(開封市婦幼保健院，河南 開封 475000)

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)是導(dǎo)致妊娠期高血壓的主要原因之一，主要是指妊娠期間發(fā)生或者首次發(fā)生的不同程度的葡萄糖不耐受，但不排除妊娠前存在糖代謝異常的可能[1]。妊娠期糖尿病與產(chǎn)后糖尿病發(fā)生率增高相關(guān)，且導(dǎo)致新生兒呼吸窘迫綜合癥和巨大胎兒等并發(fā)癥增加[2,3]。妊娠期糖尿病發(fā)病機(jī)理未闡明，脂肪酸代謝與妊娠期糖尿病或胰島素抵抗等相關(guān)研究是一大研究熱點[4,5]。游離脂肪酸是孕婦和新生兒重要的能量物質(zhì)，其水平可能影響胰島分泌功能。本研究旨在通過檢測妊娠期糖尿病產(chǎn)婦和新生兒的T細(xì)胞功能，以及體外給予亞麻籽油和橄檻油處理，從營養(yǎng)學(xué)角度闡述亞麻籽油(Linseed oil)和橄欖油(olive oil)對于妊娠期糖尿病的產(chǎn)婦和新生兒的T細(xì)胞增殖以及IL-2和IL-4分泌水平，為臨床上妊娠期糖尿病飲食指導(dǎo)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

抽取41例妊娠期糖尿病產(chǎn)婦和新生兒，以及40例正常產(chǎn)婦和新生兒的靜脈血各10 mL，肝素抗凝后加Hank’s液稀釋，用淋巴細(xì)胞分離液進(jìn)行密度梯度離心，吸取上中層淋巴細(xì)胞層。待處理。

1.2 T細(xì)胞體外培養(yǎng)

T細(xì)胞采用Histopaque 1077(Sigma, Aldrich)試劑盒進(jìn)行體外提取后用含有小牛血清的1640培養(yǎng)基進(jìn)行體外培養(yǎng)48 h，培養(yǎng)條件37℃，5% CO2。刀豆蛋白A(Con A, Sigma)刺激T細(xì)胞增殖。亞麻籽油和橄欖油的終濃度是30μM。

1.3 MTT法

細(xì)胞以5000個/孔的密度種植于96孔板內(nèi)，當(dāng)細(xì)胞生長融合達(dá)70%時，給予細(xì)胞相應(yīng)處置，細(xì)胞轉(zhuǎn)染48 h后給予相應(yīng)藥物處理，若無需轉(zhuǎn)染直接用藥物處理24 h，然后進(jìn)行檢測。為了避免藥物處理時間過長導(dǎo)致混雜因素過多，藥物處理時間不超過24 h。藥物處理時間達(dá)到預(yù)定時，每孔加入10μL MTT，在37℃孵育4 h，終止培養(yǎng)。棄掉孔內(nèi)液體，避光條件下加入200 μL二甲基亞砜，放置搖床晃動10 min使結(jié)晶物充分溶解。用酶標(biāo)儀于490 nm波長處測定各孔的吸光度值，并記錄結(jié)果。

1.4 ELISA法

T細(xì)胞體外培養(yǎng)48 h后，收集細(xì)胞上清液，1 500 rpm離心10 min，按照ELISA試劑盒(R&D System, Oxford, UK)進(jìn)行操作分別檢測IL-2和IL-4。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 基本特征

妊娠期糖尿病產(chǎn)婦和正常產(chǎn)婦的基本特征，年齡、母體孕前BMI、妊娠周數(shù)、5 min評分、新生兒出生性別、母體孕期甘油三酯、母體孕期膽固醇兩組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。新生兒出生體重在妊娠期糖尿病組高于正常組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 正常和妊娠糖尿病的產(chǎn)婦生產(chǎn)情況及血脂狀態(tài)

注：1)與正常組比較，P<0.05

2.2 妊娠期糖尿病和正常組產(chǎn)婦及新生兒體外T細(xì)胞增殖水平

刀豆蛋白A具有刺激T細(xì)胞增殖作用，體外提取的妊娠期糖尿病和正常組產(chǎn)婦和新生兒的T細(xì)胞，在刀豆蛋白A刺激下檢測其T細(xì)胞增殖水平。妊娠期糖尿病的產(chǎn)婦和新生兒兩者的T細(xì)胞增殖水平低于正常組的產(chǎn)婦和新生兒，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。體外處理給予胰島素后，妊娠期糖尿病的產(chǎn)婦和新生兒T細(xì)胞增殖水平有所上升，但與對應(yīng)的正常組產(chǎn)婦和新生兒的T細(xì)胞增殖水平有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。亞麻籽油降低各組的T細(xì)胞增殖水平，妊娠期糖尿病的產(chǎn)婦和新生兒的T細(xì)胞增殖水平與正常組之間無顯著性差異(P>0.05)。而橄欖油卻能反向刺激T細(xì)胞增殖，但其水平仍低于正常組的產(chǎn)婦和新生兒(P<0.05)，效果與胰島素相似。見圖1。

