單靖嵐，鄭貴星，鄧穗燕，黃 俊

（1．廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，廣東 廣州 520000； 2．廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院，廣東 廣州 520000；

3．廣州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 520000）

替加環(huán)素聯(lián)合亞胺培南對多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的體外抗菌活性研究*

單靖嵐1，鄭貴星1，鄧穗燕2，黃 俊3

（1．廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，廣東 廣州 520000； 2．廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院，廣東 廣州 520000；

3．廣州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 520000）

目的 探討替加環(huán)素（tigecyclin）聯(lián)合亞胺培南對多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌體外抗菌的效果，探索多藥聯(lián)合應(yīng)用對多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的臨床用藥新途徑。方法 收集臨床分離的40株多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌，采用微量肉湯稀釋法、棋盤法分別檢測替加環(huán)素、亞胺培南單獨(dú)及聯(lián)合使用的最低抑菌濃度（MIC），計(jì)算藥物聯(lián)合使用抑菌濃度（FIC）指數(shù)，利用FIC指數(shù)判定替加環(huán)素和亞胺培南聯(lián)用時(shí)對多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌體外抗菌的效果。結(jié)果 替加環(huán)素聯(lián)合亞胺培南能顯著降低各自的MIC值，其中表現(xiàn)為協(xié)同作用的菌株占70．00%，表現(xiàn)為相加作用的菌株占25．00%，發(fā)生無關(guān)作用的占5．00%，無拮抗作用發(fā)生。結(jié)論 替加環(huán)素聯(lián)合亞胺培南可對多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的感染進(jìn)行治療。

替加環(huán)素；亞胺培南；多重耐藥；鮑曼不動(dòng)桿菌

鮑曼不動(dòng)桿菌為醫(yī)院內(nèi)獲得性感染的常見病原菌，尤其是免疫缺陷和在重癥監(jiān)護(hù)室（ICU）的患者，而大量使用廣譜抗菌藥物、糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑及鮑曼不動(dòng)桿菌有著強(qiáng)大的體外長期生存能力及易繁殖播散等特點(diǎn)是導(dǎo)致這一現(xiàn)象發(fā)生的主要原因[1－3]。研究表明，鮑曼不動(dòng)桿菌感染患者病死率較高[4]，其原因有待探究。大量研究顯示，鮑曼不動(dòng)桿菌有強(qiáng)大的克隆傳播及獲得耐藥性能力，且多重耐藥、廣泛耐藥及全耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌出現(xiàn)了世界性流行現(xiàn)象[5]。替加環(huán)素為新開發(fā)的新一類靜脈用抗菌藥物，是半合成四環(huán)素類藥物米諾環(huán)素的衍生物[6－7]。亞胺培南為碳青霉烯類治療鮑曼不動(dòng)桿菌的抗菌藥物[8－9]。本研究中用替加環(huán)素聯(lián)合亞胺培南對抗耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌進(jìn)行體外抗菌試驗(yàn)，以期為臨床治療提供參考。

1 材料與方法

1．1 儀器、材料與試藥

1．1．1 儀器與試藥

Muller－Hinton肉湯（浙江杭州天和微生物試劑有限公司）；血瓊脂平板（江門市凱林貿(mào)易有限公司）。VITEK－2型細(xì)菌鑒定儀（法國生物梅里埃公司）。注射用替加環(huán)素（江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H20123394，規(guī)格為每支50 mg）；亞胺培南（山東新時(shí)代藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H20090182）。

1．1．2 菌株來源

住院患者送檢的痰液、尿液、血液、膿液、腦脊液、胸腔積液、腹腔積液、咽拭子、膽汁、插管等標(biāo)本中分離所得的40株多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌。所有菌株均經(jīng)VITEK－2細(xì)菌鑒定儀鑒定。質(zhì)控菌株為銅綠假單胞菌（ATCC27853）、大腸埃希菌（ATCC25922）均購自廣東省臨床檢驗(yàn)中心。

1．2 方法

1．2．1 菌懸液配制

選取已經(jīng)鑒定的多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌菌株，并將其接種在血瓊脂培養(yǎng)基上，放入（35±2）℃溫箱中培養(yǎng)16～18 h后取出，在血瓊脂培養(yǎng)基上挑取合適的菌落放于2 mL無菌生理鹽水中，然后利用比濁儀校正濁度為0．5麥?zhǔn)蠞岫?，再用無菌生理鹽水將0．5麥?zhǔn)蠞岫鹊木合♂屩?×105cfu／mL。

