周愛國 候俊 馮鑫 黃玉波 李伯安

277100 棗莊，山東棗莊市中區(qū)醫(yī)院(周愛國)；100039 北京，解放軍302醫(yī)院(候俊、李伯安)；100015 北京，首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京地壇醫(yī)院(馮鑫、黃玉波)

·技術(shù)方法·

酒精性肝病與非酒精性脂肪肝患者血清GP73水平差異及意義

周愛國 候俊 馮鑫 黃玉波 李伯安

277100 棗莊，山東棗莊市中區(qū)醫(yī)院(周愛國)；100039 北京，解放軍302醫(yī)院(候俊、李伯安)；100015 北京，首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京地壇醫(yī)院(馮鑫、黃玉波)

目的 明確酒精性肝病(ALD)患者血清GP73變化特征及可能的臨床意義。方法 本研對(duì)32例ALD患者，40例非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者，以及40例健康對(duì)照人群進(jìn)行了觀察。血清GP73采用ELISA法檢測(cè)。結(jié)果 ALD患者(93.39±66.91 ng/ml)的血清GP73水平顯著高于NAFLD患者(55.38±21.00 ng/ml)；NAFLD患者的血清GP73也顯著高于健康對(duì)照人群(43.91±19.02 ng/ml)。以NAFLD人群為參照“健康”人群，以酒精性肝病為“患者”人群，則GP73臨床診斷ALD的ROC分析曲線下面積為0.66(95%CI：0.52～0.80，P=0.02)。以75.65 ng/ml為診斷cut-off值，則GP73診斷ALD的特異性為85.0%，敏感性為50.0%。結(jié)論 ALD患者血清GP73水平較健康對(duì)照人群及NAFLD患者顯著升高，檢測(cè)血清GP73對(duì)ALD和NAFLD之間有一定的鑒別診斷意義。

高爾基體蛋白-73(GP73)最初由Kladney等[1]從成人巨細(xì)胞性肝炎組織標(biāo)本內(nèi)克隆表達(dá)，并發(fā)現(xiàn)病毒感染可以上調(diào)該蛋白的表達(dá)。隨后進(jìn)一步的觀察提示，該蛋白是一個(gè)良好的肝癌診斷標(biāo)志物[2]。而且，肝病患者GP73對(duì)良、惡性病變也具有一定的鑒別診斷價(jià)值[3]。因此，該標(biāo)志物逐漸用于肝癌的臨床診斷和鑒別診斷。但近年來的臨床觀察結(jié)果越來越多地提示，該標(biāo)志物的血清水平與慢性肝病患者的纖維化進(jìn)程一致[4,5]。顯然，對(duì)不同慢性肝病患者血清GP73水平特征的觀察，也就成為正確詮釋血清GP73臨床意義的關(guān)鍵問題之一。雖然乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)及丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus, HCV)感染患者血清GP73的變化特征已經(jīng)基本明確，但酒精性肝病患者血清GP73的變化特征一直缺乏相應(yīng)的臨床資料。本研究對(duì)部分酒精性肝病患者的血清GP73水平進(jìn)行了觀察。

1 材料與方法

1.1 觀察對(duì)象 觀察對(duì)象為2012年6月至2014年12月間棗莊市中區(qū)醫(yī)院及同期部分北京地壇醫(yī)院就診的酒精性肝病(32例)，非酒精性脂肪肝(40例)患者，以及40例健康體檢人群。酒精性肝病入組的患者符合歐洲肝病學(xué)會(huì)2012年臨床指南的標(biāo)準(zhǔn)。非酒精性脂肪肝的診斷標(biāo)準(zhǔn)符合美國肝病學(xué)會(huì)的診斷標(biāo)準(zhǔn)。酒精性肝病、非酒精性脂肪肝的診斷標(biāo)準(zhǔn)，除符合相應(yīng)的診斷標(biāo)準(zhǔn)外，不包括以下情況的患者：①合并心、腎及呼吸功能衰竭；②合并其他明確病毒感染，如HBV，HCV等；③合并惡性腫瘤、糖尿病、自身免疫性肝病，以及其他病因明確的肝臟慢性疾病。對(duì)照組被觀察對(duì)象為健康體檢無異常者。排除性別偏倚對(duì)觀察結(jié)果的影響。