圖1 正常和妊娠期糖尿病的產(chǎn)婦及新生兒T細(xì)胞增殖水平

2.3 妊娠期糖尿病和正常組產(chǎn)婦與新生兒的IL-2和IL-4分泌水平

刀豆蛋白A具有刺激T細(xì)胞增殖作用，體外提取的妊娠期糖尿病和正常組產(chǎn)婦和新生兒的T細(xì)胞，IL-2分泌水平代表Th1細(xì)胞功能，IL-4分泌水平代表Th2細(xì)胞功能。妊娠期糖尿病的產(chǎn)婦和新生兒兩者的IL-2分泌水平低于正常組的產(chǎn)婦和新生兒，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

體外處理給予胰島素后，提高妊娠期糖尿病的產(chǎn)婦和新生兒IL-2分泌水平，但與對應(yīng)的正常組產(chǎn)婦和新生兒的IL-2分泌有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。亞麻籽油降低各組的TIL-2分泌水平，妊娠期糖尿病的產(chǎn)婦和新生兒的IL-2分泌水平與正常組之間無顯著性差異(P>0.05)。而橄欖油卻能反向刺激IL-2分泌，但其水平仍低于正常組的產(chǎn)婦和新生兒(P<0.05)，效果與胰島素相似，見圖2。而IL-4在妊娠期糖尿病的產(chǎn)婦和新生兒與正常組的產(chǎn)婦和新生兒分泌水平無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，僅胰島素處理能增加妊娠期糖尿病和正常組產(chǎn)婦T細(xì)胞的IL-4分泌水平，而亞麻籽油和橄欖油均無影響IL-4分泌作用，見圖3。

圖2 正常和妊娠糖尿病的產(chǎn)婦及新生兒體外油脂刺激的IL-2分泌水平

圖3 正常和妊娠糖尿病的產(chǎn)婦及新生兒體外油脂刺激的IL-4分泌水平

3 討論

妊娠期糖尿病指妊娠期間發(fā)生或者首次發(fā)生的不同程度的葡萄糖不耐受，但不排除妊娠前存在糖代謝異常的可能[1]。妊娠期糖尿病發(fā)病機(jī)理未闡明，脂肪酸代謝與妊娠期糖尿病或胰島素抵抗等相關(guān)研究是一大研究熱點[4]。游離脂肪酸和葡萄糖作用相似，是孕婦和新生兒重要的能量物質(zhì)，其水平可能影響胰島分泌功能。有關(guān)游離脂肪酸和外源性亞麻籽油與橄欖油等對于妊娠期糖尿病的發(fā)生發(fā)展作用存在一定的爭議。脂肪酸在口服葡萄糖耐量過程中起到一定調(diào)控作用，在II型糖尿病和妊娠期糖尿病均有所體現(xiàn)[5]。飲食中的短鏈脂肪酸和ω-3通過GLP-1和PYY分泌調(diào)控其代謝[2]，過氧化基、鈣離子下調(diào)和Fox-3的調(diào)控與脂肪酸代謝維持糖代謝穩(wěn)態(tài)相關(guān)[3]。

本研究中亞麻籽油降低娠期糖尿病產(chǎn)婦和新生兒與正常產(chǎn)婦和新生兒的T細(xì)胞增殖水平和IL-2，妊娠期糖尿病的產(chǎn)婦和新生兒的T細(xì)胞增殖水平與正常組之間無顯著性差異(P>0.05)。而橄欖油卻能反向刺激T細(xì)胞增殖和IL-2，但其水平仍低于正常組的產(chǎn)婦和新生兒，效果與胰島素相似。IL-4分泌水平不受亞麻籽油和橄欖油的影響。

總之，橄欖油具有胰島素樣作用升高妊娠期糖尿病產(chǎn)婦和新生兒的T細(xì)胞增殖和IL-2分泌水平，而亞麻籽油相反。從營養(yǎng)學(xué)角度給予妊娠期糖尿病孕婦飲食指導(dǎo)改善T細(xì)胞功能，為臨床上妊娠期糖尿病飲食指導(dǎo)提供理論依據(jù)。

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