1．2．2 抗菌藥物配制

用精密電子天平稱取替加環(huán)素與亞胺培南（組合比例為1∶1），用無菌生理鹽水和0．01 mol／L的磷酸鹽緩沖液配制成最終質(zhì)量濃度均為2 048 μg／mL的溶液備用。

1．2．3 單藥最低抑菌濃度（MIC）測定

用微量肉湯倍比稀釋法檢測40株鮑曼不動(dòng)桿菌對抗菌藥物替加環(huán)素和亞胺培南的MIC，試驗(yàn)結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)參照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（CLSI）標(biāo)準(zhǔn)。

無菌操作，將100 μL微量肉湯分別加入無菌96孔板中。將質(zhì)量濃度為2048 μg／mL的亞胺培南藥液100μL按每橫排方式加入無菌96孔板中，每橫排的第1孔加入抗菌藥物原液100 μL，混勻，然后吸取100 μL至第2孔，混勻后再吸取100 μL至第3孔，如此連續(xù)倍比稀釋至第11孔，并從第11孔中吸取100 μL棄去，第12孔為不含藥物的生長對照。

根據(jù)抑菌濃度的需要，取質(zhì)量濃度為2 048 μg／mL的替加環(huán)素原液100 μL加入700 μL的Muller－Hinton肉湯中，此時(shí)替加環(huán)素藥物質(zhì)量濃度稀釋為256 μg／mL，按亞胺培南藥液的加入方法加入96孔板中。將濃度為3×105cfu／mL的菌懸液100 μL加入孔中，孔中菌的最終質(zhì)量濃度為1．5×105cfu／mL。此時(shí)每橫排各孔的亞胺培南藥物質(zhì)量濃度依次為512，256，128，64，32，16，8，4，2，1，0．5 μg／mL。每橫排各孔替加環(huán)素藥物質(zhì)量濃度依次為 64，32，16，8，4，2，1，0．5，0．25，0．125，0．06 μg／mL。將完成上述操作的96孔板放入（35±2）℃溫箱中過夜，培養(yǎng)16～18 h觀察結(jié)果，觀察兩藥單獨(dú)應(yīng)用時(shí)的MIC，并記錄。

1．2．4 聯(lián)合藥物敏感性試驗(yàn)

根據(jù)替加環(huán)素與亞胺培南兩單藥微量肉湯稀釋法測定的MIC來決定棋盤稀釋法聯(lián)合抗菌試驗(yàn)的藥物稀釋濃度。分別把替加環(huán)素與亞胺培南2種藥物倍比稀釋（配制藥物的方法及倍比稀釋方法同單藥試驗(yàn)中的方法）按橫向及縱向分別加入96孔板中。本試驗(yàn)橫向?yàn)閬啺放嗄系慕堤荻确较?，共?2個(gè)濃度梯度；縱向?yàn)樘婕迎h(huán)素的降梯度方向，共8個(gè)濃度梯度。分別將2種抗菌藥物以50 μL體積兩兩組合加入96孔板中，最后將100 μL的3×105cfu／mL的菌液加入96孔板中。再次將操作完成的 96孔板放入（35±2）℃溫箱中過夜，孵育18～24 h，觀察兩藥聯(lián)合應(yīng)用時(shí)各藥的MIC。

1．2．5 聯(lián)合抑菌指數(shù)（FIC）的確定

記錄組合中2種藥物單獨(dú)應(yīng)用時(shí)的MIC及2種藥物聯(lián)用后的MIC，并計(jì)算出2種藥物聯(lián)用的FIC。FIC為聯(lián)用時(shí)各藥的MIC值分別除以單藥時(shí)MIC值的商的和。相互作用解釋：FIC≤0．5代表協(xié)同作用，0．5＜FIC≤1代表相加作用，1＜FIC≤2代表無關(guān)作用，F(xiàn)IC＞2代表拮抗作用[6]。

2 結(jié)果

2．1 藥物單用與聯(lián)合使用的MIC50和MIC90

結(jié)果見表1和表2。

表1 單用抗菌藥對多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的MIC（μg／mL）

表2 聯(lián)合使用抗菌藥物對多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的MIC（μg／mL）

2．2 聯(lián)合用藥的FIC分布

替加環(huán)素和亞胺培南聯(lián)合使用，表現(xiàn)為協(xié)同作用的菌株占70%，表現(xiàn)為相加作用的占25%，表現(xiàn)為無關(guān)作用的占5%，無拮抗作用發(fā)生，詳見表3。

