孫 楠

（撫順市藥品檢驗(yàn)檢測中心中藥室，遼寧 撫順 113006）

中藥及中成藥薄層色譜鑒別檢驗(yàn)相關(guān)問題的探討

孫 楠

（撫順市藥品檢驗(yàn)檢測中心中藥室，遼寧 撫順 113006）

近年來，隨著薄層色譜技術(shù)在中藥及中成藥檢驗(yàn)中的大量應(yīng)用，重現(xiàn)性不足、精密度較差等問題亦隨之被發(fā)現(xiàn)，本研究認(rèn)真分析這些問題出現(xiàn)的原因，提出進(jìn)一步的整改措施，在固定相、掃描技術(shù)及設(shè)備等方面不斷改進(jìn)發(fā)展，以期薄層色譜鑒別在中藥檢驗(yàn)工作中發(fā)揮更為重要的作用。

中藥；中成藥；薄層色譜鑒別；檢驗(yàn)

1 薄層色譜在中藥檢驗(yàn)中的應(yīng)用現(xiàn)狀

薄層色譜法（TLC）為一種吸附薄層色譜分離法，系指將樣品點(diǎn)樣于涂有相應(yīng)固定相的玻璃板、塑料板片上，利用樣品中各成分的不同吸附能力，使在移動(dòng)相流過吸附劑的過程中，連續(xù)的產(chǎn)生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附作用，再利用吸收測定、熒光測定及熒光淬滅等方法最終分離各成分[1-3]。對比樣品斑點(diǎn)及相應(yīng)對照物的比移值（Rf），以達(dá)到藥品鑒別、化學(xué)成分含量測定及雜質(zhì)檢驗(yàn)等目的?？赏瑫r(shí)分離多個(gè)樣品是薄層色譜法最為突出的優(yōu)勢之一[4]，此外，薄層色譜法對樣品預(yù)處理要求較低，對固定相、展開劑的選擇自由度較大，十分適合樣品中含有不易從分離介質(zhì)脫附或含有懸浮微粒的分析和需要色譜后衍生化處理的樣品分析。具有快速靈敏、簡便直觀、經(jīng)濟(jì)高效等優(yōu)勢，在藥物分析中應(yīng)用較為廣泛[5-6]。在中藥及中成藥的檢驗(yàn)中亦被廣泛應(yīng)用，是中國藥典中中藥飲片鑒別項(xiàng)的重要內(nèi)容之一，其最主要、最常用的目的是對中藥中的有效成分進(jìn)行定性鑒別。研究表明，薄層色譜鑒別在現(xiàn)階段藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)定性鑒別中的應(yīng)用已超越顯微鑒別、理化鑒別和光譜鑒別[7]。

2 檢驗(yàn)中存在的相關(guān)問題

2.1 點(diǎn)樣量問題

點(diǎn)樣是薄層色譜檢驗(yàn)操作中最為關(guān)鍵的一步。亦是檢驗(yàn)過程中最主要的誤差來源。由于中藥及中成藥的供試液中待測成分與其他雜質(zhì)成分共存，在日常檢驗(yàn)工作過程中，如果出現(xiàn)結(jié)果不符合要求再檢時(shí)，為防止誤判，常采取點(diǎn)樣量加倍的方式以排除雜質(zhì)干擾等外力影響因素，但如若對點(diǎn)樣量超負(fù)荷認(rèn)識不足，點(diǎn)樣量過大，則會限制有效容積負(fù)荷量，降低分離率，對于較粘稠樣品，在點(diǎn)樣量過大，嚴(yán)重者甚至出現(xiàn)斑點(diǎn)變形、拖尾等情況發(fā)生，影響結(jié)果判定。

2.2 供試品溶劑選擇問題

由于供試液溶劑的洗脫力，點(diǎn)樣時(shí)樣品在原點(diǎn)呈圓形展開，這種現(xiàn)象稱為“上樣圓形色譜效應(yīng)”[8]。但在實(shí)際操作中我們發(fā)現(xiàn)，供試品溶劑極性的選擇對薄層色譜鑒別檢驗(yàn)影響巨大。如在點(diǎn)樣后原點(diǎn)常變成空心圓，這是由樣品在溶劑中的溶解度過大所導(dǎo)致的，這對于后續(xù)的展開將造成不利影響。另一種情況是點(diǎn)樣后供試液溶劑在原點(diǎn)殘留，這會對展開的選擇性產(chǎn)生一定的影響，特別是供試液溶劑與展開劑的極性相差較大時(shí)更明顯，基于上述情況，在上樣時(shí)我們常采取同步或繼后干燥除去原點(diǎn)殘留的溶劑。總而言之，在試驗(yàn)中一般應(yīng)選用溶解度適中，粘度較小的溶劑。