1.2 影像學(xué)檢查及生化分析 所有入組患者均接受標(biāo)準(zhǔn)超聲肝臟掃描，并排除占位性病變。采用標(biāo)準(zhǔn)酶法檢測(cè)血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine transaminase, ALT)，門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate transaminase, AST)等肝功能指標(biāo)。標(biāo)準(zhǔn)生化法分析血脂、血糖。

1.3 血清GP73檢測(cè) 血清GP73含量采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法測(cè)定。按照制造商(北京熱景生物)提供的說明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。兩組以上均數(shù)差異比較采用ANOVA分析；兩組之間均數(shù)差異采用t檢驗(yàn)。P<0.05 設(shè)置為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。以非酒精性脂肪肝及體檢人群為“健康對(duì)照”人群，以酒精性肝病為“患者”人群，GP73 診斷酒精性脂肪肝的性能采用ROC分析。GraphPad Prism 5.01軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 患者一般資料 32例酒精性肝病患者中，男性28例，平均年齡42(21～67)歲；女性4例，平均年齡41(28～49)歲；40例非酒精性脂肪肝患者中，男性34例，平均年齡38(26～53)歲；女性6例，平均年齡41(31～50)歲；40例健康體檢人群中，男性33例，平均年齡37(23～56)歲，女性7例，平均年齡39(29～55)歲。3組人群之間年齡構(gòu)成無差別(F=2.59，P=0.08)。

2.2 酒精性肝病患者血清GP73水平的差異 與預(yù)期的結(jié)果一致，ALD患者的血清ALT(126.8 ±121.8 U/L)水平顯著高于NAFLD(43.10 ± 27.27 U/L)，以及健康對(duì)照人群(38.67 ± 18.09 U/L,P<0.0001)。在此基礎(chǔ)上，我們觀察了不同被觀察對(duì)象人群之間血清GP73水平的差異。結(jié)果顯示，ALD患者(93.39±66.91 ng/ml)的血清GP73水平顯著高于NAFLD患者(55.38±21.00 ng/ml，P=0.001)；NAFLD患者的血清GP73也顯著高于健康對(duì)照人群(43.91±19.02 ng/ml，P=0.012)。與NAFLD患者(44.81±3.56 g/L)相比，ALD患者血清白蛋白(ALB)水平顯著降低(40.95±6.20 g/L)；但NAFLD與健康對(duì)照人群(44.80±4.22 g/L)之間ALB水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.99)。進(jìn)一步的分析還顯示，3組不同被觀察對(duì)象之間總膽紅素(Tbil)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=2.092，P=0.128)。

注：A，不同人群之間血清ALT水平差異；B，不同人群之間血清GP73水平差異；C，不同人群之間血清ALB水平差異；D，不同人群之間血清Tbil水平差異(ALT，谷丙轉(zhuǎn)氨酶；GP73，高爾基體蛋白73；ALB，血清白蛋白；Tbil，血清總膽紅素)圖1 不同人群之間血清標(biāo)志物差異Note: A, serum ALT activity in different populations; B, serum GP73 levels in different populations; C, serum ALB levels in different populations; D, serum Tbil levels in different populations (ALT， Alanine transaminase GP73, golgi protein 73; ALB, albumin; Tbil, total bilirubin) Fig.1 Differences of serum GP73 among the three populations

2.3 血清GP73對(duì)酒精性肝病的診斷價(jià)值 以NAFLD和健康體檢人群為參照“健康”人群，以酒精性肝病為“患者”人群，我們對(duì)GP73診斷ALD的臨床價(jià)值進(jìn)行了ROC分析。結(jié)果顯示，ROC曲線下面積AROC為0.7(95%CI：0.57～0.83，P=0.001)。根據(jù)最大似然比確定最佳診斷cut-off值。如將診斷cut-off值設(shè)定為53.15 ng/ml，則GP73診斷ALD的敏感性為66.67%，特異性為68.75%。如果以NAFLD為“健康對(duì)照”人群，則GP73臨床診斷性能ROC分析曲線下面積為0.66(95%CI：0.52～0.80，P=0.02)。以75.65 ng/ml為診斷cut-off值，則GP73診斷ALD的特異性為85.0%，敏感性為50.0%。