表3 替加環(huán)素和亞胺培南聯(lián)合使用的FIC分布（n＝40）

3 討論

鮑曼不動(dòng)桿菌是造成醫(yī)院感染的常見病原菌。近年來，其耐藥性日益嚴(yán)重且感染增多，已引起臨床醫(yī)生和微生物研究人員的重點(diǎn)關(guān)注。鮑曼不動(dòng)桿菌主要會導(dǎo)致呼吸道感染，但也可引發(fā)泌尿系感染、敗血癥及繼發(fā)性腦膜炎等。鮑曼不動(dòng)桿菌在醫(yī)院的環(huán)境中分布很廣且可長期存活，嚴(yán)重威脅了危重患者和冠心病重癥監(jiān)護(hù)室(CCU)及綜合性重癥監(jiān)護(hù)室(ICU)患者的生命健康。據(jù)報(bào)道，鮑曼不動(dòng)桿菌在無活性惰性物質(zhì)表面可存活超過5個(gè)月[10]。在其長期的進(jìn)化過程中，不動(dòng)桿菌屬能形成一系列自身特有的耐藥基因，如碳青霉烯酶基因，而這些基因能過度表達(dá)來應(yīng)對抗菌藥物的治療；在分子水平上，其擁有從外界捕獲耐藥基因的能力，并能整合人自己的基因組，使之得到表達(dá)能力，從而獲得新的耐藥性。隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，廣譜抗菌藥物、糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑的大量使用，使該菌的耐藥情況更加嚴(yán)重。此外，鮑曼不動(dòng)桿菌還有易克隆及傳播的特點(diǎn)。正是由于以上原因及其快速獲得和耐藥性的能力，導(dǎo)致鮑曼不動(dòng)桿菌感染不斷出現(xiàn)[11－12]。

《2012中國鮑曼不動(dòng)桿菌感染診治與防控專家共識》中提出，對于鮑曼不動(dòng)桿菌感染的治療應(yīng)采用兩藥聯(lián)合甚至是3種藥物聯(lián)合的方案。其中提出以替加環(huán)素為基礎(chǔ)，聯(lián)合舒巴坦或含舒巴坦的復(fù)合制劑、碳青霉烯類抗菌藥物、氨基苷類抗菌藥物、喹諾酮類抗菌藥物、多黏菌素E[13]。而碳青霉烯類抗菌藥物被推薦用于初治鮑曼不動(dòng)桿菌感染患者，但2010年中國細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(CHINET)顯示，使用碳青霉烯類抗菌藥物致院內(nèi)鮑曼不動(dòng)桿菌感染率接近60%[14]，故此類抗菌藥物治療鮑曼不動(dòng)桿菌感染時(shí)要權(quán)衡利弊?？咕幬飭为?dú)使用對多重耐藥菌株感染治療時(shí)易誘導(dǎo)病原菌產(chǎn)生耐藥性，且其作用有限[15]，故聯(lián)合用藥治療成為臨床上解決多重耐藥細(xì)菌感染較有效的途徑之一。

本研究中利用替加環(huán)素聯(lián)合亞胺培南，測定聯(lián)合用藥后對40株多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌MIC的影響。結(jié)果顯示，替加環(huán)素和亞胺培南聯(lián)合使用，表現(xiàn)為協(xié)同作用的菌株占70．00%，相加作用的菌株占25．00%，無關(guān)作用占5．00%，無拮抗作用發(fā)生。

綜上所述，替加環(huán)素聯(lián)合亞胺培南對多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌多表現(xiàn)為協(xié)同或相加作用，有良好的抗菌活性。本研究為臨床應(yīng)用替加環(huán)素聯(lián)合亞胺培南治療多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌感染提供了試驗(yàn)依據(jù)。

[1]吳勁松，盧月梅，吳偉元，等．鮑曼不動(dòng)桿菌的感染分布及耐藥性分析[J]．中國感染控制雜志，2004，3（3）：247－249．

[2]Zhou H，Yang Q，Yu YS，et al．Clonal Spread of Imipenem－resistant Acinetobacter baumannii among different cities of China[J]．J Clin Microbiol，2007，45（12）：4 054－4 057．

[3]Perez F，Hujer AM，Hujer KM，et al．Global challenge of multidrug－resistant Acinetobacter baumannii[J]．Antimicrob Agents Chemother，2007，51（10）：3 471－3 484．