2.3 展開劑的選擇問題

在試驗(yàn)中常選擇極性相對小的溶劑進(jìn)行成分的溶解和分離，這一類溶劑在展開劑中所占比例一般較大；極性較大的溶劑因具有較強(qiáng)的洗脫力，對待測成分的移動(dòng)起到推動(dòng)作用，增大Rf值[9-10]，占比例一般較小，展開劑中還常加入少量酸、堿來避免斑點(diǎn)拖尾。在同一薄層板上，展開劑的展開能力取決于溶劑極性的大小，展開劑極性越大，對化合物的展開能力越強(qiáng)[11]。但由于操作人員對于上述理論知識的理解缺失，在實(shí)際操作過程中對于展開劑的選擇常常出現(xiàn)不當(dāng)。

3 改進(jìn)措施

總之在試驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)點(diǎn)樣操作技術(shù)、展開劑的選擇、展開溫度、濕度以及薄層板質(zhì)量好壞等都是影響薄層色譜檢驗(yàn)的重要因素。因此在中藥及中成藥的檢驗(yàn)過程中常采取不同的提取方法，調(diào)換展開劑，進(jìn)行空白試驗(yàn)等方式對檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證[12]。具體總結(jié)以下幾點(diǎn)：

對于液體劑型中成藥，應(yīng)首先選擇適宜的有機(jī)溶劑進(jìn)行提取。對于水溶性成分應(yīng)先對樣品進(jìn)行脫脂處理。對含有乙醇的樣品應(yīng)先水浴揮去乙醇再進(jìn)行下一步處理。對固體劑型中成藥，應(yīng)以超聲提取法、回流提取法作為提取的首選方式。對藥材或處方中含有較多糖類或淀粉質(zhì)成分，可采取先用酸性溶劑溶解，再選擇有機(jī)溶劑提取的方法提高薄層斑點(diǎn)的清晰度。

適時(shí)干燥除去原點(diǎn)殘留的溶劑是必要的，但應(yīng)避免高溫加熱，抑制硅膠的活性表面固態(tài)化學(xué)反應(yīng)，避免移動(dòng)相在展開時(shí)對這部分樣品的溶解速度比移動(dòng)速度慢得多而形成拖尾。

展開后部分樣品需用顯色劑進(jìn)行顯色，如果噴霧顯色，要保證噴出氣霧盡量均勻。在用碘水或氨蒸氣顯色時(shí)，使用的容器必須密閉，熏蒸的時(shí)間要足夠長，待薄層斑點(diǎn)顯色適宜時(shí)取出。加熱顯色需注意加熱時(shí)間和溫度。

4 結(jié) 語

相信隨著薄層技術(shù)在色譜板、點(diǎn)樣技術(shù)、展開技術(shù)方面的發(fā)展，薄層色譜的規(guī)范化和儀器化程度大大提高，將在中藥及中成藥的檢驗(yàn)分析中將發(fā)揮更大的作用。

[1] 中華人民共和國國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部) [M].北京:中國醫(yī)藥利技出版社,2015.

[2] 趙鳴舒,劉文京,趙希賢,等.靜態(tài)頂空氣相色譜法快速鑒別薄荷[J].首都醫(yī)藥.2010,17(20):49-50.

[3] 朱 洪.淺析抽驗(yàn)中藥飲片及中成藥的質(zhì)量情況[J].海峽藥學(xué),2012,24(10):292-293.

[4] 韓亞平,雷振宏,趙 丹,等.中藥質(zhì)量的影響因素及對策[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2015(24):113-114.

[5] 陳志腎.藥品檢驗(yàn)工作中存在的I司題與解決對策探究[J].科技創(chuàng)新導(dǎo)報(bào),2014,06:21-22.

[6] 馬艷芹,張蓉蓉,房吉祥,等.現(xiàn)代分析技術(shù)在中藥質(zhì)量控制中的應(yīng)用進(jìn)展[J].首都醫(yī)藥,2013(16):14-15.

本文編輯：吳玲麗

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ISSN.2095-8242.2017.027.5290.01