注：A，以NFALD患者和體檢人群(總計(jì)80例)為“健康對(duì)照”人群，以ALD為“患者”人群，GP73 診斷ALD的臨床診斷性能ROC分析曲線。B，以NFALD人群為“健康對(duì)照”人群，以ALD為“患者”人群，GP73 診斷ALD的臨床診斷性能ROC分析曲線圖2 GP73診斷ALD臨床性能分析Note: A, We set NFALD patients and examination population as “health control” population, and ALD patients as “patients”population, area of ROC analysis for GP73 diagnosing ALD. B, NFALD patients were dligned as "healthy control" population, and ALD patients as "patients" population, area of ROC analysis for GP73 diagnosing ALDFig.2 The clinical performance of GP73 for ALD diagnosis

3 討論

作為一個(gè)新型的肝癌診斷標(biāo)志物，GP73 在我國已經(jīng)廣泛應(yīng)用于肝癌的臨床診斷[6，7]。但近期我們的研究發(fā)現(xiàn)，該蛋白在肝衰竭[8]、其他病毒感染[9]，以及病毒性肝炎患者中顯著升高，并與患者肝纖維化程度有一定的相關(guān)性[10]。顯然，明確不同肝損傷的病因?qū)陀^詮釋GP73升高的臨床意義具有重要意義。但有關(guān)酒精性肝病患者血清GP73變化特征的資料一直缺乏。本研究中發(fā)現(xiàn)，與健康對(duì)照人群及NAFLD患者相比，ALD患者血清GP73顯著升高。提示，對(duì)于血清PG73升高的肝病患者，還需要考慮ALD的可能。酒精性肝病，因患者攝入的酒精多少不同，臨床上表現(xiàn)為不同程度的肝損傷。從輕微的肝細(xì)胞脂肪變，酒精性肝炎，肝纖維化，肝硬化，甚至肝癌[11]。根據(jù)患者的飲酒史，診斷一般不難。但很多情況下，患者對(duì)飲酒史有不同程度的隱瞞，給臨床診斷帶來了一定的困難[12]。根據(jù)2014年美國CDC的資料，僅15.7%的酗酒者經(jīng)常尋求醫(yī)療專業(yè)人員的幫助[13]。本病迄今為止也缺乏有效的實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)志物[14,15]。該結(jié)果提示，檢測(cè)血清GP73水平對(duì)ALD與NAFLD患者人群的鑒別有一定的診斷價(jià)值。

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(本文編輯：陳培莉)

Difference and clinical significance of serum GP73 between alcoholic liver disease and non-alcohol fatty liver disease

ZhouAiguo,HouJun,FengXin,HuangYubo,LiBoan

TheZaozhuangShizhongPeople'sHospital,Zaozhuang, 277100,China(ZhangAG);TheNo302HospitalofthePeople′sLiberationArmy,Beijing,100039,China(HouJ,LiBA);BeijingDitanHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing,100015,China(FengX,HuangYB)

LiBoan,Email：lba@263.net

Objective The present study was designed to evaluate the clinical significance of serum GP73 in patients with alcohol liver disease.Methods Thirty-two patients with alcoholic liver disease (ALD), 40 patients with non-alcohol fatty liver disease(NFLAD), and 40 apparently healthy individuals were included in this study. Results Compared with Those of healthy control population(43.91±19.02 ng/ml), the serum GP73 levels in ALD patients(93.39±66.91 ng/ml) were significantly increased, and also markedly higher than those of NFLAD patients (55.38±21.00 ng/ml). Taken the NFALD as “healthy controls” population, and ALD population as “patients”, the GP73 may be used to differentiate the ALD from NFLAD. The area of ROC analysis was 0.66(95%CI：0.52～0.80，P=0.02). We set 75.65 ng/ml as the cut-off value for ALD diagnosis, the sensitivity and specificity were 50.0% and 85.0% respectively. Conclusion Serum GP73 levels in ALD patients were significantly higher than those of NFALD patients. GP73 may be a new marker for differentiating ALD from NFALD.

Alcoholic liver disease; Non-alcohol fatty liver disease; Golgi protein 73; Differentiating diagnosis

李伯安,Email：lba@263.net

10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2017.02.017

酒精性肝病;非酒精性脂肪肝;高爾基體蛋白73; 鑒別診斷

2016-11-21)