[4]Lenie D，Alexandr N，Harald S．An increasing threat in hospitals：multidrug－resistant Acinetobacter baumannii[J]．Nat Rev Microbiol，2007，5（12）：939－951．

[5]Peleg AY，Seifert H，Paterson DL．Acinetobacter baumannii：emer－gence of a successful pathogen[J]．Clin Microbiol Rev，2008，21（3）：538－582．

[6]王寧江．泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌肺部感染80例抗感染治療分析[J]．中國藥業(yè)，2015，24（23）：239－240．

[7]龔燕飛，曾 強(qiáng)，劉湘林，等．替加環(huán)素與頭孢哌酮／舒巴坦聯(lián)用對耐亞胺培南鮑曼不動(dòng)桿菌體外抗菌活性分析[J]．中國抗生素雜志，2013，38（12）：947－950．

[8]倪語星，尚 紅．臨床微生物學(xué)與檢驗(yàn)[M]．第4版．北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：63．

[9]Wendt C，Dietze B，Dietz E，et al．Survival of Acinetobactep baumannii on dry surfaces[J]．J Clin Microbiol，1997，35（6）：1 394－1 397．

[10]Sopirala MM，Mangino JE，Gebreyes WA，et al．Synergy testing by Etest，microdilution checkerboard，and time－kill methods for pan－drug－resistant Acinetobacter baumannii[J]．Antimicrob Agents Chemother，2010，54（11）：4 678－4 683．

[11]肖淑珍，徐桂婷，方 潔，等．鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性與抗菌藥物使用情況的相關(guān)性分析[J]．中國感染與化療雜志，2013，13（6）：446－449．

[12]Entenza JM，Moreillon P．Tigecycline in combination with other antimicr－obials：a review of in vitro，animal and case report studies[J]．Int J Antimicrob Agents，2009，34（1）：8－9．

[13]Petersen PJ，Labthavikul P，Jones CH，et al．In vitro antibacterial activities of tigecycline in combination with other antimicrobial agents determined by chequerboard and time－kill kinetic analysis[J]．J Antimicrob Chemother，2006，57（3）：573－576．

[14]朱德妹，汪 復(fù)，胡付品．2010年中國CHINET細(xì)菌耐藥性監(jiān)測[J]．中國感染與化療雜志，2011，11（5）：321－329．

[15]毛 璞，李建春，邱桂霞，等．重癥監(jiān)護(hù)病房耐碳青霉烯類抗生素鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥機(jī)制研究[J]．中國感染與化療雜志，2015，15（3）：253－256．

In VitroActivityofTigecyclineCombined with Imipenem againstM ultidrug－Resistant Acinetobacter Baumann

Shan Jinglan1，Zheng Guixing1，Deng Suiyan2，Huang Jun3
（1．First Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University，Guangzhou，Guangdong，China 520000； 2．Third Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University，Guangzhou，Guangdong，China 520000；3．Guangzhou Medical University Primary Hospital，Guangzhou，Guangdong，China 520000）

Objective To investigate the in vitro activity of tigecycline combined with imipenem against multi drug－resistant Acinetobacter baumann，and to explore the new way of clinical medicine administration against multi drug－resistant Acinetobacter baumann．M ethods Agar dilution method and checkerboard method were used for the MIC testing of tigecycline combined with imipenem against 40 multi drug－resistant Acinetobacter baumannii strains，and MIC value was used to calculate the fractional inhibitory concentration（FIC）index．Results The MIC of tigecycline and imipenem were reduced significantly when using by tigecycline combined with imipenem．The FIC results showed that the main interaction was synergism （70．00%）and additivity（25．00%），with only 5．00% of inefficiency．No antagonism was observed．Conclusion Tigecycline combined with imipenem can be used to treat the infection of multi drug－resistant Acinetobacter baumann．

tigecycline；imipenem；multi drug－resistant；acinetobacter baumann

R969．3；R945；R978．1

A

1006－4931(2016)10－0012－03

單靖嵐（1983－），女，大學(xué)本科，檢驗(yàn)師，研究方向?yàn)獒t(yī)院感染，（電話）020－83062961；黃?。?976－），男，教授，博士研究生，研究方向?yàn)楦腥久庖邔W(xué)，本文通訊作者，（電話）020－37103216（電子信箱）hj165＠sina．com。

2015－09－10；

2015－12－20)

*廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目，項(xiàng)目編號：A2015436。