.Results:The positivity rate of domestic allergenswas lower than that of TRUE Test patch testing series(73%＆81.7%)，with a significant difference(P＜0.05).When tested with the same12 allergens，the positivity rate was lower in domestic allergens than in TRUE Test patch testing series.Apart from 24 common-used allergens，another 16 domestic allergens had higher positivity rate(m ight be common allergens in Nanjing)Conclusion:Except twenty four domestic allergensmentioned in the TRUE Test standard patch testing series，another sixteen allergens can be enrolled in the screening allergen in Nanjing city.

TRUE Test；domestic allergens；patch test

衛(wèi)計(jì)委公益性行業(yè)科研專項(xiàng)(編號(hào):201002016)

中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院皮膚病研究所，南京，210042

姚煦，E-mail:dryao_xu@126.com